豬(zhu)粘(zhan)蛋白(bai)/粘(zhan)液(ye)素(su)C（MUCC）ELISA試劑(ji)盒

豬(zhu)粘(zhan)蛋白(bai)/粘(zhan)液(ye)素(su)C(MUCC)ELISA試劑(ji)盒實(shi)驗(yan)分析

本試(shi)劑(ji)盒僅供(gong)研(yan)究使(shi)用(yong)。

檢測範圍：96T
3μg/L -20μg/L

使用(yong)目的(de)：豬(zhu)粘(zhan)蛋白(bai)/粘(zhan)液(ye)素(su)C(MUCC)ELISA試劑(ji)盒用(yong)於(yu)測定(ding)大(da)鼠(shu)血(xue)清(qing)、血(xue)漿及相關液(ye)體(ti)樣本(ben)中(zhong)內皮(pi)素(su) （ET）含量。

實(shi)驗(yan)原理(li)
本(ben)試劑(ji)盒應(ying)用(yong)雙抗(kang)體夾(jia)心(xin)法(fa)測(ce)定(ding)標本中(zhong)大(da)鼠(shu)內(nei)皮(pi)素(su) （ET）水平(ping)。用(yong)純化(hua)的大(da)鼠(shu)內(nei)皮(pi)素(su) （ET）抗(kang)體包被(bei)微(wei)孔(kong)板，制(zhi)成(cheng)固(gu)相抗(kang)體，往包被(bei)單(dan)抗(kang)的微孔(kong)中(zhong)依(yi)次加(jia)入(ru)內(nei)皮素(su) （ET），再與HRP標記的(de)內皮素(su) （ET）抗(kang)體結合(he)，形(xing)成(cheng)抗(kang)體-抗(kang)原-酶(mei)標抗(kang)體復合(he)物(wu)，經過*洗(xi)滌後加(jia)底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成藍色(se)，並在(zai)酸的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成zui終的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的深淺和(he)樣品(pin)中(zhong)的內(nei)皮素(su) （ET）呈(cheng)正相關。用(yong)酶標儀在(zai)450nm波長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)），通(tong)過標準曲(qu)線計算樣品(pin)中(zhong)大(da)鼠(shu)內(nei)皮(pi)素(su) （ET）濃度。

豬(zhu)粘(zhan)蛋白(bai)/粘(zhan)液(ye)素(su)C(MUCC)ELISA試劑(ji)盒標本要(yao)求
．標本采(cai)集後盡(jin)早進(jin)行(xing)提取，提取按相關文(wen)獻進(jin)行(xing)，提取後應(ying)盡(jin)快進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。若不能(neng)馬上進(jin)行(xing)試驗(yan)，可將(jiang)標本放(fang)於(yu)-20℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免反復凍(dong)融(rong)
2．不能(neng)檢測含(han)NaN3的樣(yang)品(pin)，因(yin)NaN3抑制辣根過氧(yang)化(hua)物(wu)酶的(de)（HRP）活(huo)性(xing)。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)
.標準品(pin)的(de)稀(xi)釋(shi)：本試劑盒提(ti)供(gong)原倍(bei)標準品(pin)壹(yi)支(zhi)，用(yong)戶可(ke)按照下(xia)列(lie)圖(tu)表(biao)在(zai)小試(shi)管中(zhong)進(jin)行(xing)稀釋(shi)。

20μg/L5號標準品(pin)50μl的(de)原倍(bei)標準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
60μg/L4號標準品(pin)50μl的(de)5號標準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
30μg/L3號標準品(pin)50μl的(de)4號標準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
5μg/L2號標準品(pin)50μl的(de)3號標準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)
7.5μg/L號標準品(pin)50μl的(de)2號標準品(pin)加(jia)入(ru)50μl標準品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)

2.加(jia)樣：分(fen)別設空白(bai)孔(kong)（空(kong)白對(dui)照孔(kong)不加(jia)樣品(pin)及酶標試劑(ji)，其(qi)余(yu)各步(bu)操(cao)作(zuo)相同(tong)）、標準孔(kong)、待(dai)測樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標包被(bei)板上標準品(pin)準(zhun)確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然後再加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)0μl（樣(yang)品(pin)zui終稀(xi)釋度為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣將(jiang)樣品(pin)加(jia)於(yu)酶標板孔(kong)底(di)部，盡(jin)量不觸(chu)及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻。
3.溫(wen)育：用(yong)封(feng)板膜(mo)封(feng)板後(hou)置37℃溫育30分(fen)鐘(zhong)。  
4.配(pei)液：將(jiang)30倍濃縮(suo)洗(xi)滌液用(yong)蒸餾(liu)水(shui)30倍稀釋後(hou)備(bei)用(yong)
5.洗滌(di)：小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如(ru)此(ci)重復5次，拍(pai)幹(gan)。
6.加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標試劑(ji)50μl，空白孔(kong)除(chu)外。
7.溫育：操(cao)作(zuo)同3。
8.洗(xi)滌：操(cao)作(zuo)同5。
9.顯(xian)色(se)：每(mei)孔(kong)先加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑A50μl，再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩混(hun)勻，37℃避(bi)光顯(xian)色(se)5分鐘.
0.終止(zhi)：每(mei)孔(kong)加(jia)終止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反應(ying)（此(ci)時藍色(se)立(li)轉黃(huang)色(se)）。
.測定：以空白空調(tiao)零，450nm波(bo)長依(yi)序測(ce)量各孔(kong)的(de)吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)）。 測定(ding)應在(zai)加(jia)終止(zhi)液(ye)後5分鐘以內進(jin)行(xing)。

豬(zhu)粘(zhan)蛋白(bai)/粘(zhan)液(ye)素(su)C(MUCC)ELISA試劑(ji)盒註(zhu)意事項(xiang)
．試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷藏環(huan)境(jing)中(zhong)取出應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平衡5-30分(fen)鐘(zhong)後方可使(shi)用(yong)，酶標包被(bei)板開封(feng)後(hou)如(ru)未(wei)用(yong)完(wan)，板條應裝入(ru)密(mi)封(feng)袋中(zhong)保(bao)存(cun)。
2．濃洗滌(di)液(ye)可能(neng)會有(you)結晶析出，稀(xi)釋(shi)時可在(zai)水浴(yu)中(zhong)加(jia)溫助(zhu)溶(rong)，洗滌時不影(ying)響結果(guo)。
3．各(ge)步(bu)加(jia)樣均(jun)應(ying)使(shi)用(yong)加(jia)樣器(qi)，並經常校對(dui)其(qi)準(zhun)確(que)性(xing)，以避(bi)免試(shi)驗(yan)誤差。壹(yi)次加(jia)樣時(shi)間控(kong)制在(zai)5分鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標本數量多，使用(yong)排(pai)槍加(jia)樣。
4．請(qing)每(mei)次測定的(de)同(tong)時做(zuo)標準曲(qu)線，做復孔(kong)。如(ru)標本中(zhong)待測(ce)物(wu)質(zhi)含量過高(gao)（樣本OD值(zhi)大(da)於(yu)標準品(pin)孔(kong)*孔(kong)的(de)OD值(zhi)），請(qing)先用(yong)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀釋壹定倍(bei)數（n倍(bei)）後(hou)再測定(ding)，計算時請(qing)zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5．封(feng)板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹次性使用(yong)，以避(bi)免交叉汙(wu)染(ran)。
6．底物(wu)請(qing)避(bi)光保(bao)存(cun)。
7．嚴格按(an)照(zhao)說明書(shu)的操(cao)作(zuo)進(jin)行(xing)，試驗(yan)結果(guo)判定必(bi)須(xu)以酶標儀讀(du)數為(wei)準(zhun).
8．所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌(di)液(ye)和各種(zhong)廢(fei)棄(qi)物(wu)都應(ying)按(an)傳染(ran)物(wu)處理(li)。
9．本(ben)試劑(ji)不同(tong)批(pi)號組(zu)分(fen)不得(de)混用(yong)。
0.如與(yu)英文說明書(shu)有(you)異，以英文說明書(shu)為準(zhun)。

保(bao)存(cun)條件及有(you)效(xiao)期(qi)
．試(shi)劑(ji)盒保(bao)存(cun)：；2-8℃。
2．有(you)效(xiao)期(qi)：6個(ge)月