豚鼠(shu)單(dan)核細胞趨化(hua)蛋白(bai)-（MCP-）試劑(ji)盒檢測

豚(tun)鼠單(dan)核細胞趨化(hua)蛋白(bai)-（MCP-）試劑(ji)盒檢測

本試劑(ji)僅供研究使(shi)用  標本(ben)：血(xue)清或血漿(jiang)

試驗(yan)原理：
豚(tun)鼠(shu)單(dan)核細胞趨化(hua)蛋白(bai)MCP-試劑(ji)盒是(shi)固(gu)相(xiang)夾(jia)心法(fa)酶聯免疫吸(xi)附(fu)實(shi)驗（ELISA）.已知MCP-濃(nong)度(du)的標準(zhun)品(pin)、未知濃(nong)度(du)的樣(yang)品(pin)加(jia)入(ru)微孔酶標板(ban)內進(jin)行檢測。先將(jiang)MCP-和(he)標(biao)記的抗(kang)體(ti)同(tong)時(shi)溫(wen)育(yu)。洗滌後，加入(ru)親和(he)素標記過的HRP。再(zai)經過溫(wen)育(yu)和(he)洗滌，去除未結合的(de)酶結合物，然(ran)後(hou)加(jia)入(ru)底(di)物A、B，和(he)酶(mei)結合物同(tong)時(shi)作用。產生(sheng)顏色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺和(he)樣(yang)品(pin)中(zhong)MCP-的濃(nong)度(du)呈比例關系。

操(cao)作註意事項(xiang)
． 試劑(ji)應按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書(shu)儲存(cun)，使(shi)用前恢復到室溫(wen)。稀稀過(guo)後(hou)的標(biao)準(zhun)品(pin)應(ying)丟(diu)棄，不可保(bao)存(cun)。
2． 實(shi)驗中不用的板(ban)條(tiao)應(ying)立即(ji)放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋中，密(mi)封保(bao)存(cun)，以免變(bian)質(zhi)。
3． 不用(yong)的其它試劑(ji)應包裝(zhuang)好或蓋好。不同(tong)批(pi)號的(de)試劑(ji)不要(yao)混用。保(bao)質(zhi)前使(shi)用。
4． 使(shi)用壹(yi)次性(xing)的(de)吸(xi)頭以免交(jiao)叉(cha)汙(wu)染，吸(xi)取終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底(di)物A、B液時，避免使(shi)用帶(dai)金屬部(bu)分的(de)加樣(yang)器(qi)。
5． 使(shi)用幹凈(jing)的(de)塑(su)料(liao)容器配(pei)置(zhi)洗滌液。使(shi)用前充分(fen)混(hun)勻試劑(ji)盒裏的各種成份(fen)及(ji)樣(yang)品(pin)。
6． 洗滌酶標板(ban)時應(ying)充分(fen)拍(pai)幹，不要(yao)將吸(xi)水紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)酶標(biao)反(fan)應孔中吸(xi)水。
7． 底(di)物A應揮發，避(bi)免長(chang)時(shi)間打(da)開(kai)蓋子。底(di)物B對光敏(min)感(gan)，避免長(chang)時(shi)間暴露(lu)於(yu)光下(xia)。避(bi)免用(yong)手(shou)接觸(chu)，有(you)毒(du)。實(shi)驗完(wan)成後(hou)應(ying)立即(ji)讀取OD值(zhi)。
8． 加入(ru)試劑(ji)的順(shun)序應(ying)壹(yi)致，以(yi)保(bao)證所有(you)反(fan)應板(ban)孔溫育(yu)的時(shi)間壹(yi)樣(yang)。
9． 豚(tun)鼠(shu)單(dan)核細胞趨化(hua)蛋白(bai)MCP-按照(zhao)說(shuo)明書(shu)中標明的時(shi)間、加(jia)液的量及(ji)順(shun)序進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作。

樣(yang)品(pin)收(shou)集、處(chu)理(li)及(ji)保(bao)存(cun)方法(fa)
、 血清-----操(cao)作過程(cheng)中(zhong)避(bi)免任(ren)何(he)細(xi)胞刺激。使(shi)用不含熱原(yuan)和(he)內(nei)毒(du)素的試管(guan)。收(shou)集血(xue)液(ye)後，000×g離心0分(fen)鐘將血清和(he)紅(hong)細胞迅速小心地(di)分(fen)離(li)。
2、 血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸(ning)檬(meng)酸鹽(yan)、肝(gan)素血漿(jiang)可用(yong)於(yu)檢測。000×g離心30分(fen)鐘去除顆粒(li)。
3、 細胞(bao)上(shang)清液(ye)---000×g離(li)心0分(fen)鐘去除顆粒(li)和(he)聚合物。
4、 組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)-----將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量(liang)生(sheng)理鹽(yan)水搗碎(sui)。000×g離心0分(fen)鐘，取上清液(ye)
5、 保(bao)存(cun)------如果樣(yang)品(pin)不(bu)立即(ji)使(shi)用，應將(jiang)其(qi)分(fen)成小(xiao)部(bu)分(fen)-70 ℃保(bao)存(cun)，避免反(fan)復冷(leng)凍。盡可能(neng)的(de)不(bu)要(yao)使(shi)用溶血(xue)或高血脂(zhi)血(xue)。如果血清中(zhong)大(da)量顆粒，檢測前先離(li)心或過濾。不要(yao)在37℃或更(geng)高的溫(wen)度(du)加熱解凍。應(ying)在(zai)室溫(wen)下(xia)解(jie)凍並(bing)確保(bao)樣(yang)品(pin)均(jun)勻地充分(fen)解(jie)凍。

操(cao)作步(bu)驟(zhou)
． 使(shi)用前，將所有(you)試劑(ji)充分混(hun)勻(yun)。不要(yao)使(shi)液體產(chan)生(sheng)大(da)量的泡沫，以免加(jia)樣(yang)時(shi)加(jia)入(ru)大(da)量的氣泡，產(chan)生(sheng)加樣(yang)上(shang)的(de)誤(wu)差(cha)。
2． 根(gen)據待(dai)測樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)加(jia)上(shang)標準(zhun)品(pin)的(de)數(shu)量(liang)決定(ding)所需的(de)板(ban)條(tiao)數(shu)。每(mei)個標準(zhun)品(pin)和(he)空白(bai)孔建議做(zuo)復孔。每個樣(yang)品(pin)根(gen)據自己(ji)的數(shu)量(liang)來(lai)定(ding)，能(neng)使(shi)用復孔的盡量做(zuo)復孔。標本用(yong)標(biao)本(ben)稀釋液：稀釋後加入(ru)50ul於反(fan)應孔內。
3． 加入(ru)稀釋好後的標(biao)準(zhun)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔、加入(ru)待(dai)測樣(yang)品(pin)50ul於(yu)反(fan)應孔內。立即(ji)加(jia)入(ru)50ul的標(biao)記的抗(kang)體(ti)。蓋上(shang)膜(mo)板(ban)，輕輕振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)小時(shi)。
4． 甩去(qu)孔內液體(ti)，每(mei)孔加滿洗滌液，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌液，用吸(xi)水紙(zhi)拍(pai)幹。重復此操(cao)作3次。如果用洗板(ban)機洗滌，洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次。
5． 每孔加入(ru)80ul的親和(he)鏈(lian)酶素-HRP，輕輕振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。
6． 甩去孔內液體(ti)，每(mei)孔加滿洗滌液，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去(qu)洗滌液，用吸(xi)水紙(zhi)拍(pai)幹。重復此操(cao)作3次。如果用洗板(ban)機洗滌，洗滌次數(shu)增(zeng)加(jia)壹(yi)次。
7． 每孔加入(ru)底(di)物A、B各50ul，輕輕振蕩混(hun)勻，37℃溫(wen)育(yu)0分鐘。避免光照(zhao)。
8． 取出(chu)酶標(biao)板(ban)，迅速加入(ru)50ul終止(zhi)液，加入(ru)終止(zhi)液後應立即(ji)測定(ding)結果。
9． 在450nm波(bo)長處(chu)測定(ding)各孔的OD值(zhi)。

豚鼠(shu)單(dan)核細胞趨化(hua)蛋白(bai)MCP-試劑(ji)盒性(xing)能(neng)
. 靈(ling)敏(min)度(du)：zui小的檢測濃(nong)度(du)小於號標(biao)準(zhun)品(pin)。稀釋度(du)的線(xian)性(xing)。樣(yang)品(pin)線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)與預(yu)期濃(nong)度(du)相關系數(shu)R值(zhi)為(wei)0.990。
2. 特(te)異(yi)性(xing)：不(bu)與其(qi)它細胞(bao)因(yin)子反(fan)應。
3. 重復性(xing)：板(ban)內、板(ban)間變(bian)異(yi)系數(shu)均(jun)小(xiao)於(yu)0%。

結 果 判 斷(duan) 與 分(fen) 析
、儀(yi)器(qi)值(zhi)：於波(bo)長(chang)450nm的(de)酶標儀(yi)上(shang)讀取各孔的OD值(zhi)

2、以吸(xi)光度(du)OD值(zhi)為(wei)縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相應的MCP-標準(zhun)品(pin)濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)（X），做得相應的(de)曲線(xian)，樣(yang)品(pin)的(de)MCP-含量可根(gen)據(ju)其(qi)OD值(zhi)由(you)標準(zhun)曲線(xian)換(huan)算(suan)出(chu)相應(ying)的濃(nong)度(du)。

3、檢測值(zhi)範(fan)圍(wei)：0-800pg/ml

4、敏感(gan)度(du)： .0 pg/ml