多(duo)重定(ding)量(liang)PCR的染料(liao)能(neng)進行(xing)多(duo)重定(ding)量(liang)PCR的儀(yi)器

PCR master mix含有緩(huan)沖液(ye)、鹽、dNTP、Mg和聚合(he)酶(mei)，如果(guo)我們(men)使(shi)用(yong)常(chang)規(gui).25× 或.5×的PCR master mix就已(yi)經(jing)差(cha)不多(duo)做(zuo)到了(le)上述原(yuan)則(ze)的三(san)至五(wu)。另(ling)外，您還(hai)可(ke)以(yi)選用(yong)轉為多重PCR優化的產(chan)品，例如NEB的多重PCR 5× Master Mix、Bio-Rad的iQ? Multiplex Powermix、或者安捷倫的Brilliant Multiplex QPCR Master Mix。
據(ju)安(an)捷倫的Mason介紹(shao)，Brilliant Multiplex QPCR Master Mix是(shi)經(jing)過專門設計的，ELISA試劑盒(he)能夠(gou)很好(hao)的解決同(tong)壹(yi)管(guan)中不同(tong)反應(ying)相互(hu)競(jing)爭的問題。如果(guo)壹(yi)個目標(biao)片(pian)段(duan)出(chu)現000次，而另(ling)壹(yi)個目標(biao)片(pian)段(duan)只(zhi)出(chu)現了(le)0次，那麽後壹(yi)個片段(duan)就(jiu)很容(rong)易淪為背景(jing)。“我們(men)的多重PCR試(shi)劑盒(he)能夠(gou)在同壹(yi)個管中(zhong)準(zhun)確定量(liang)低豐(feng)度和高(gao)風(feng)度(du)的目標(biao)片(pian)段(duan)，克(ke)服偏(pian)向性，"Mason說(shuo)。
我能(neng)擴(kuo)多(duo)少(shao)目(mu)標(biao)片(pian)段(duan)壹(yi)般(ban)來(lai)說(shuo)，zui多能(neng)在同壹(yi)個管中(zhong)同(tong)時(shi)檢測到五個目標(biao)片(pian)段(duan)，這(zhe)既是(shi)出(chu)於(yu)引(yin)物設計的考慮，也(ye)是(shi)由(you)多重定(ding)量(liang)PCR的硬件(jian)條件決(jue)定(ding)的。實時(shi)熒(ying)光(guang)PCR儀(yi)通常zui多(duo)檢測4至5個顏(yan)色(se)通道，其(qi)中(zhong)壹(yi)個可能(neng)還(hai)要留(liu)作(zuo)參考通道。凝膠(jiao)電(dian)泳(yong)雖(sui)然不受此(ci)限(xian)制，但多(duo)引(yin)物(wu)壹(yi)同(tong)作用仍(reng)然(ran)存在困難，因(yin)此(ci)還(hai)是(shi)zui多(duo)達到五(wu)重PCR。 “設計更多是(shi)挑戰(zhan)性(xing)的，"Cockrum說(shuo)。
      多重定(ding)量(liang)PCR的染料(liao)能(neng)進行(xing)多(duo)重定(ding)量(liang)PCR的儀(yi)器包括(kuo)：Life Tech公司的QuantStudio? 2K Flex Real-Time PCR System、安捷倫公(gong)司的Mx30005P等(deng)等(deng)。目(mu)前zui流行(xing)的選擇(ze)是(shi)HEX、FAM和VIC，而FAM/HEX和FAM/VIC是(shi)用(yong)的zui普(pu)遍的。Life Tech除(chu)了(le)VIC外，近(jin)期又(you)發布(bu)了(le)兩個新染料(liao)ABY和JUN以及(ji)壹(yi)個新passive reference dye——Mustang Purple。
Cockrum建(jian)議將(jiang)染料(liao)強(qiang)度與模板豐(feng)度(du)結(jie)合(he)起來，用(yong)zui亮(liang)的染料(liao)（通常是(shi)FAM）配(pei)zui少(shao)的模板，用(yong)zui黯(an)淡(dan)的染料(liao)（例如Cy5或(huo)Quasar 705）配豐(feng)度zui高(gao)的模板（如看(kan)家基(ji)因(yin)）。
更多重的PCR當(dang)然，ELISA試劑盒(he)引物設計是(shi)多(duo)重PCR的zui大障(zhang)礙(ai)，不過(guo)壹(yi)旦克服(fu)了(le)這(zhe)壹(yi)障(zhang)礙(ai)我們(men)就(jiu)能(neng)進行(xing)更多重的PCR反應(ying)。安捷倫的MassCode技術(shu)就能夠(gou)超越定(ding)量(liang)PCR儀(yi)帶來(lai)的硬件(jian)限(xian)制，安(an)捷倫公(gong)司將(jiang)這(zhe)壹(yi)技術(shu)給那些想(xiang)要同(tong)時(shi)篩選十(shi)個以上目標(biao)片(pian)段(duan)的用戶(hu)，例如可(ke)以用(yong)來檢測病原體(ti)。
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