降低組(zu)織非(fei)特(te)異(yi)性染(ran)色

如何zui大(da)限(xian)度(du)地(di)降(jiang)低組(zu)織非(fei)特(te)異(yi)性染(ran)色？

（）縮短(duan)壹(yi)抗/二抗孵育(yu)時間、稀(xi)釋(shi)抗體(ti)來控(kong)制。這(zhe)是zui重要(yao)的壹(yi)條。

（2）壹(yi)抗用(yong)多(duo)克隆抗體(ti)易出(chu)現非(fei)特(te)異(yi)性著(zhe)色，建(jian)議(yi)試用(yong)單(dan)克隆抗體(ti)看看(kan)。

（3）內源(yuan)性過(guo)氧(yang)化物酶(mei)和(he)在肝(gan)臟、腎臟等組(zu)織含(han)量(liang)很(hen)高（含血(xue)細胞(bao)多(duo)的組(zu)織），需(xu)要(yao)通(tong)過(guo)延(yan)長滅(mie)活(huo)時間和(he)增加滅(mie)活(huo)劑濃度(du)來降低背景染色；

（4）非特(te)異(yi)性組(zu)分與(yu)抗體(ti)結合(he)，這(zhe)需(xu)要(yao)通(tong)過(guo)延(yan)長二抗來源(yuan)的動物免(mian)疫(yi)血清(qing)封(feng)閉(bi)時間和(he)適(shi)當增加濃度(du)來加強(qiang)封(feng)閉(bi)效果；

（5）縮短(duan)DAB孵育(yu)時間或(huo)降低DAB濃度(du)/過(guo)氧(yang)化氫濃度(du)等；

（6）適當增加PBS沖洗次(ci)數和(he)浸洗時(shi)間，在壹(yi)抗、二抗或SP孵育(yu)之後(hou)的浸洗尤(you)為重要(yao)；

（7）防(fang)止(zhi)標(biao)本染色過程(cheng)中出(chu)現(xian)幹(gan)片(pian)，這(zhe)容(rong)易(yi)增強(qiang)非(fei)特異(yi)性著(zhe)色。

蘇木(mu)素復染(ran)時(shi)間的把握？

（）蘇(su)木素復染(ran)時(shi)間要(yao)看(kan)當時的室溫、溶液(ye)的新舊(jiu)、目(mu)標(biao)抗原的定位(wei)等情況，壹(yi)般數秒(miao)-數(shu)分鐘(zhong)。不(bu)過(guo)這(zhe)個(ge)如果(guo)染色不(bu)理(li)想(xiang)可以(yi)補救(jiu)的。即：染(ran)色深(shen)則(ze)分(fen)化時間稍長些即可；染(ran)色淺則(ze)再置於(yu)蘇(su)木素中染色即可。

（2）鹽(yan)酸酒(jiu)精是分化，氨水是返蘭。作用(yong)不(bu)同。片(pian)子(zi)復染(ran)完(wan)後(hou)流(liu)水振洗，然(ran)後(hou)置(zhi)於(yu)鹽(yan)酸酒(jiu)精中(zhong)數秒(miao)（壹(yi)定動作要(yao)快(kuai)）後(hou)拿(na)出(chu)流(liu)水振洗，在放(fang)入氨(an)水中返蘭即可。抗體(ti)

（3）如果(guo)分化的顏色過淺，可以(yi)復置(zhi)於(yu)蘇木(mu)素中染色。