豬白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)4（IL-4）試劑(ji)盒(he)使用原理(li)

豬白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)4（IL-4）試劑(ji)盒(he)使用原理(li)

使用目的：
本豬(zhu)白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-4試劑(ji)盒(he)用於測(ce)定(ding)豬(zhu)血清(qing)、血漿(jiang)及(ji)相關液(ye)體(ti)樣(yang)本中(zhong)白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su) -4（IL-4）含(han)量。

實(shi)驗原理(li)
本試劑(ji)盒(he)應(ying)用雙抗體(ti)夾心(xin)法測(ce)定(ding)標(biao)本中(zhong)豬(zhu)白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su) -4（IL-4）水平(ping)。用純化的豬白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)-4（IL-4）抗體(ti)包被微孔板(ban)，制(zhi)成固相抗體(ti)，往包(bao)被單(dan)抗的微孔中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)-4（IL-4），再(zai)與(yu) HRP標(biao)記(ji)的白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su) -4（IL-4）抗體(ti)結合，形(xing)成抗(kang)體(ti) -抗原-酶(mei)標(biao)抗(kang)體(ti)復合(he)物(wu)，經過(guo)*洗(xi)滌後(hou)加底(di)物 TMB顯色。 TMB在(zai) HRP酶的催化(hua)下轉化成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的作用下轉化成zui終(zhong)的黃色。顏(yan)色的深淺(qian)和(he)樣(yang)品中(zhong)的白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su) -4（IL-4）呈(cheng)正相關。用酶標(biao)儀(yi)在(zai) 450nm波長下測定(ding)吸光度（ OD值(zhi)），通過標(biao)準(zhun)曲線(xian)計算(suan)樣(yang)品中(zhong)豬白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su) -4（IL-4）濃度。

標(biao)本要(yao)求
．標(biao)本采(cai)集(ji)後(hou)盡早進行提取，提(ti)取按相關文獻(xian)進行，提取後(hou)應(ying)盡快(kuai)進行實(shi)驗。若(ruo)不能(neng)馬(ma)上(shang)進行試驗，可(ke)將(jiang)標(biao)本放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避免反復(fu)凍融
2．不能(neng)檢(jian)測含(han)NaN3的樣(yang)品，因 NaN3抑(yi)制(zhi)辣根(gen)過氧化物(wu)酶的（ HRP）活性(xing)。

操作步驟(zhou)
.標(biao)準(zhun)品的稀釋(shi)：本試劑(ji)盒(he)提(ti)供(gong)原倍(bei)標(biao)準(zhun)品壹(yi)支(zhi)，用戶可(ke)按照下列圖表在(zai)小試管中(zhong)進行稀釋(shi)。
2.加樣(yang)：分別(bie)設空(kong)白孔（空(kong)白對(dui)照孔不加(jia)樣(yang)品及(ji)酶標(biao)試劑(ji)，其余(yu)各步操(cao)作相同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔、待(dai)測(ce)樣(yang)品孔。在(zai)酶標(biao)包(bao)被板(ban)上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加(jia)樣(yang) 50μl，待測(ce)樣(yang)品孔中(zhong)先(xian)加樣(yang)品稀釋(shi)液(ye) 40μl，然後(hou)再(zai)加(jia)待測樣(yang)品 0μl（樣(yang)品zui終(zhong)稀釋(shi)度為(wei) 5倍(bei)）。加樣(yang)將樣(yang)品加(jia)於酶(mei)標(biao)板(ban)孔底(di)部，盡量(liang)不觸(chu)及(ji)孔壁(bi)，輕(qing)輕晃動(dong)混(hun)勻(yun)。
3.溫育：用封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)板(ban)後(hou)置(zhi) 37℃溫(wen)育 3 0分鐘。
4.配液：將 30倍濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌液(ye)用蒸餾(liu)水 30倍稀釋(shi)後(hou)備用
5.洗(xi)滌：豬(zhu)白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)IL-4小心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜(mo)，棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，甩幹，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置(zhi) 30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，如(ru)此(ci)重(zhong)復 5次(ci)，拍幹。
6.加酶(mei)：每(mei)孔加(jia)入(ru)酶標(biao)試劑(ji) 50μl，空白孔除(chu)外(wai)。
7.溫育：操作同(tong) 3。
8.洗(xi)滌：操(cao)作同(tong) 5。
9.顯色：每(mei)孔先(xian)加(jia)入顯色劑(ji) A50μl，再(zai)加(jia)入顯色劑(ji) B50μl，輕輕震(zhen)蕩(dang)混(hun)勻(yun)， 37℃避光顯色5分(fen)鐘.
0.終(zhong)止(zhi)：每(mei)孔加(jia)終(zhong)止(zhi)液 50μl，終(zhong)止(zhi)反應(ying)（此時(shi)藍(lan)色立(li)轉(zhuan)黃色）。
.測定(ding)：以(yi)空白空(kong)調零， 450nm波長依序(xu)測量(liang)各孔的吸光度（ OD值(zhi)）。