人（VE）試(shi)劑盒實驗步驟(zhou)

人（VE）試(shi)劑盒實驗步驟(zhou)

本試(shi)劑盒僅(jin)供研究使(shi)用。

檢測(ce)範(fan)圍：60nmol/L -600nmol/L

使用目的(de)：本人維(wei)生素VE試(shi)劑盒用於(yu)測(ce)定(ding)人血(xue)清、血(xue)漿及(ji)相關(guan)液(ye)體樣本中(zhong)（VE）含(han)量。

實驗原理
本試(shi)劑盒應(ying)用雙(shuang)抗(kang)體夾心(xin)法(fa)測(ce)定(ding)標本(ben)中(zhong)人（VE）水(shui)平。用純(chun)化的(de)人（VE）抗(kang)體包被微孔板，制成固(gu)相抗體(ti)，往包(bao)被(bei)單(dan)抗的(de)微孔中(zhong)依(yi)次(ci)加入(ru)（VE），再(zai)與(yu)HRP標記的(de)（VE）抗體結合，形成抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶(mei)標(biao)抗體復合(he)物(wu)，經過(guo)*洗滌(di)後(hou)加(jia)底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在HRP酶(mei)的(de)催(cui)化下(xia)轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的(de)作用下(xia)轉(zhuan)化成zui終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和樣品(pin)中(zhong)的(de)（VE）呈正(zheng)相關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀在450nm波長下(xia)測(ce)定(ding)吸光度（OD值(zhi)），通(tong)過(guo)標準曲(qu)線計算樣品(pin)中(zhong)人（VE）濃(nong)度。

標本(ben)要(yao)求
．標本(ben)采集後(hou)盡早(zao)進(jin)行提(ti)取(qu)，提取(qu)按相關(guan)文(wen)獻(xian)進(jin)行，提(ti)取(qu)後(hou)應(ying)盡快(kuai)進(jin)行實驗。若不(bu)能(neng)馬上(shang)進(jin)行試(shi)驗，可將(jiang)標本放於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融
2．不(bu)能(neng)檢測(ce)含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化物酶(mei)的(de)（HRP）活性。

操作步驟(zhou)
.標準品(pin)的(de)稀釋：本(ben)人維(wei)生素VE試(shi)劑盒提供原倍(bei)標準品(pin)壹支(zhi)，用戶(hu)可按照下(xia)列(lie)圖表(biao)在小(xiao)試(shi)管中(zhong)進(jin)行稀釋 
2.加(jia)樣(yang)：分別設(she)空白孔(kong)（空白對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及酶(mei)標(biao)試(shi)劑，其余(yu)各步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標準孔(kong)、待(dai)測(ce)樣品孔(kong)。在酶(mei)標(biao)包被板上(shang)標準品(pin)準確(que)加樣50μl，待(dai)測(ce)樣品孔(kong)中(zhong)先(xian)加樣品稀釋液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加待(dai)測(ce)樣品0μl（樣(yang)品(pin)zui終(zhong)稀釋度為5倍(bei)）。加樣(yang)將(jiang)樣品加(jia)於(yu)酶(mei)標(biao)板孔底部(bu)，盡量不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁，輕輕晃(huang)動混(hun)勻(yun)。
3.溫育(yu)：用封(feng)板膜(mo)封(feng)板後(hou)置37℃溫(wen)育30分(fen)鐘。   
4.配液(ye)：將(jiang)30倍(bei)濃縮洗(xi)滌(di)液用蒸(zheng)餾(liu)水(shui)30倍(bei)稀釋後(hou)備(bei)用
5.洗(xi)滌(di)：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每孔加滿(man)洗(xi)滌(di)液，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如此重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。
6.加酶(mei)：每(mei)孔加入(ru)酶(mei)標(biao)試(shi)劑50μl，空白孔(kong)除(chu)外(wai)。
7.溫(wen)育：操作同(tong)3。
8.洗滌(di)：操作(zuo)同(tong)5。
9.顯色(se)：每孔先加(jia)入(ru)顯色(se)劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光顯色(se)5分鐘.
0.終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加(jia)終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此時藍色(se)立轉(zhuan)黃色(se)）。
.測(ce)定(ding)：以空(kong)白空(kong)調零，450nm波長依(yi)序(xu)測(ce)量各孔(kong)的(de)吸光度（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應(ying)在加(jia)終(zhong)止(zhi)液後(hou)5分(fen)鐘以內(nei)進(jin)行。

操(cao)作程序(xu)總結： 
計算
以標(biao)準物(wu)的(de)濃度為橫(heng)坐(zuo)標，OD值(zhi)為縱(zong)坐標，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上(shang)繪出(chu)標準曲(qu)線，根(gen)據(ju)樣(yang)品(pin)的(de)OD值(zhi)由標(biao)準曲(qu)線查出(chu)相應(ying)的(de)濃度；再乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數(shu)；或用標(biao)準物(wu)的(de)濃度與OD值(zhi)計算出(chu)標準曲(qu)線的(de)直(zhi)線回歸(gui)方程式，將(jiang)樣品的(de)OD值(zhi)代(dai)入方程式，計算出(chu)樣品濃度，再乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數(shu)，即為樣(yang)品的(de)實際濃度。

註(zhu)意(yi)事項
．人維(wei)生素VE試(shi)劑盒從(cong)冷(leng)藏環境中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在室溫(wen)平衡(heng)5-30分(fen)鐘後(hou)方可使(shi)用，酶(mei)標(biao)包被板開封(feng)後(hou)如未(wei)用完，板條應(ying)裝入密(mi)封(feng)袋中(zhong)保(bao)存(cun)。
2．濃(nong)洗(xi)滌(di)液可能(neng)會有結晶(jing)析出(chu)，稀釋時可在水(shui)浴(yu)中(zhong)加(jia)溫助溶，洗滌(di)時不(bu)影(ying)響結(jie)果(guo)。
3．各(ge)步加樣(yang)均應(ying)使用加(jia)樣(yang)器，並經常校對(dui)其準確(que)性，以避(bi)免(mian)試(shi)驗誤差。壹次(ci)加樣(yang)時間控制在5分(fen)鐘內，如標(biao)本數(shu)量多(duo)，使用排槍加(jia)樣。
4．請(qing)每次(ci)測(ce)定(ding)的(de)同(tong)時做(zuo)標準曲(qu)線，做(zuo)復孔(kong)。如標(biao)本中(zhong)待(dai)測(ce)物質含(han)量(liang)過(guo)高（樣(yang)本OD值(zhi)大於(yu)標(biao)準品(pin)孔(kong)*孔的(de)OD值(zhi)），請(qing)先用樣(yang)品(pin)稀釋液(ye)稀釋壹定(ding)倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計算時請(qing)zui後(hou)乘(cheng)以(yi)總稀釋倍(bei)數(shu)（×n×5）。
5．封板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹次(ci)性使用，以(yi)避(bi)免(mian)交叉汙(wu)染。
6．底(di)物(wu)請(qing)避(bi)光保存(cun)。
7．嚴(yan)格(ge)按照說明書(shu)的(de)操作進(jin)行，試(shi)驗結果(guo)判定(ding)必須(xu)以酶(mei)標(biao)儀讀數(shu)為準.
8．所(suo)有樣品(pin)，洗(xi)滌(di)液和各種廢棄物(wu)都(dou)應(ying)按傳(chuan)染物(wu)處理。
9．本試(shi)劑不(bu)同(tong)批(pi)號組分不(bu)得(de)混(hun)用。
0.如與(yu)英文(wen)說明書(shu)有異(yi)，以英(ying)文(wen)說明書(shu)為(wei)準。

保(bao)存(cun)條件及(ji)有效期(qi)
．試(shi)劑盒保存(cun)：；2-8℃。
2．有效期(qi)：6個(ge)月