人(ren)基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)9（MMP-9）試劑盒(he)操(cao)作(zuo)分(fen)析

人(ren)基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)9（MMP-9）試劑盒(he)操(cao)作(zuo)分(fen)析

本試劑僅(jin)供研究(jiu)使(shi)用(yong)  標(biao)本：血(xue)清(qing)或血(xue)漿(jiang)

試驗(yan)原理：
人(ren)基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)MMP-9試劑盒(he)是(shi)固相(xiang)夾(jia)心(xin)法(fa)酶聯免(mian)疫吸(xi)附(fu)實(shi)驗(yan)（ELISA）.已(yi)知(zhi)MMP-9濃(nong)度(du)的(de)標(biao)準品(pin)、未(wei)知(zhi)濃(nong)度(du)的(de)樣品(pin)加入(ru)微(wei)孔(kong)酶(mei)標板內(nei)進行檢測。先將MMP-9和(he)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)同(tong)時(shi)溫(wen)育。洗(xi)滌(di)後(hou)，加入(ru)親(qin)和(he)素標(biao)記(ji)過(guo)的HRP。再經過(guo)溫(wen)育和(he)洗(xi)滌(di)，去除(chu)未結(jie)合的(de)酶結(jie)合物(wu)，然(ran)後(hou)加入(ru)底(di)物(wu)A、B，和(he)酶(mei)結(jie)合物(wu)同(tong)時(shi)作(zuo)用(yong)。產生顏色。顏(yan)色的(de)深淺(qian)和(he)樣品(pin)中MMP-9的濃(nong)度(du)呈(cheng)比(bi)例關系(xi)。

操(cao)作註(zhu)意事項
試劑應(ying)按標簽(qian)說明書(shu)儲(chu)存(cun)，使(shi)用(yong)前(qian)恢(hui)復(fu)到室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過後的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)應(ying)丟(diu)棄(qi)，不可保存(cun)。
實(shi)驗(yan)中不用(yong)的(de)板條應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回(hui)包裝(zhuang)袋中，密(mi)封(feng)保存(cun)，以免(mian)變(bian)質。
不用(yong)的(de)其它試劑應(ying)包(bao)裝(zhuang)好或蓋(gai)好(hao)。不同(tong)批號(hao)的(de)試劑不要(yao)混用(yong)。保質前(qian)使(shi)用(yong)。
使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)的吸(xi)頭以免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸(xi)取終止液(ye)和(he)底(di)物(wu)A、B液(ye)時，避(bi)免(mian)使(shi)用(yong)帶(dai)金(jin)屬部(bu)分(fen)的(de)加樣器。
使(shi)用(yong)幹(gan)凈的(de)塑料容器(qi)配(pei)置洗滌(di)液(ye)。使(shi)用(yong)前(qian)充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)試劑盒(he)裏(li)的(de)各種成份(fen)及(ji)樣品(pin)。
洗(xi)滌(di)酶(mei)標(biao)板(ban)時(shi)應充(chong)分(fen)拍幹(gan)，不要(yao)將吸(xi)水(shui)紙直(zhi)接(jie)放(fang)入(ru)酶(mei)標(biao)反應孔中吸(xi)水(shui)。
底物(wu)A應(ying)揮(hui)發，避(bi)免(mian)長時間(jian)打(da)開(kai)蓋子。底物(wu)B對(dui)光敏(min)感，避(bi)免(mian)長時間(jian)暴(bao)露(lu)於光下。避(bi)免(mian)用手接(jie)觸(chu)，有毒。實(shi)驗(yan)完成(cheng)後(hou)應立(li)即(ji)讀(du)取OD值(zhi)。
加入(ru)試劑的(de)順(shun)序應(ying)壹致(zhi)，以保(bao)證所(suo)有反應板孔溫(wen)育的(de)時間壹樣。
按照(zhao)說明書(shu)中標明的時(shi)間(jian)、加液(ye)的量(liang)及(ji)順(shun)序進(jin)行溫(wen)育操(cao)作。

樣品(pin)收(shou)集、處(chu)理及保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)
血(xue)清(qing)-----操作(zuo)過(guo)程(cheng)中避(bi)免(mian)任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激。使(shi)用(yong)不含(han)熱(re)原(yuan)和(he)內(nei)毒素的(de)試管(guan)。收(shou)集血(xue)液(ye)後，000×g離(li)心0分(fen)鐘將血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅(xun)速(su)小(xiao)心地分(fen)離(li)。
血(xue)漿(jiang)-----人(ren)基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)MMP-9EDTA、檸(ning)檬酸(suan)鹽、肝素血(xue)漿(jiang)可用於檢測。000×g離(li)心30分(fen)鐘去除(chu)顆粒。
細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離(li)心0分(fen)鐘去除(chu)顆粒和(he)聚(ju)合物(wu)。
保(bao)存(cun)------如果樣品(pin)不立(li)即(ji)使(shi)用(yong)，應(ying)將其分(fen)成(cheng)小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保(bao)存(cun)，避(bi)免(mian)反復冷(leng)凍。盡(jin)可能的不要(yao)使(shi)用(yong)溶(rong)血(xue)或高(gao)血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果血(xue)清(qing)中大量(liang)顆粒，檢(jian)測前(qian)先離(li)心或過(guo)濾(lv)。不要(yao)在37℃或更高的(de)溫(wen)度加熱(re)解(jie)凍。應在室溫(wen)下解凍(dong)並確保樣品(pin)均(jun)勻(yun)地充(chong)分(fen)解(jie)凍。

操作(zuo)步驟(zhou)
使(shi)用(yong)前(qian)，將所(suo)有試劑充(chong)分(fen)混(hun)勻(yun)。不要(yao)使(shi)液(ye)體(ti)產生大量的(de)泡沫(mo)，以免(mian)加樣時加入(ru)大(da)量(liang)的(de)氣(qi)泡，產生加樣上(shang)的誤差(cha)。
根據(ju)待測樣品(pin)數量加上(shang)標準品(pin)的(de)數量決(jue)定所(suo)需(xu)的板(ban)條數。每個標(biao)準品(pin)和(he)空(kong)白孔(kong)建(jian)議做復(fu)孔。每(mei)個樣品(pin)根據(ju)自(zi)己的數量來(lai)定，能使(shi)用(yong)復(fu)孔的(de)盡(jin)量(liang)做復(fu)孔。
加入(ru)稀(xi)釋好後(hou)的(de)標(biao)準品(pin)50ul於反應孔、加入(ru)待測樣品(pin)50ul於反應孔內(nei)。立(li)即(ji)加入(ru)50ul的(de)標(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體(ti)。蓋(gai)上(shang)膜板，輕輕振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育小(xiao)時。
甩去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩去洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操(cao)作3次(ci)。如果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數增加壹(yi)次(ci)。
每孔(kong)加入(ru)80ul的(de)親(qin)和(he)鏈酶素-HRP，輕輕振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。
甩去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加滿洗滌(di)液(ye)，振(zhen)蕩30秒，甩去洗(xi)滌(di)液(ye)，用吸(xi)水(shui)紙拍幹(gan)。重(zhong)復(fu)此操(cao)作3次(ci)。如果用洗(xi)板(ban)機(ji)洗滌(di)，洗(xi)滌(di)次(ci)數增加壹(yi)次(ci)。
每孔(kong)加入(ru)底(di)物(wu)A、B各50ul，輕輕振(zhen)蕩混勻(yun)，37℃溫(wen)育0分(fen)鐘。避(bi)免(mian)光照(zhao)。
取出酶(mei)標(biao)板，迅(xun)速(su)加入(ru)50ul終止液(ye)，加入(ru)終止液(ye)後應(ying)立(li)即(ji)測定結(jie)果。
在450nm波長處測定各孔的(de)OD值(zhi)。

人(ren)基(ji)質金屬蛋(dan)白酶(mei)MMP-9試劑盒(he)性(xing)能
. 靈敏(min)度：zui小(xiao)的檢測濃(nong)度(du)小(xiao)於號標準品(pin)。稀(xi)釋度的(de)線性(xing)。樣品(pin)線性(xing)回(hui)歸與(yu)預(yu)期濃(nong)度(du)相(xiang)關系(xi)數R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特異(yi)性(xing)：不與(yu)其它細(xi)胞(bao)因子反應。
3. 重(zhong)復(fu)性(xing)：板內(nei)、板間(jian)變(bian)異(yi)系(xi)數均(jun)小(xiao)於0%。

結(jie) 果 判 斷(duan) 與 分(fen) 析
、儀器(qi)值(zhi)：於波長450nm的酶(mei)標(biao)儀(yi)上(shang)讀取各孔的(de)OD值(zhi)

2、以吸(xi)光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱坐標（Y），相應的(de)MMP-9標(biao)準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)為(wei)橫坐標（X），做得(de)相應(ying)的曲線，樣品(pin)的(de)MMP-9含量可根據(ju)其OD值(zhi)由(you)標準(zhun)曲線換(huan)算(suan)出相(xiang)應的濃(nong)度(du)。

3、檢(jian)測值(zhi)範圍(wei)：0-400ng/ml

4、敏(min)感度(du)： .0 ng/ml