人β澱粉樣蛋(dan)白-40（Aβ-40）試劑盒(he)實驗(yan)分析

人β澱粉樣蛋(dan)白-40（Aβ-40）試劑盒(he)實驗(yan)分析

本試劑僅(jin)供研(yan)究(jiu)使(shi)用(yong)  標(biao)本(ben)：血(xue)清(qing)或血(xue)漿(jiang)

試驗原(yuan)理：
人(ren)β澱粉樣蛋(dan)白Aβ-40試劑盒(he)是(shi)固相(xiang)夾(jia)心(xin)法(fa)酶(mei)聯(lian)免(mian)疫吸附(fu)實(shi)驗(yan)（ELISA）.已(yi)知Aβ-40濃度的標(biao)準品、未(wei)知濃度的樣品加(jia)入(ru)微(wei)孔(kong)酶(mei)標(biao)板內(nei)進行檢(jian)測。先(xian)將Aβ-40和(he)標(biao)記(ji)的抗體同(tong)時溫育(yu)。洗滌後(hou)，加(jia)入(ru)親和(he)素標(biao)記(ji)過的HRP。再(zai)經(jing)過溫育(yu)和(he)洗滌，去除(chu)未(wei)結合(he)的酶(mei)結合(he)物(wu)，然(ran)後(hou)加(jia)入(ru)底物(wu)A、B，和(he)酶(mei)結合(he)物(wu)同(tong)時作(zuo)用(yong)。產生顏(yan)色。顏(yan)色的深淺和(he)樣品中Aβ-40的濃度呈比(bi)例(li)關系(xi)。

操作(zuo)註(zhu)意事(shi)項(xiang)
． 試劑應(ying)按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書(shu)儲(chu)存(cun)，使(shi)用(yong)前(qian)恢(hui)復到室溫。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的標(biao)準品應(ying)丟棄，不可(ke)保(bao)存(cun)。
2． 實驗(yan)中(zhong)不(bu)用(yong)的板條應(ying)立(li)即放回(hui)包裝袋中，密封(feng)保(bao)存(cun)，以免(mian)變質(zhi)。
3． 不用(yong)的其它(ta)試劑應(ying)包裝好或蓋(gai)好。不同(tong)批(pi)號的試劑不(bu)要混(hun)用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使(shi)用(yong)。
4． 使(shi)用(yong)壹(yi)次性的吸頭以免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染，吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底物(wu)A、B液(ye)時，避免使(shi)用(yong)帶(dai)金(jin)屬(shu)部分的加(jia)樣器(qi)。
5． 使(shi)用(yong)幹(gan)凈的塑料(liao)容(rong)器(qi)配置洗滌液(ye)。使(shi)用(yong)前(qian)充分混(hun)勻(yun)試劑盒(he)裏的各(ge)種(zhong)成份(fen)及(ji)樣品。
6． 洗滌酶標(biao)板時應(ying)充分拍(pai)幹(gan)，不(bu)要將吸水紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)酶標(biao)反應(ying)孔(kong)中(zhong)吸水。
7． 底物(wu)A應(ying)揮發(fa)，避免長時間(jian)打(da)開蓋(gai)子。底物(wu)B對光敏(min)感(gan)，避免長時間(jian)暴(bao)露(lu)於光下(xia)。避免用(yong)手(shou)接(jie)觸(chu)，有(you)毒。實驗(yan)完成後(hou)應(ying)立(li)即讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
8． 加(jia)入(ru)試劑的順(shun)序應(ying)壹(yi)致，以(yi)保(bao)證(zheng)所(suo)有反應(ying)板孔(kong)溫育(yu)的時間(jian)壹(yi)樣。
9． 按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)中(zhong)標(biao)明的時間(jian)、加(jia)液(ye)的量(liang)及(ji)順(shun)序進行(xing)溫育(yu)操作(zuo)。

樣品收集、處理及保(bao)存(cun)方法(fa)
、 血(xue)清(qing)-----操作(zuo)過程(cheng)中(zhong)避免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺激(ji)。使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和(he)內(nei)毒素的試管。收集血(xue)液(ye)後(hou)，000×g離(li)心(xin)0分鐘將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細(xi)胞(bao)迅速(su)小心(xin)地分離(li)。
2、 人(ren)β澱粉樣蛋(dan)白Aβ-40血(xue)漿(jiang)-----EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)、肝素血(xue)漿(jiang)可(ke)用(yong)於檢(jian)測。000×g離(li)心(xin)30分鐘去(qu)除顆(ke)粒。
3、 細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液(ye)---000×g離(li)心(xin)0分鐘去(qu)除顆(ke)粒和(he)聚合(he)物(wu)。
4、 保(bao)存(cun)------如果樣品不立(li)即使(shi)用(yong)，應(ying)將其分成小部分-70 ℃保(bao)存(cun)，避免反復冷凍。盡(jin)可(ke)能(neng)的不(bu)要使(shi)用(yong)溶(rong)血(xue)或高(gao)血(xue)脂(zhi)血(xue)。如果血(xue)清(qing)中大(da)量顆(ke)粒，檢(jian)測前(qian)先(xian)離心(xin)或過濾。不要在37℃或更高(gao)的溫度(du)加(jia)熱(re)解凍。應(ying)在室(shi)溫下(xia)解(jie)凍並(bing)確(que)保(bao)樣品均勻地充分解(jie)凍(dong)。

試劑的準備
． 標(biao)準品：標(biao)準品的系(xi)列(lie)稀(xi)釋(shi)應(ying)在實(shi)驗(yan)時準備，不(bu)能(neng)儲(chu)存(cun)。稀(xi)釋(shi)前(qian)將標(biao)準品振蕩混(hun)勻(yun)。稀(xi)釋(shi)比(bi)例(li)按下(xia)表中(zhong)進(jin)行：
80 ng/ml （6號標(biao)準品） 原倍(bei)濃度不用(yong)稀(xi)釋(shi)直(zhi)接(jie)加(jia)入(ru)50ul。
40 ng/ml （5號標(biao)準品） 00ul的原(yuan)倍(bei)標(biao)準品加(jia)入(ru)00ul的標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
20 ng/ml （4號標(biao)準品） 00ul的5號標(biao)準品加(jia)入(ru)00ul的標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 ng/ml （3號標(biao)準品） 00ul的4號標(biao)準品加(jia)入(ru)00ul的標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
5.0 ng/ml （2號標(biao)準品） 00ul的3號標(biao)準品加(jia)入(ru)00ul的標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
2.5 ng/ml （號標(biao)準品） 00ul的2號標(biao)準品加(jia)入(ru)00ul的標(biao)準品稀(xi)釋(shi)液(ye)
0 ng/ml （空(kong)白對照(zhao)） 原(yuan)始(shi)濃度不用(yong)稀(xi)釋(shi)直(zhi)接(jie)加(jia)入(ru)50ul。

2． 洗滌緩沖(chong)液(ye)（50×）的稀(xi)釋(shi)：蒸餾(liu)水50倍(bei)稀(xi)釋(shi)。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)
． 使(shi)用(yong)前(qian)，將所(suo)有試劑充分混(hun)勻(yun)。不要使(shi)液(ye)體(ti)產生大量的泡沫，以免(mian)加(jia)樣時加(jia)入(ru)大量(liang)的氣泡，產生加(jia)樣上(shang)的誤(wu)差。
2． 根(gen)據待(dai)測(ce)樣品數(shu)量(liang)加(jia)上(shang)標(biao)準品的數(shu)量(liang)決(jue)定(ding)所(suo)需的板條數(shu)。每(mei)個標(biao)準品和(he)空(kong)白孔(kong)建(jian)議做(zuo)復(fu)孔(kong)。每(mei)個樣品根(gen)據自(zi)己(ji)的數(shu)量(liang)來(lai)定(ding)，能使(shi)用(yong)復(fu)孔(kong)的盡(jin)量(liang)做(zuo)復(fu)孔(kong)。
3． 加(jia)入(ru)稀(xi)釋(shi)好後(hou)的標(biao)準品50ul於反應(ying)孔(kong)、加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)樣品50ul於反應(ying)孔(kong)內(nei)。立(li)即加(jia)入(ru)50ul的標(biao)記(ji)的抗體。蓋(gai)上(shang)膜(mo)板，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫育(yu)小時。
4． 甩(shuai)去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用(yong)吸水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此操作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗板機洗滌，洗滌次數(shu)增加(jia)壹(yi)次。
5． 每孔(kong)加(jia)入(ru)80ul的親和(he)鏈酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫育(yu)30分鐘。
6． 甩(shuai)去孔(kong)內(nei)液(ye)體(ti)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩(shuai)去洗滌液(ye)，用(yong)吸水紙(zhi)拍(pai)幹(gan)。重(zhong)復此操作(zuo)3次(ci)。如果用(yong)洗板機洗滌，洗滌次數(shu)增加(jia)壹(yi)次。
7． 每孔(kong)加(jia)入(ru)底物(wu)A、B各(ge)50ul，輕(qing)輕(qing)振蕩混(hun)勻(yun)，37℃溫育(yu)0分鐘。避免光照(zhao)。
8． 取(qu)出酶標(biao)板，迅(xun)速(su)加(jia)入(ru)50ul終(zhong)止(zhi)液(ye)，加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)應(ying)立(li)即測(ce)定結果。
9． 在(zai)450nm波(bo)長處測定各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。

人β澱粉樣蛋(dan)白Aβ-40試劑盒(he)性能
. 靈(ling)敏(min)度(du)：zui小的檢(jian)測濃度小於號標(biao)準品。稀(xi)釋(shi)度的線(xian)性。樣品線性回(hui)歸與(yu)預(yu)期(qi)濃度相(xiang)關(guan)系(xi)數(shu)R值(zhi)為0.990。
2. 特(te)異性：不與(yu)人其它(ta)細(xi)胞(bao)因子反應(ying)。
3. 重(zhong)復性：板內(nei)、板間(jian)變異(yi)系(xi)數(shu)均小於0%。

結 果 判 斷 與(yu) 分 析
、儀器值(zhi)：於波(bo)長450nm的酶(mei)標(biao)儀上(shang)讀(du)取(qu)各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)

2、以吸光度(du)OD值(zhi)為縱坐(zuo)標(biao)（Y），相(xiang)應(ying)的Aβ-40標(biao)準品濃度為橫坐(zuo)標(biao)（X），做(zuo)得(de)相(xiang)應(ying)的曲(qu)線(xian)，樣品的Aβ-40含(han)量(liang)可(ke)根(gen)據其OD值(zhi)由(you)標(biao)準曲(qu)線(xian)換算出相(xiang)應(ying)的濃度。

3、檢(jian)測值(zhi)範(fan)圍：0-80ng/ml

4、敏(min)感(gan)度(du)： 0. ng/ml