人(ren)UL6結合(he)蛋白-2（ULBP-2）試劑盒(he)說明(ming)

人(ren)UL6結合(he)蛋白-2（ULBP-2）試劑盒(he)說明(ming)

試驗(yan)原理：
人UL6結合(he)蛋白ULBP-2試劑盒(he)是(shi)固(gu)相(xiang)夾(jia)心法(fa)酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附實驗(yan)（ELISA）.已(yi)知ULBP-2濃度的(de)標準品(pin)、未(wei)知濃度的(de)樣(yang)品(pin)加(jia)入(ru)微孔(kong)酶(mei)標(biao)板內(nei)進行(xing)檢測(ce)。先將ULBP-2和標記的(de)抗體同(tong)時溫育。洗(xi)滌(di)後，加(jia)入(ru)親和素標記過(guo)的(de)HRP。再經(jing)過(guo)溫(wen)育和洗(xi)滌(di)，去除(chu)未結合(he)的(de)酶結合(he)物(wu)，然(ran)後加(jia)入(ru)底物(wu)A、B，和酶結合(he)物(wu)同(tong)時作(zuo)用。產生顏色(se)。顏(yan)色的(de)深淺和樣(yang)品(pin)中ULBP-2的(de)濃度呈(cheng)比例關系(xi)。

自備(bei)材(cai)料
蒸餾(liu)水(shui)。
加(jia)樣(yang)器：5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。
振(zhen)蕩器及(ji)磁(ci)力(li)攪拌(ban)器等(deng)。

安全性
避(bi)免(mian)直(zhi)接(jie)接(jie)觸(chu)終止液和底物A、B。壹旦接(jie)觸(chu)到這(zhe)些液(ye)體(ti)，請盡(jin)快(kuai)用(yong)水(shui)沖(chong)洗(xi)。
實驗(yan)中不(bu)要(yao)吃(chi)喝、抽煙(yan)或(huo)使用(yong)化(hua)妝(zhuang)品(pin)。
不(bu)要(yao)用(yong)嘴吸取(qu)試劑盒(he)裏(li)的(de)任何(he)成(cheng)份(fen)。

操作(zuo)註意(yi)事(shi)項(xiang)
試劑應(ying)按標(biao)簽說明(ming)書儲存(cun)，使用(yong)前(qian)恢復(fu)到(dao)室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的(de)標準品(pin)應(ying)丟(diu)棄，不(bu)可(ke)保存(cun)。
實驗(yan)中不(bu)用(yong)的(de)板條應立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝袋中，密(mi)封(feng)保存(cun)，以免(mian)變(bian)質(zhi)。
不(bu)用(yong)的(de)其它(ta)試劑應(ying)包(bao)裝好或蓋(gai)好。不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)試劑不(bu)要(yao)混(hun)用。保質(zhi)前(qian)使用(yong)。
使用(yong)壹次(ci)性的(de)吸頭以免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸取(qu)終止液和底物A、B液時(shi)，避(bi)免(mian)使用(yong)帶金(jin)屬部(bu)分(fen)的(de)加(jia)樣(yang)器。
使用(yong)幹凈(jing)的(de)塑料容(rong)器配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液。使用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)混勻(yun)試劑盒(he)裏(li)的(de)各種(zhong)成(cheng)份(fen)及樣(yang)品(pin)。
洗(xi)滌(di)酶標(biao)板時應(ying)充(chong)分(fen)拍幹，不(bu)要(yao)將吸水(shui)紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)酶標(biao)反(fan)應(ying)孔中吸水(shui)。
底(di)物(wu)A應(ying)揮(hui)發，避(bi)免(mian)長時間(jian)打開蓋(gai)子(zi)。底(di)物(wu)B對(dui)光(guang)敏感，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴露於光(guang)下(xia)。避(bi)免(mian)用手接觸(chu)，有毒。實驗(yan)完成(cheng)後(hou)應立(li)即(ji)讀取(qu)OD值。
加(jia)入(ru)試劑的(de)順序應(ying)壹致(zhi)，以保證所有反應板孔溫(wen)育的(de)時間壹樣(yang)。
按照(zhao)說明(ming)書中標(biao)明(ming)的(de)時間、加(jia)液的(de)量及順(shun)序(xu)進行(xing)溫育操作(zuo)。

人UL6結合(he)蛋白ULBP-2樣(yang)品(pin)收(shou)集、處理及保存(cun)方法(fa)
血清-----操作(zuo)過程中避(bi)免(mian)任何(he)細(xi)胞刺(ci)激(ji)。使用(yong)不(bu)含熱原和內(nei)毒素的(de)試管(guan)。收(shou)集血液後(hou)，000×g離心(xin)0分(fen)鐘將血清和紅細胞迅速(su)小(xiao)心(xin)地分(fen)離。
血漿-----EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽(yan)、肝(gan)素血漿可用(yong)於檢測(ce)。000×g離心30分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒。
細胞上清(qing)液(ye)---000×g離(li)心(xin)0分(fen)鐘去除(chu)顆(ke)粒和聚(ju)合(he)物(wu)。
組(zu)織(zhi)勻(yun)漿-----將組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適量(liang)生理鹽水(shui)搗(dao)碎(sui)。000×g離(li)心(xin)0分(fen)鐘，取(qu)上(shang)清液(ye)
保存(cun)------如(ru)果樣(yang)品(pin)不(bu)立(li)即(ji)使用(yong)，應將其分(fen)成(cheng)小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保存(cun)，避(bi)免(mian)反復(fu)冷凍。盡(jin)可(ke)能(neng)的(de)不(bu)要(yao)使用(yong)溶(rong)血或高(gao)血脂血。如(ru)果血清中大(da)量(liang)顆(ke)粒，檢(jian)測(ce)前(qian)先離(li)心(xin)或(huo)過濾。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或更高(gao)的(de)溫度加(jia)熱解(jie)凍。應在室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍並確(que)保樣(yang)品(pin)均(jun)勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解(jie)凍。

操作(zuo)步驟(zhou)
使用(yong)前(qian)，將所有試劑充(chong)分(fen)混勻(yun)。不(bu)要(yao)使液(ye)體產生大量(liang)的(de)泡(pao)沫，以(yi)免加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大量(liang)的(de)氣泡(pao)，產生加(jia)樣(yang)上(shang)的(de)誤(wu)差(cha)。
根(gen)據(ju)待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加(jia)上標準品(pin)的(de)數量決(jue)定(ding)所需(xu)的(de)板條數。每(mei)個(ge)標準品(pin)和空白孔建議做(zuo)復孔。每(mei)個(ge)樣(yang)品(pin)根(gen)據(ju)自己的(de)數量來(lai)定，能(neng)使用(yong)復孔的(de)盡量做(zuo)復(fu)孔。標(biao)本(ben)用標本(ben)稀(xi)釋(shi)液：稀(xi)釋(shi)後加(jia)入(ru)50ul於反應孔內(nei)。
加(jia)入(ru)稀(xi)釋(shi)好後的(de)標準品(pin)50ul於反應孔、加(jia)入(ru)待測(ce)樣(yang)品(pin)50ul於反應孔內(nei)。立即(ji)加(jia)入(ru)50ul的(de)標記的(de)抗體。蓋(gai)上膜板，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育小時。
甩去(qu)孔(kong)內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復此操作(zuo)3次。如(ru)果用(yong)洗(xi)板機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次(ci)。
每孔加(jia)入(ru)80ul的(de)親和鏈酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。
甩去(qu)孔(kong)內(nei)液體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液，振(zhen)蕩30秒(miao)，甩去(qu)洗(xi)滌(di)液，用(yong)吸水(shui)紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重復此操作(zuo)3次。如(ru)果用(yong)洗(xi)板機洗(xi)滌(di)，洗(xi)滌(di)次數(shu)增(zeng)加(jia)壹次(ci)。
每孔加(jia)入(ru)底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫(wen)育0分(fen)鐘。避(bi)免(mian)光(guang)照(zhao)。
取(qu)出(chu)酶標(biao)板，迅速(su)加(jia)入(ru)50ul終止液，加(jia)入(ru)終止液後應(ying)立即(ji)測(ce)定結果。
在(zai)450nm波(bo)長處測(ce)定各孔(kong)的(de)OD值。

局(ju)限
6號(hao)標準品(pin)以(yi)上(shang)的(de)結果為非線(xian)性的(de)，根據此(ci)標(biao)準曲(qu)線無(wu)法(fa)得到(dao)的(de)結果。

人(ren)UL6結合(he)蛋白ULBP-2試劑盒(he)性能
. 靈敏度：zui小(xiao)的(de)檢測(ce)濃度小(xiao)於號(hao)標準品(pin)。稀(xi)釋(shi)度的(de)線性。樣(yang)品(pin)線(xian)性回歸(gui)與預期濃度相(xiang)關系(xi)數R值為0.990。
2. 特(te)異(yi)性：不(bu)與其(qi)它(ta)細(xi)胞因子(zi)反(fan)應(ying)。
3. 重復性：板內(nei)、板間變(bian)異(yi)系(xi)數均(jun)小於0%。

結 果 判(pan) 斷(duan) 與 分(fen) 析
、儀器值：於波(bo)長450nm的(de)酶標儀上(shang)讀取(qu)各(ge)孔的(de)OD值
2、以(yi)吸光(guang)度OD值為縱坐(zuo)標（Y），相(xiang)應的(de)ULBP-2標準品(pin)濃(nong)度為橫(heng)坐(zuo)標（X），做(zuo)得相(xiang)應的(de)曲(qu)線，樣(yang)品(pin)的(de)ULBP-2含量可(ke)根據其(qi)OD值由(you)標準曲(qu)線換(huan)算出(chu)相(xiang)應的(de)濃度。
3、檢(jian)測(ce)值範圍(wei)：0-800U/ml
4、敏感度： .0 U/ml