人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）試劑盒使用說明(ming)

人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）試劑盒使用說明(ming)

本(ben)試劑盒僅供(gong)研(yan)究(jiu)使用。

檢測(ce)範(fan)圍(wei)：96T

20μg/L -600μg/L

使用目的(de)：

本(ben)人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白HbCO試劑盒用(yong)於(yu)測(ce)定人血清、血漿及相關液體樣本(ben)中(zhong)壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）含(han)量。

實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)

本試劑盒應用雙抗體夾心法(fa)測(ce)定標(biao)本(ben)中(zhong)人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）水(shui)平(ping)。用純化(hua)的(de)人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）抗體包被微(wei)孔板(ban)，制成固相(xiang)抗體，往包被單抗的(de)微(wei)孔中(zhong)依次加入壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO），再(zai)與HRP標(biao)記(ji)的(de)壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）抗體結(jie)合，形(xing)成抗體-抗原(yuan)-酶標(biao)抗體復合物，經過(guo)*洗滌(di)後(hou)加底物TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶的(de)催化下(xia)轉化(hua)成藍色，並(bing)在(zai)酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)成zui終的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)樣品(pin)中(zhong)的(de)壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）呈正相關。用(yong)酶標(biao)儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定吸光(guang)度(du)（OD值），通過(guo)標(biao)準曲線(xian)計(ji)算樣品(pin)中(zhong)人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白（HbCO）濃度。

人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白HbCO試劑盒組(zu)成

標(biao)本(ben)要求

．標(biao)本(ben)采集後(hou)盡(jin)早進(jin)行(xing)提取(qu)，提取(qu)按(an)相關文獻進(jin)行(xing)，提取(qu)後(hou)應盡(jin)快(kuai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若不能馬上(shang)進(jin)行(xing)試驗(yan)，可(ke)將標(biao)本(ben)放(fang)於-20℃保存，但(dan)應避免(mian)反復凍(dong)融(rong)

2．不能檢(jian)測(ce)含(han)NaN3的(de)樣品(pin)，因NaN3抑(yi)制(zhi)辣根(gen)過(guo)氧化(hua)物酶的(de)（HRP）活(huo)性。

操作步驟(zhou)

.標(biao)準品的(de)稀(xi)釋(shi)：本人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白HbCO試劑盒提供(gong)原(yuan)倍標(biao)準品壹(yi)支，用(yong)戶可(ke)按(an)照(zhao)下(xia)列(lie)圖表在(zai)小試管(guan)中(zhong)進(jin)行(xing)稀釋(shi)。

2.加樣：分(fen)別(bie)設(she)空(kong)白孔（空白(bai)對照孔不(bu)加樣品(pin)及酶標(biao)試劑，其余(yu)各(ge)步操作相同(tong)）、標(biao)準孔、待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)標(biao)準品準確加樣50μl，待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加待(dai)測(ce)樣品(pin)0μl（樣品(pin)zui終稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加樣將樣品(pin)加於酶標(biao)板(ban)孔底部(bu)，盡(jin)量不觸及孔壁，輕輕晃動混(hun)勻(yun)。

3.溫育(yu)：用(yong)封(feng)板(ban)膜封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi)37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。  

4.配液：將30倍濃縮洗(xi)滌液用蒸餾水(shui)30倍稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用

5.洗(xi)滌：小心(xin)揭掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液體，甩幹，每(mei)孔(kong)加滿洗(xi)滌(di)液，靜置(zhi)30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，如此(ci)重(zhong)復5次(ci)，拍幹(gan)。

6.加酶：每(mei)孔加入酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白孔(kong)除(chu)外(wai)。

7.溫育(yu)：操作同3。

8.洗(xi)滌：操作同5。

9.顯色：人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白HbCO每孔先(xian)加入顯色劑A50μl，再(zai)加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩(dang)混勻(yun)，37℃避光(guang)顯色5分(fen)鐘(zhong).

0.終止(zhi)：每孔(kong)加終止(zhi)液50μl，終止(zhi)反應（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃(huang)色）。

.測(ce)定：以(yi)空白空調零，450nm波(bo)長(chang)依序測(ce)量各孔(kong)的(de)吸光(guang)度(du)（OD值）。 測(ce)定應在(zai)加終止(zhi)液後(hou)5分鐘(zhong)以(yi)內進(jin)行(xing)。

操作程序(xu)總結(jie)：
計(ji)算

以(yi)標(biao)準物的(de)濃度為橫坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)，在(zai)坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪出(chu)標(biao)準曲線(xian)，根據(ju)樣品(pin)的(de)OD值(zhi)由標(biao)準曲線(xian)查(zha)出相(xiang)應的(de)濃度；再(zai)乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數；或用標(biao)準物的(de)濃度與OD值(zhi)計(ji)算出(chu)標(biao)準曲線(xian)的(de)直(zhi)線(xian)回(hui)歸(gui)方(fang)程式，將樣品(pin)的(de)OD值(zhi)代(dai)入方(fang)程式，計(ji)算出(chu)樣品(pin)濃度，再(zai)乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數，即為樣品(pin)的(de)實(shi)際(ji)濃度。

註意(yi)事(shi)項

．人壹(yi)氧化(hua)碳血紅蛋白HbCO試劑盒從冷(leng)藏(zang)環境中(zhong)取出(chu)應在(zai)室溫平(ping)衡(heng)5-30分(fen)鐘後(hou)方(fang)可(ke)使用，酶標(biao)包(bao)被板(ban)開封(feng)後(hou)如未用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應裝入(ru)密封(feng)袋(dai)中(zhong)保存。

2．濃洗滌(di)液可(ke)能(neng)會(hui)有結(jie)晶析出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在(zai)水(shui)浴中(zhong)加溫助(zhu)溶，洗(xi)滌時(shi)不影響結(jie)果。

3．各步(bu)加樣均(jun)應使用加樣器(qi)，並(bing)經常(chang)校對(dui)其準確性(xing)，以(yi)避免(mian)試驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹(yi)次加樣時(shi)間(jian)控制在(zai)5分鐘內，如標(biao)本(ben)數量多(duo)，使用排槍加樣。

4．請(qing)每(mei)次(ci)測(ce)定的(de)同(tong)時(shi)做標(biao)準曲線(xian)，做復孔(kong)。如標(biao)本(ben)中(zhong)待(dai)測(ce)物質含(han)量過(guo)高（樣本(ben)OD值(zhi)大(da)於(yu)標(biao)準品孔(kong)*孔的(de)OD值(zhi)），請(qing)先(xian)用樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液稀釋(shi)壹(yi)定倍數（n倍）後(hou)再(zai)測(ce)定，計(ji)算時(shi)請(qing)zui後(hou)乘以(yi)總稀釋(shi)倍數（×n×5）。

5．封(feng)板(ban)膜只限(xian)壹(yi)次性(xing)使用，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)。

6．底物請(qing)避光(guang)保存。

7．嚴(yan)格按照說(shuo)明(ming)書的(de)操作進(jin)行(xing)，試驗(yan)結(jie)果判定必須以(yi)酶標(biao)儀讀(du)數為準.

8．所有樣品(pin)，洗(xi)滌(di)液和各種廢棄(qi)物都應按傳染(ran)物處(chu)理(li)。

9．本試劑不(bu)同批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不(bu)得混用。

0.如與英(ying)文說明(ming)書有異，以(yi)英(ying)文說明(ming)書為準。

保存條(tiao)件(jian)及有效(xiao)期

．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效(xiao)期：6個(ge)月