大鼠(shu)腦(nao)鈉(na)素（BNP）試劑(ji)盒分析(xi)

大鼠腦(nao)鈉(na)素（BNP）試劑(ji)盒分析(xi)

本(ben)試劑(ji)盒僅(jin)供研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)。

檢(jian)測(ce)範(fan)圍(wei)：96T
3μg/L -80μg/L

使(shi)用(yong)目的(de)：
本(ben)大鼠(shu)腦(nao)鈉(na)素BNP試劑(ji)盒用(yong)於測(ce)定大鼠血清、血(xue)漿(jiang)及相關液體(ti)樣(yang)本(ben)中腦(nao)鈉(na)素（BNP）含量(liang)。

實驗(yan)原(yuan)理
本(ben)試劑(ji)盒應用(yong)雙(shuang)抗體(ti)夾心法測(ce)定標本(ben)中大(da)鼠腦(nao)鈉(na)素（BNP）水平(ping)。用(yong)純(chun)化的(de)大(da)鼠(shu)腦(nao)鈉(na)素（BNP）抗體(ti)包被(bei)微孔(kong)板(ban)，制成固(gu)相抗(kang)體(ti)，往(wang)包被(bei)單(dan)抗的(de)微(wei)孔(kong)中依(yi)次加(jia)入(ru)腦(nao)鈉(na)素（BNP），再與HRP標記(ji)的(de)腦(nao)鈉(na)素（BNP）抗體(ti)結合，形(xing)成抗體(ti)-抗原(yuan)-酶標抗(kang)體(ti)復合物(wu)，經過*洗(xi)滌後加底(di)物(wu)TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催(cui)化下轉化成藍色，並(bing)在酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下轉化成zui終的(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺和(he)樣(yang)品(pin)中的(de)腦(nao)鈉(na)素（BNP）呈正相關。用(yong)酶標儀(yi)在450nm波(bo)長下測(ce)定吸光度（OD值），通(tong)過(guo)標準曲(qu)線計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中大(da)鼠腦(nao)鈉(na)素（BNP）濃度。

大鼠腦(nao)鈉(na)素BNP試劑(ji)盒組(zu)成

標本(ben)要(yao)求
．標本(ben)采集(ji)後盡早(zao)進行(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文(wen)獻(xian)進行(xing)，提(ti)取(qu)後應盡(jin)快(kuai)進行(xing)實(shi)驗(yan)。若(ruo)不能馬上進行(xing)試驗(yan)，可將(jiang)標本(ben)放於-20℃保存，但(dan)應避免(mian)反復凍融(rong)
2．不能檢(jian)測(ce)含NaN3的(de)樣(yang)品(pin)，因NaN3抑(yi)制辣根(gen)過(guo)氧(yang)化物(wu)酶的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

操作步(bu)驟(zhou)
.標準品(pin)的(de)稀釋：本(ben)大鼠(shu)腦(nao)鈉(na)素BNP試劑(ji)盒提(ti)供原(yuan)倍標準品(pin)壹支(zhi)，用(yong)戶可按(an)照下列(lie)圖表在(zai)小試管(guan)中進行(xing)稀釋。

80μg/L 5號(hao)標準品(pin) 50μl的(de)原(yuan)倍標準品(pin)加入(ru)50μl標準品(pin)稀釋液
40μg/L 4號標準品(pin) 50μl的(de)5號(hao)標準品(pin)加入(ru)50μl標準品(pin)稀釋液
20μg/L 3號標準品(pin) 50μl的(de)4號(hao)標準品(pin)加入(ru)50μl標準品(pin)稀釋液
0μg/L 2號標準品(pin) 50μl的(de)3號(hao)標準品(pin)加入(ru)50μl標準品(pin)稀釋液
5μg/L  號標準品(pin) 50μl的(de)2號(hao)標準品(pin)加入(ru)50μl標準品(pin)稀釋液

2.加樣(yang)：分別(bie)設空白(bai)孔(kong)（空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)不加樣(yang)品(pin)及酶(mei)標試劑(ji)，其余各步(bu)操作(zuo)相同(tong)）、標準孔(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶(mei)標包被(bei)板(ban)上(shang)標準品(pin)準確加(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中先加樣(yang)品(pin)稀釋液40μl，然後再加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終稀釋度為5倍）。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加於酶(mei)標板(ban)孔(kong)底(di)部(bu)，盡(jin)量(liang)不觸及孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃動(dong)混勻(yun)。
3.溫育：用(yong)封板(ban)膜封板(ban)後置(zhi)37℃溫育30分鐘(zhong)。  
4.配(pei)液：將(jiang)30倍(bei)濃縮(suo)洗(xi)滌液用(yong)蒸餾水(shui)30倍稀釋後備用(yong)
5.洗(xi)滌：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封板(ban)膜，棄去(qu)液體(ti)，甩幹(gan)，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌液，靜置(zhi)30秒後棄去(qu)，如(ru)此重復5次，拍(pai)幹(gan)。
6.加酶(mei)：每(mei)孔(kong)加入(ru)酶(mei)標試劑(ji)50μl，空白(bai)孔(kong)除外(wai)。
7.溫育：操作(zuo)同(tong)3。
8.洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同(tong)5。
9.顯色(se)：大鼠腦(nao)鈉(na)素BNP每(mei)孔(kong)先加入(ru)顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光顯色(se)5分鐘(zhong).
0.終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終止反應（此時藍色(se)立轉黃色(se)）。
.測(ce)定：以(yi)空(kong)白(bai)空(kong)調(tiao)零(ling)，450nm波長依序(xu)測(ce)量(liang)各孔(kong)的(de)吸(xi)光度（OD值）。 測(ce)定應在(zai)加終(zhong)止液後5分鐘(zhong)以(yi)內(nei)進行(xing)。

操(cao)作(zuo)程序(xu)總結：
計(ji)算(suan)
以(yi)標準物(wu)的(de)濃(nong)度為橫坐標，OD值(zhi)為縱坐標，在(zai)坐標紙(zhi)上繪出(chu)標準曲(qu)線，根(gen)據樣(yang)品(pin)的(de)OD值(zhi)由(you)標準曲(qu)線查出(chu)相應的(de)濃(nong)度；再乘以(yi)稀釋倍(bei)數；或用(yong)標準物(wu)的(de)濃(nong)度與OD值(zhi)計(ji)算(suan)出(chu)標準曲(qu)線的(de)直(zhi)線回(hui)歸(gui)方(fang)程式(shi)，將(jiang)樣(yang)品(pin)的(de)OD值(zhi)代(dai)入(ru)方(fang)程式(shi)，計(ji)算(suan)出(chu)樣(yang)品(pin)濃度，再乘以(yi)稀釋倍(bei)數，即(ji)為樣(yang)品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃(nong)度。

註意事項(xiang)
．大鼠(shu)腦(nao)鈉(na)素BNP試劑(ji)盒從冷藏(zang)環(huan)境中取(qu)出(chu)應在(zai)室(shi)溫平(ping)衡5-30分鐘(zhong)後方可使(shi)用(yong)，酶標包被(bei)板(ban)開(kai)封(feng)後如(ru)未用(yong)完(wan)，板(ban)條應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封袋(dai)中保存。
2．濃洗(xi)滌液可能(neng)會有結晶析(xi)出(chu)，稀釋時(shi)可在(zai)水浴中加(jia)溫助溶(rong)，洗(xi)滌時(shi)不影響結果(guo)。
3．各步(bu)加樣(yang)均應使(shi)用(yong)加樣(yang)器，並(bing)經常(chang)校(xiao)對(dui)其準確性(xing)，以(yi)避免(mian)試驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹次加(jia)樣(yang)時間控(kong)制在5分鐘(zhong)內，如(ru)標本(ben)數量(liang)多，使(shi)用(yong)排(pai)槍加樣(yang)。
4．請(qing)每(mei)次測(ce)定的(de)同(tong)時做標準曲(qu)線，做復孔(kong)。如(ru)標本(ben)中待(dai)測(ce)物(wu)質含量(liang)過高(gao)（樣(yang)本(ben)OD值大(da)於標準品(pin)孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值(zhi)），請(qing)先用(yong)樣(yang)品(pin)稀釋液稀釋壹定倍數（n倍(bei)）後再測(ce)定，計(ji)算(suan)時請(qing)zui後乘以(yi)總(zong)稀釋倍(bei)數（×n×5）。
5．封(feng)板(ban)膜只限(xian)壹次性(xing)使(shi)用(yong)，以(yi)避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。
6．底(di)物(wu)請(qing)避光保存。
7．嚴格(ge)按(an)照說明(ming)書(shu)的(de)操(cao)作(zuo)進行(xing)，試驗(yan)結果(guo)判(pan)定(ding)必(bi)須(xu)以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀(du)數(shu)為準.
8．所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌液和(he)各種廢棄物(wu)都應按(an)傳染(ran)物(wu)處理(li)。
9．本(ben)試劑(ji)不同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分不得混用(yong)。
0.如(ru)與英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書(shu)有(you)異(yi)，以(yi)英(ying)文(wen)說(shuo)明(ming)書(shu)為準。

保存條件(jian)及有(you)效(xiao)期
．試劑(ji)盒保存：；2-8℃。
2．有效(xiao)期：6個月