人白細(xi)胞介素-8（IL-8）試(shi)劑(ji)盒使(shi)用說明

人(ren)白(bai)細(xi)胞介素-8(IL-8)試(shi)劑(ji)盒使(shi)用說明

本(ben)試(shi)劑(ji)僅(jin)供研(yan)究使用 標(biao)本(ben)：血清或血漿

試(shi)驗(yan)原理：
人(ren)白(bai)細(xi)胞介素IL-8試(shi)劑(ji)盒是(shi)固相(xiang)夾(jia)心法(fa)酶聯免(mian)疫吸(xi)附實(shi)驗(yan)（ELISA）.已知(zhi)IL-8濃(nong)度的標(biao)準品(pin)、未知(zhi)濃(nong)度的樣品(pin)加入(ru)微孔酶(mei)標(biao)板內(nei)進(jin)行(xing)檢測(ce)。先將(jiang)IL-8和標(biao)記的抗體(ti)同時(shi)溫(wen)育。洗滌後，加入(ru)親(qin)和素標(biao)記過(guo)的HRP。再經(jing)過(guo)溫(wen)育和洗滌，去除未結(jie)合的酶結(jie)合物(wu)，然後加入(ru)底(di)物A、B，和酶結(jie)合物(wu)同時(shi)作用。產生顏色。顏色(se)的深淺和樣品(pin)中IL-8的濃(nong)度呈比(bi)例(li)關(guan)系(xi)。

自(zi)備材料(liao)
蒸餾水。
加樣器(qi)：5ul、0ul、50ul、00ul、200、500ul、000ul。
振(zhen)蕩器(qi)及磁(ci)力攪拌器(qi)等(deng)。

安全性(xing)
避免(mian)直接(jie)接(jie)觸(chu)終止液和底(di)物A、B。壹(yi)旦接觸(chu)到這些(xie)液體(ti)，請(qing)盡快用水沖(chong)洗。
實(shi)驗(yan)中不(bu)要吃喝(he)、抽煙(yan)或使(shi)用化妝(zhuang)品。
不(bu)要用嘴吸(xi)取(qu)試(shi)劑(ji)盒裏(li)的任(ren)何成份。

操作註意(yi)事(shi)項(xiang)
試(shi)劑(ji)應(ying)按標(biao)簽(qian)說明書(shu)儲(chu)存，使(shi)用前(qian)恢復到室溫(wen)。稀(xi)稀過(guo)後的標(biao)準品(pin)應(ying)丟棄，不(bu)可(ke)保存。
實(shi)驗(yan)中不(bu)用的板條應(ying)立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋(dai)中，密封保存，以免(mian)變(bian)質。
不(bu)用的其它試(shi)劑(ji)應(ying)包裝(zhuang)好或(huo)蓋(gai)好。不(bu)同批號的試(shi)劑(ji)不(bu)要混用。保質前(qian)使用。
使用壹次性(xing)的吸頭(tou)以免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸取(qu)終止(zhi)液和底(di)物A、B液時(shi)，避免(mian)使用帶(dai)金屬(shu)部(bu)分(fen)的加樣器(qi)。
使(shi)用幹凈(jing)的塑料(liao)容(rong)器(qi)配(pei)置洗滌液。使用前(qian)充(chong)分(fen)混勻(yun)試(shi)劑(ji)盒裏(li)的各種成份(fen)及樣品(pin)。
洗滌酶(mei)標(biao)板時(shi)應(ying)充(chong)分(fen)拍(pai)幹，不要將吸(xi)水紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)酶(mei)標(biao)反(fan)應(ying)孔中吸(xi)水。
底(di)物A應(ying)揮發，避免(mian)長時(shi)間(jian)打開蓋(gai)子。底(di)物B對(dui)光敏感(gan)，避免(mian)長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於光(guang)下(xia)。避免(mian)用手(shou)接(jie)觸(chu)，有毒。實(shi)驗(yan)完成(cheng)後應(ying)立(li)即(ji)讀取(qu)OD值(zhi)。
加入(ru)試(shi)劑(ji)的順序應壹(yi)致(zhi)，以保證所有(you)反(fan)應(ying)板孔溫(wen)育的時(shi)間(jian)壹(yi)樣。
人(ren)白(bai)細(xi)胞介素IL-8按照(zhao)說明書(shu)中標(biao)明的時(shi)間(jian)、加液的量(liang)及順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育操作。

樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理及保存方法
血清-----操作過(guo)程中避免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激(ji)。使用不含(han)熱(re)原和內(nei)毒(du)素的試(shi)管(guan)。收(shou)集血液後，000×g離(li)心0分(fen)鐘將(jiang)血清和紅細(xi)胞迅(xun)速小心地分(fen)離(li)。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝(gan)素血漿可(ke)用於檢測(ce)。000×g離(li)心30分(fen)鐘去除顆粒(li)。
細(xi)胞上清液---000×g離(li)心0分(fen)鐘去除顆粒(li)和聚合物(wu)。
保存------如(ru)果(guo)樣品(pin)不(bu)立即(ji)使(shi)用，應將(jiang)其分(fen)成小部(bu)分(fen)-70 ℃保存，避免(mian)反(fan)復冷(leng)凍。盡可(ke)能(neng)的不要使用溶血或高(gao)血脂(zhi)血。如(ru)果(guo)血清中大(da)量(liang)顆粒(li)，檢測(ce)前(qian)先離(li)心或(huo)過(guo)濾。不要在37℃或更(geng)高(gao)的溫(wen)度加熱(re)解凍(dong)。應(ying)在室溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確(que)保樣品(pin)均勻地充(chong)分(fen)解凍(dong)。

試(shi)劑(ji)的準備(bei)
標(biao)準品(pin)：標(biao)準品(pin)的系(xi)列(lie)稀(xi)釋(shi)應(ying)在實(shi)驗(yan)時(shi)準備(bei)，不(bu)能儲(chu)存。稀釋(shi)前(qian)將標(biao)準品(pin)振(zhen)蕩混(hun)勻。
洗滌緩沖(chong)液（50×）的稀釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水50倍稀(xi)釋(shi)。

操作步(bu)驟(zhou)
使(shi)用前(qian)，將所有(you)試(shi)劑(ji)充(chong)分(fen)混勻(yun)。不(bu)要使液體(ti)產生大(da)量(liang)的泡沫，以免(mian)加樣時(shi)加入(ru)大(da)量(liang)的氣泡，產生加樣上的誤(wu)差。
根(gen)據(ju)待(dai)測(ce)樣品(pin)數(shu)量(liang)加上標(biao)準品(pin)的數(shu)量(liang)決(jue)定(ding)所需(xu)的板條數(shu)。每個(ge)標(biao)準品(pin)和空白(bai)孔(kong)建(jian)議做復孔。每個(ge)樣品(pin)根(gen)據(ju)自(zi)己的數(shu)量(liang)來定，能(neng)使用復孔的盡量(liang)做復孔。
加入(ru)稀(xi)釋(shi)好後的標(biao)準品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔、加入(ru)待(dai)測樣品(pin)50ul於反(fan)應(ying)孔內(nei)。立(li)即(ji)加入(ru)50ul的標(biao)記的抗體(ti)。蓋(gai)上膜板(ban)，輕輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育小時(shi)。
甩(shuai)去孔內(nei)液體(ti)，每孔(kong)加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹。重(zhong)復此操作3次。如(ru)果(guo)用洗板機洗滌，洗滌次數(shu)增加壹(yi)次。
每孔(kong)加入(ru)80ul的親(qin)和鏈酶(mei)素-HRP，輕輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。
甩(shuai)去孔內(nei)液體(ti)，每孔(kong)加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙(zhi)拍(pai)幹。重(zhong)復此操作3次。如(ru)果(guo)用洗板機洗滌，洗滌次數(shu)增加壹(yi)次。
每孔(kong)加入(ru)底(di)物A、B各(ge)50ul，輕輕振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育0分(fen)鐘。避免(mian)光照(zhao)。
人(ren)白(bai)細(xi)胞介素IL-8取(qu)出(chu)酶標(biao)板，迅(xun)速加入(ru)50ul終(zhong)止液，加入(ru)終(zhong)止液後應(ying)立(li)即(ji)測(ce)定結(jie)果(guo)。
在450nm波長處(chu)測定各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。

局(ju)限
6號標(biao)準品(pin)以上的結(jie)果(guo)為非線(xian)性(xing)的，根據(ju)此標(biao)準曲(qu)線(xian)無法得到的結(jie)果(guo)。

試(shi)劑(ji)盒性(xing)能(neng)
. 靈(ling)敏度：zui小的檢測(ce)濃(nong)度小於號標(biao)準品(pin)。稀(xi)釋(shi)度的線性(xing)。樣品(pin)線(xian)性(xing)回(hui)歸與(yu)預期(qi)濃(nong)度相關(guan)系(xi)數(shu)R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特(te)異性(xing)：不(bu)與(yu)其(qi)它細(xi)胞因子反(fan)應(ying)。
3. 重(zhong)復性(xing)：板(ban)內(nei)、板(ban)間(jian)變(bian)異系(xi)數(shu)均小於0%。

結(jie) 果(guo) 判 斷 與(yu) 分(fen) 析
、儀(yi)器(qi)值(zhi)：於波(bo)長(chang)450nm的酶標(biao)儀(yi)上讀取(qu)各孔(kong)的OD值(zhi)

2、以吸(xi)光(guang)度OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐標(biao)（Y），相應(ying)的IL-8標(biao)準品(pin)濃(nong)度為橫(heng)坐標(biao)（X），做得相應(ying)的曲(qu)線(xian)，樣品(pin)的IL-8含量(liang)可(ke)根(gen)據(ju)其(qi)OD值(zhi)由(you)標(biao)準曲(qu)線(xian)換(huan)算(suan)出(chu)相應的濃(nong)度。

3、檢測(ce)值(zhi)範(fan)圍(wei)：0-800pg/ml

4、敏感(gan)度： .0 pg/ml