大(da)鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)使用(yong)說(shuo)明

大鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)使用(yong)說(shuo)明

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)僅供研究(jiu)使用(yong)。

檢(jian)測範(fan)圍(wei)： 96T
80pg/ml-2400pg/ml

使(shi)用(yong)目(mu)的(de)：
本大(da)鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)試(shi)劑(ji)盒(he)用(yong)於(yu)測定(ding)大鼠(shu)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)及(ji)相關液體(ti)樣本(ben)中(zhong)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）含(han)量。

實驗原理(li)
本試(shi)劑(ji)盒(he)應用(yong)雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心(xin)法測定(ding)標本中(zhong)大(da)鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）水(shui)平。用(yong)純(chun)化的(de)大鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）抗(kang)體(ti)包(bao)被微(wei)孔板，制(zhi)成固相(xiang)抗(kang)體(ti)，往包(bao)被單(dan)抗的(de)微孔中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH），再(zai)與(yu)HRP 標記(ji)的(de)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）抗(kang)體(ti)結合(he)，形(xing)成抗體(ti)-抗原-酶(mei)標抗體(ti)復合(he)物(wu)，經(jing)過(guo)*洗(xi)滌(di)後(hou)加(jia)底物(wu)TMB 顯(xian)色。TMB 在(zai)HRP 酶(mei)的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成藍(lan)色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成zui終(zhong)的(de)黃色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)樣品中(zhong)的(de)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）呈(cheng)正相關。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在(zai)450nm波長下(xia)測定(ding)吸光度（OD 值），通(tong)過(guo)標準曲(qu)線(xian)計算(suan)樣品中(zhong)大(da)鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)（LH）濃(nong)度(du)。

大(da)鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成
30 倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液20ml× 瓶7 終(zhong)止(zhi)液6ml× 瓶
2 酶(mei)標試(shi)劑(ji)6ml× 瓶8 標準品（4800pg/ml） 0.5ml× 瓶
3 酶(mei)標包(bao)被板2 孔×8 條9 標準品稀釋(shi)液(ye).5ml× 瓶
4 樣品稀釋(shi)液(ye)6ml× 瓶0 說(shuo)明書(shu) 份(fen)
5 顯(xian)色劑(ji)A 液6ml× 瓶 封(feng)板膜(mo)2 張(zhang)
6 顯(xian)色劑(ji)B 液6ml×/瓶2 密封袋 個

標本要(yao)求
．標本采(cai)集(ji)後(hou)盡(jin)早(zao)進(jin)行(xing)提(ti)取，提(ti)取按(an)相(xiang)關文獻(xian)進(jin)行(xing)，提(ti)取後(hou)應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實驗。若不(bu)能(neng)馬上(shang)進(jin)行(xing)試(shi)驗(yan)，可將標本放(fang)於-20℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免(mian)反(fan)復凍(dong)融(rong)
2．不(bu)能(neng)檢(jian)測含NaN3 的(de)樣品，因NaN3 抑制(zhi)辣根過(guo)氧(yang)化物(wu)酶(mei)的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

操作步驟(zhou)
. 標準品的(de)稀釋(shi)：本(ben)大鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)供原倍(bei)標準品壹(yi)支，用(yong)戶(hu)可按(an)照(zhao)下(xia)列圖(tu)表(biao)在(zai)小(xiao)試(shi)管(guan)中(zhong)進(jin)行(xing)稀釋(shi)。
2400pg/ml 5 號標準品50μl 的(de)原倍(bei)標準品加(jia)入50μl 標準品稀釋(shi)液(ye)
200pg/ml 4 號標準品50μl 的(de)5 號標準品加(jia)入50μl 標準品稀釋(shi)液(ye)
600pg/ml 3 號標準品50μl 的(de)4 號標準品加(jia)入50μl 標準品稀釋(shi)液(ye)
300pg/ml 2 號標準品50μl 的(de)3 號標準品加(jia)入50μl 標準品稀釋(shi)液(ye)
50pg/ml 號標準品50μl 的(de)2 號標準品加(jia)入50μl 標準品稀釋(shi)液(ye)
2. 加(jia)樣：分別設空白(bai)孔（空白(bai)對照(zhao)孔不(bu)加(jia)樣品及酶標試(shi)劑(ji)，其(qi)余各步操作相同(tong)）、標準孔、待(dai)測樣品孔。在(zai)酶(mei)標包(bao)被板上標準品準確加(jia)樣50μl，待(dai)測樣品孔中(zhong)先(xian)加(jia)樣品稀釋(shi)液(ye)40μl，然後(hou)再加(jia)待(dai)測樣品0μl（樣品zui終稀釋(shi)度(du)為5 倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品加(jia)於酶標板孔底部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸及(ji)孔壁，輕(qing)輕晃(huang)動(dong)混勻。
3. 溫(wen)育(yu)：用(yong)封(feng)板膜(mo)封(feng)板後(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30 分鐘。
4. 配(pei)液(ye)：將(jiang)30 倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30 倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)備用(yong)
5. 洗(xi)滌(di)：小心(xin)揭掉封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩幹(gan)，每孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)30 秒後(hou)棄(qi)去，如(ru)此重復5 次(ci)，拍幹(gan)。
6. 加(jia)酶：每孔加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔除外。
7. 溫(wen)育(yu)：操作同3。
8. 洗(xi)滌(di)：操作同5。
9. 顯(xian)色：大鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)每孔先加(jia)入顯(xian)色劑(ji)A50μl，再加(jia)入顯(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震蕩(dang)混勻，37℃避光顯(xian)色5 分鐘.
0.終(zhong)止(zhi)：每孔加(jia)終止液(ye)50μl，終(zhong)止反(fan)應（此時藍(lan)色立轉黃色）。
.測定(ding)：以(yi)空(kong)白(bai)空調(tiao)零(ling)，450nm 波長依(yi)序測量各孔的(de)吸光度（OD 值）。測定(ding)應在(zai)加(jia)終止液(ye)後(hou)5 分鐘以(yi)內(nei)進(jin)行(xing)。

操作程序總(zong)結：
計算(suan)
以(yi)標準物(wu)的(de)濃度(du)為(wei)橫坐(zuo)標，OD 值為縱(zong)坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙上(shang)繪(hui)出標準曲(qu)線(xian)，根據(ju)樣品的(de)OD 值由標準曲(qu)線(xian)查出相(xiang)應(ying)的(de)濃度(du)；再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數；或(huo)用(yong)標準物(wu)的(de)濃度(du)與(yu)OD 值計算(suan)出標準曲(qu)線(xian)的(de)直(zhi)線(xian)回(hui)歸方程式(shi)，將(jiang)樣品的(de)OD 值代入方(fang)程式(shi)，計算(suan)出樣品濃度，再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，即(ji)為(wei)樣品的(de)實際(ji)濃(nong)度。

註(zhu)意(yi)事項(xiang)
．大鼠(shu)促黃體(ti)生成(cheng)素(su)試(shi)劑(ji)盒(he)從冷(leng)藏(zang)環境(jing)中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室溫(wen)平(ping)衡(heng)5-30 分鐘後(hou)方可(ke)使(shi)用(yong)，酶(mei)標包(bao)被板開封後(hou)如未用(yong)完(wan)，板條應(ying)裝(zhuang)入密封袋中(zhong)保存(cun)。
2．濃(nong)洗(xi)滌(di)液可能(neng)會(hui)有(you)結晶析出，稀(xi)釋(shi)時(shi)可在(zai)水(shui)浴中(zhong)加(jia)溫(wen)助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時不(bu)影響結果(guo)。
3．各(ge)步加(jia)樣均(jun)應(ying)使用(yong)加(jia)樣器(qi)，並(bing)經常(chang)校(xiao)對其(qi)準確(que)性，以(yi)避(bi)免(mian)試(shi)驗(yan)誤差。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時(shi)間(jian)控(kong)制(zhi)在(zai)5 分鐘內(nei)，如標本數量多，使用(yong)排(pai)槍(qiang)加(jia)樣。
4．請每次(ci)測定(ding)的(de)同時(shi)做(zuo)標準曲(qu)線(xian)，做(zuo)復孔。如標本中(zhong)待(dai)測物(wu)質(zhi)含(han)量過(guo)高(gao)（樣本(ben)OD 值大於標準品孔*孔的(de)OD 值），請先用(yong)樣品稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹(yi)定(ding)倍(bei)數（n 倍(bei)）後(hou)再測定(ding)，計算(suan)時請zui後(hou)乘以(yi)總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。
5．封(feng)板膜(mo)只(zhi)限壹(yi)次(ci)性使(shi)用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。
6．底(di)物(wu)請避光保存(cun)。
7．嚴格(ge)按照(zhao)說明書(shu)的(de)操作進(jin)行(xing)，試(shi)驗(yan)結果(guo)判(pan)定(ding)必須(xu)以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀數為(wei)準(zhun).
8．所(suo)有(you)樣品，洗(xi)滌(di)液和各(ge)種廢(fei)棄(qi)物(wu)都(dou)應按(an)傳染物(wu)處(chu)理(li)。
9．本(ben)試(shi)劑(ji)不(bu)同批(pi)號組(zu)分不(bu)得混用(yong)。
0.如(ru)與(yu)英(ying)文說(shuo)明書(shu)有(you)異(yi)，以(yi)英(ying)文說(shuo)明書(shu)為(wei)準(zhun)。

保存(cun)條件(jian)及(ji)有(you)效期(qi)
．試(shi)劑(ji)盒(he)保存(cun)：；2-8℃。
2．有(you)效期(qi)：6 個月