大(da)鼠糖(tang)原磷酸(suan)化(hua)酶同工(gong)酶BB（GP-BB）試(shi)劑盒(he)實(shi)驗檢測(ce)

大(da)鼠糖(tang)原磷酸(suan)化(hua)酶同工(gong)酶BB（GP-BB）試(shi)劑盒(he)實(shi)驗檢測(ce)

本試(shi)劑僅(jin)供研究使(shi)用  標(biao)本(ben)：血(xue)清或血(xue)漿(jiang)

試(shi)驗原理(li)：
大(da)鼠糖(tang)原磷酸(suan)化(hua)酶同工(gong)酶GP-BB試(shi)劑盒(he)是(shi)固(gu)相夾(jia)心(xin)法酶聯(lian)免疫吸附(fu)實驗(yan)（ELISA）.已(yi)知(zhi)GP-BB濃(nong)度的(de)標(biao)準(zhun)品、未知(zhi)濃(nong)度的(de)樣品加入(ru)微(wei)孔(kong)酶(mei)標(biao)板內進行(xing)檢(jian)測(ce)。先(xian)將(jiang)GP-BB和標(biao)記的抗(kang)體同(tong)時溫育。洗滌後，加入(ru)親和素(su)標(biao)記過(guo)的(de)HRP。再(zai)經(jing)過(guo)溫育和洗滌，去除(chu)未結合(he)的酶結合(he)物(wu)，然後加入(ru)底(di)物(wu)A、B，和酶(mei)結合(he)物(wu)同時(shi)作用(yong)。產(chan)生(sheng)顏色。顏色(se)的(de)深(shen)淺和樣品中(zhong)GP-BB的濃(nong)度(du)呈(cheng)比例關系。

操作註意事項
． 試(shi)劑應(ying)按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書儲(chu)存，使(shi)用前(qian)恢復到室溫。稀稀(xi)過(guo)後的(de)標(biao)準(zhun)品應丟(diu)棄，不(bu)可(ke)保存。
2． 實驗(yan)中(zhong)不(bu)用(yong)的(de)板條應立(li)即(ji)放(fang)回包裝袋中，密封保存，以免變(bian)質(zhi)。
3． 不(bu)用(yong)的(de)其(qi)它試(shi)劑應(ying)包裝好或蓋好。不(bu)同(tong)批(pi)號的試(shi)劑不(bu)要(yao)混用(yong)。保質(zhi)前(qian)使(shi)用。
4． 使(shi)用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免交(jiao)叉汙(wu)染，吸取(qu)終止液和底(di)物(wu)A、B液時，避免使(shi)用帶(dai)金屬(shu)部(bu)分的(de)加樣器。
5． 使(shi)用幹(gan)凈的塑料(liao)容器(qi)配置洗滌液。使(shi)用前(qian)充(chong)分(fen)混勻試(shi)劑盒(he)裏(li)的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。
6． 洗滌酶標(biao)板時應充(chong)分(fen)拍幹(gan)，不(bu)要(yao)將(jiang)吸水紙(zhi)直(zhi)接放(fang)入酶(mei)標(biao)反應(ying)孔(kong)中吸(xi)水。
7． 底(di)物(wu)A應揮(hui)發，避免長(chang)時間(jian)打開(kai)蓋子。底(di)物(wu)B對光敏感(gan)，避免長(chang)時間(jian)暴露(lu)於光下(xia)。避免用手(shou)接觸(chu)，有毒。實驗完成(cheng)後應(ying)立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值。
8． 加入(ru)試(shi)劑的(de)順序(xu)應壹(yi)致，以保證(zheng)所有(you)反應(ying)板孔溫育的(de)時(shi)間壹樣。
9． 按照說(shuo)明(ming)書(shu)中(zhong)標(biao)明(ming)的(de)時間、加液的量(liang)及(ji)順序(xu)進行(xing)溫育操(cao)作。

樣品收(shou)集、處(chu)理及保存方法
、 血清(qing)-----操(cao)作過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任何(he)細胞(bao)刺激。使(shi)用不(bu)含(han)熱(re)原和內(nei)毒素(su)的(de)試(shi)管(guan)。收集(ji)血液後，000×g離(li)心(xin)0分鐘(zhong)將(jiang)血清和紅(hong)細胞(bao)迅速小心(xin)地分(fen)離(li)。
2、 大(da)鼠糖(tang)原磷酸(suan)化(hua)酶同工(gong)酶GP-BB血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸檬酸鹽、肝(gan)素(su)血(xue)漿可用(yong)於檢(jian)測(ce)。000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)。
3、 細胞(bao)上清液---000×g離心(xin)0分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚(ju)合物(wu)。
4、 保存------如果(guo)樣品不(bu)立(li)即(ji)使(shi)用，應(ying)將(jiang)其分成(cheng)小部(bu)分-70 ℃保存，避免反復冷(leng)凍。盡(jin)可(ke)能(neng)的(de)不(bu)要(yao)使(shi)用溶(rong)血或(huo)高(gao)血脂(zhi)血。如果(guo)血(xue)清中大(da)量(liang)顆(ke)粒(li)，檢(jian)測(ce)前先(xian)離(li)心(xin)或過(guo)濾。不(bu)要(yao)在(zai)37℃或(huo)更高(gao)的溫度加熱(re)解凍。應(ying)在(zai)室溫下解(jie)凍並(bing)確(que)保樣品均(jun)勻地充(chong)分(fen)解(jie)凍。

試(shi)劑的(de)準(zhun)備
． 標(biao)準(zhun)品：標(biao)準(zhun)品的系列稀釋應(ying)在(zai)實(shi)驗時(shi)準(zhun)備，不(bu)能(neng)儲(chu)存。稀釋(shi)前(qian)將(jiang)標(biao)準(zhun)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jin)行：
800 pg/ml （6號標(biao)準(zhun)品） 原倍(bei)濃度(du)不(bu)用(yong)稀(xi)釋(shi)直(zhi)接加入(ru)50ul。
400 pg/ml （5號標(biao)準(zhun)品） 00ul的原倍(bei)標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀釋液
200 pg/ml （4號標(biao)準(zhun)品） 00ul的5號標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀釋液
00 pg/ml （3號標(biao)準(zhun)品） 00ul的4號標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀釋液
50 pg/ml （2號標(biao)準(zhun)品） 00ul的3號標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀釋液
25 pg/ml （號標(biao)準(zhun)品） 00ul的2號標(biao)準(zhun)品加入(ru)00ul的標(biao)準(zhun)品稀釋液
0 pg/ml （空(kong)白對照(zhao)） 原始(shi)濃(nong)度不(bu)用(yong)稀(xi)釋(shi)直(zhi)接加入(ru)50ul。

2． 洗滌緩沖(chong)液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍(bei)稀釋(shi)。

操作步(bu)驟(zhou)
． 使(shi)用前(qian)，將(jiang)所有(you)試(shi)劑充(chong)分(fen)混勻。不(bu)要(yao)使(shi)液體產(chan)生(sheng)大(da)量(liang)的(de)泡沫，以免加樣時加入(ru)大(da)量(liang)的(de)氣泡(pao)，產(chan)生(sheng)加樣上的誤(wu)差。
2． 根據(ju)待測(ce)樣品數(shu)量(liang)加上標(biao)準(zhun)品的數(shu)量(liang)決定(ding)所需的板條數(shu)。每(mei)個(ge)標(biao)準(zhun)品和空(kong)白孔(kong)建議做(zuo)復孔(kong)。每個(ge)樣品根據(ju)自己(ji)的(de)數(shu)量(liang)來定(ding)，能(neng)使(shi)用復孔(kong)的盡量(liang)做(zuo)復孔(kong)。
3． 加入(ru)稀釋好後的(de)標(biao)準(zhun)品50ul於反應(ying)孔(kong)、加入(ru)待測(ce)樣品50ul於反應(ying)孔(kong)內。立(li)即加入(ru)50ul的標(biao)記的抗(kang)體。蓋上膜板，輕輕振(zhen)蕩(dang)混勻，37℃溫育小時(shi)。
4． 甩(shuai)去孔內(nei)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩(shuai)去洗滌液，用吸水紙拍幹(gan)。重復此(ci)操作3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗板機(ji)洗滌，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加壹(yi)次(ci)。
5． 每孔(kong)加入(ru)80ul的親和鏈(lian)酶(mei)素(su)-HRP，輕(qing)輕振蕩(dang)混勻，37℃溫育30分(fen)鐘(zhong)。
6． 甩(shuai)去孔內(nei)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩(shuai)去洗滌液，用吸水紙拍幹(gan)。重復此(ci)操作3次(ci)。如果(guo)用(yong)洗板機(ji)洗滌，洗滌次(ci)數(shu)增(zeng)加壹(yi)次(ci)。
7． 每孔(kong)加入(ru)底(di)物(wu)A、B各(ge)50ul，輕輕(qing)振蕩混勻，37℃溫育0分(fen)鐘(zhong)。避免光照(zhao)。
8． 取(qu)出(chu)酶(mei)標(biao)板，迅速加入(ru)50ul終止液，加入(ru)終止液後應(ying)立(li)即(ji)測(ce)定(ding)結果(guo)。
9． 在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測(ce)定(ding)各(ge)孔的(de)OD值。

大(da)鼠糖(tang)原磷酸(suan)化(hua)酶同工(gong)酶GP-BB試(shi)劑盒(he)性(xing)能(neng)
. 靈(ling)敏度(du)：zui小的(de)檢(jian)測(ce)濃度小於號標(biao)準(zhun)品。稀釋度(du)的(de)線性(xing)。樣品線(xian)性回(hui)歸(gui)與預(yu)期濃(nong)度(du)相關系數(shu)R值為(wei)0.990。
2. 特(te)異性(xing)：不(bu)與其(qi)它(ta)細胞(bao)因子(zi)反應(ying)。
3. 重復性(xing)：板內、板間變(bian)異(yi)系數(shu)均(jun)小於0%。

結 果(guo) 判 斷(duan) 與 分(fen) 析(xi)
、儀器值：於波(bo)長(chang)450nm的酶(mei)標(biao)儀上讀取(qu)各(ge)孔的(de)OD值

2、以吸(xi)光度(du)OD值為(wei)縱(zong)坐標(biao)（Y），相應(ying)的(de)GP-BB標(biao)準(zhun)品濃度為(wei)橫(heng)坐標(biao)（X），做(zuo)得(de)相應(ying)的(de)曲(qu)線，樣品的(de)GP-BB含量(liang)可(ke)根據(ju)其OD值由標(biao)準(zhun)曲線換(huan)算(suan)出相應(ying)的(de)濃(nong)度。

3、檢(jian)測(ce)值範圍(wei)：0-800pg/ml

4、敏感(gan)度(du)： .0 pg/ml