人可溶性(xing)Endoglin試(shi)劑(ji)盒使(shi)用(yong)說(shuo)明

人可溶性(xing)Endoglin試(shi)劑(ji)盒使(shi)用(yong)說(shuo)明

本(ben)試劑(ji)盒僅供(gong)研(yan)究使(shi)用。

檢測範圍：96T
.5ng/ml -40 ng/ml

使用(yong)目的(de)：
本人可溶性(xing)Endoglin試(shi)劑(ji)盒用(yong)於(yu)測定人血(xue)清(qing)、血(xue)漿(jiang)及(ji)相(xiang)關液(ye)體(ti)樣本中(zhong)可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05）含量(liang)。

實驗原(yuan)理(li)
本(ben)試(shi)劑(ji)盒應(ying)用人可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05）水平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)人可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05）抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)，制成(cheng)固(gu)相(xiang)抗體(ti)，往(wang)包(bao)被(bei)單抗的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加(jia)入(ru)可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05），再與HRP標記(ji)的(de)可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05）抗(kang)體(ti)結合(he)，形成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-酶標抗(kang)體(ti)復合(he)物(wu)，經(jing)過(guo)*洗滌(di)後(hou)加(jia)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在HRP酶的(de)催化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色(se)，並(bing)在酸的(de)作用(yong)下轉化(hua)成(cheng)zui終的(de)黃(huang)色(se)。顏色(se)的(de)深淺(qian)和樣品中(zhong)的(de)可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05）呈(cheng)正相(xiang)關。用(yong)酶標儀(yi)在(zai)450nm波長(chang)下測定吸光度（OD值(zhi)），通(tong)過(guo)標準(zhun)曲(qu)線計算樣品中(zhong)人可溶性(xing)Endoglin（ENG/sCD05）濃(nong)度。

人可溶性(xing)Endoglin試(shi)劑(ji)盒組(zu)成(cheng)

標本(ben)要求(qiu)
．人可溶性(xing)Endoglin標本(ben)采(cai)集後盡早進(jin)行提取，提取按(an)相(xiang)關文(wen)獻進(jin)行，提取後(hou)應(ying)盡快進(jin)行實驗。若(ruo)不能馬(ma)上進(jin)行試(shi)驗，可(ke)將標本(ben)放於(yu)-20℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避免(mian)反(fan)復凍融
2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因(yin)NaN3抑制辣根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)（HRP）活(huo)性。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)
.標準(zhun)品的(de)稀釋：本試劑(ji)盒提供(gong)原(yuan)倍(bei)標準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用戶(hu)可按照下(xia)列(lie)圖表(biao)在(zai)小(xiao)試管中進(jin)行稀釋。

2.加(jia)樣：分別設空(kong)白(bai)孔(kong)（空白(bai)對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣品及(ji)酶標試(shi)劑(ji)，其余(yu)各(ge)步(bu)操(cao)作(zuo)相(xiang)同）、標準(zhun)孔、待測樣品孔(kong)。在酶標包(bao)被(bei)板(ban)上標準(zhun)品準(zhun)確加(jia)樣50μl，待測樣品孔(kong)中先(xian)加(jia)樣品稀釋液(ye)40μl，然後(hou)再加(jia)待測樣品0μl（樣品zui終(zhong)稀釋度為5倍(bei)）。加(jia)樣將樣品加(jia)於(yu)酶標板(ban)孔(kong)底部(bu)，盡量(liang)不觸(chu)及(ji)孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混(hun)勻。
3.溫育(yu)：人可溶性(xing)Endoglin用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置37℃溫育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。  
4.配(pei)液(ye)：將30倍(bei)濃(nong)縮洗滌(di)液(ye)用蒸(zheng)餾水30倍(bei)稀釋後備用(yong)
5.洗滌(di)：小(xiao)心揭(jie)掉封(feng)板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液(ye)，靜置30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，如此重復5次(ci)，拍(pai)幹。
6.加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶標試(shi)劑(ji)50μl，空白(bai)孔(kong)除外。
7.溫(wen)育(yu)：操(cao)作(zuo)同3。
8.洗滌(di)：操(cao)作(zuo)同5。
9.顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色(se)5分鐘(zhong).
0.終止：每(mei)孔(kong)加(jia)終(zhong)止液(ye)50μl，終止(zhi)反(fan)應(ying)（此時藍(lan)色(se)立(li)轉黃(huang)色(se)）。
.測定：以(yi)空(kong)白(bai)空(kong)調零，450nm波長(chang)依序(xu)測量各(ge)孔(kong)的(de)吸光度（OD值(zhi)）。 測定應(ying)在加(jia)終(zhong)止液(ye)後5分(fen)鐘以(yi)內(nei)進(jin)行。

操(cao)作(zuo)程(cheng)序(xu)總(zong)結：
.準(zhun)備試(shi)劑(ji)，樣品和標準(zhun)品
2.加(jia)入(ru)準(zhun)備好(hao)的(de)樣品和標準(zhun)品，37℃反(fan)應(ying)30分鐘(zhong)
3.洗板(ban)5次(ci)，加(jia)入(ru)酶標試(shi)劑(ji)，37℃反(fan)應(ying)30分鐘(zhong)
4.洗板(ban)5次(ci)，加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)液(ye)A、B，37℃反(fan)應(ying)0分鐘(zhong)
5.加(jia)入(ru)終止(zhi)液(ye)
6.5分鐘(zhong)之(zhi)內(nei)度OD值(zhi)
7.計算

計算
人可溶性(xing)Endoglin以(yi)標準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度為橫(heng)坐標，OD值(zhi)為縱坐標，在(zai)坐標紙(zhi)上繪出(chu)標準(zhun)曲(qu)線，根據樣品的(de)OD值(zhi)由標準(zhun)曲(qu)線查(zha)出(chu)相(xiang)應(ying)的(de)濃(nong)度；再乘(cheng)以(yi)稀釋倍數(shu)；或用(yong)標準(zhun)物(wu)的(de)濃(nong)度與OD值(zhi)計算出(chu)標準(zhun)曲(qu)線的(de)直(zhi)線回歸(gui)方(fang)程(cheng)式，將樣品的(de)OD值(zhi)代入(ru)方(fang)程(cheng)式，計算出(chu)樣品濃(nong)度，再乘(cheng)以(yi)稀釋倍數(shu)，即為樣品的(de)實際濃(nong)度。

註意(yi)事項
．試劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏環境(jing)中取出(chu)應(ying)在室溫(wen)平(ping)衡(heng)5-30分(fen)鐘(zhong)後(hou)方(fang)可使(shi)用，酶標包(bao)被(bei)板(ban)開封(feng)後(hou)如未用完(wan)，板條(tiao)應(ying)裝入密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存。
2．濃(nong)洗滌(di)液(ye)可能(neng)會有(you)結晶(jing)析(xi)出(chu)，稀釋時可(ke)在(zai)水浴(yu)中加(jia)溫(wen)助溶，洗滌(di)時不影(ying)響(xiang)結果(guo)。
3．各(ge)步(bu)加(jia)樣均應(ying)使用(yong)加(jia)樣器(qi)，並(bing)經常(chang)校(xiao)對(dui)其準(zhun)確性(xing)，以(yi)避免(mian)試驗誤差(cha)。壹次(ci)加(jia)樣時間控制在(zai)5分(fen)鐘內(nei)，如標本(ben)數(shu)量多(duo)，使用(yong)排(pai)*加(jia)樣。
4．請每(mei)次(ci)測定的(de)同時做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線，做復孔(kong)。如標本(ben)中(zhong)待測物(wu)質(zhi)含量(liang)過(guo)高（樣本OD值(zhi)大(da)於(yu)標準(zhun)品孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值(zhi)），請先(xian)用樣品稀釋液(ye)稀釋壹定倍數(shu)（n倍）後(hou)再測定，計算時請(qing)zui後(hou)乘(cheng)以(yi)總(zong)稀釋倍數(shu)（×n×5）。
5．封(feng)板(ban)膜(mo)只(zhi)限(xian)壹次(ci)性(xing)使用(yong)，以(yi)避免(mian)交(jiao)叉汙染(ran)。
6．底(di)物(wu)請(qing)避光保(bao)存。
7．嚴(yan)格(ge)按(an)照說(shuo)明書的(de)操(cao)作(zuo)進(jin)行，試(shi)驗結果(guo)判(pan)定必須(xu)以(yi)酶標儀(yi)讀(du)數(shu)為準(zhun).
8．人可溶性(xing)Endoglin所有(you)樣品，洗滌(di)液(ye)和各(ge)種(zhong)廢棄物(wu)都(dou)應(ying)按傳(chuan)染物(wu)處(chu)理(li)。
9．本(ben)試(shi)劑(ji)不同批號組分(fen)不得混(hun)用。
0.如與英(ying)文(wen)說(shuo)明書有(you)異，以(yi)英(ying)文(wen)說(shuo)明書為準(zhun)。