血清(qing)脂(zhi)蛋白(bai)的(de)實驗操(cao)作

    原(yuan)理(li):將(jiang)血清(qing)脂(zhi)蛋白(bai)用(yong)脂類染料（如(ru)蘇(su)丹(dan)黑(hei)或(huo)油(you)紅O等(deng)）進(jin)行(xing)預(yu)染。再將(jiang)預(yu)染過(guo)的血清(qing)置(zhi)於瓊脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)板(ban)上進(jin)行(xing)電泳分(fen)離。通(tong)電後，脂(zhi)蛋白(bai)向正極(ji)移(yi)動(dong)，並(bing)分(fen)離為(wei)幾個(ge)區帶。

操(cao)作:

．預(yu)染血清(qing)：血清(qing)0.2ml加(jia)蘇丹(dan)黑(hei)染色(se)液0.2ml於小(xiao)試(shi)管中，混(hun)合後(hou)置37℃水浴染色(se)30分鐘，然(ran)後離心(xin)（2000轉/分，約5分鐘）。

2．制備瓊脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)板(ban)：將(jiang)已(yi)配制的0.45%瓊脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)於(yu)沸水浴中(zhong)加(jia)熱(re)融(rong)化，用(yong)吸管吸取凝膠(jiao)溶(rong)液澆註載(zai)玻片(pian)，每(mei)片(pian)2.5ml，靜(jing)置約半小(xiao)時(shi)後(hou)凝(ning)固(gu)（天(tian)熱(re)時(shi)需(xu)延(yan)長，可放(fang)冰(bing)箱(xiang)數(shu)分鐘(zhong)加(jia)速凝固(gu)）。

3．點(dian)加(jia)血清(qing)：已(yi)凝(ning)固(gu)的(de)瓊脂糖(tang)凝(ning)膠(jiao)板(ban)的(de)壹(yi)端(duan)約2cm處，用切口(kou)刀(dao)片(pian)垂(chui)直切(qie)入(ru)凝膠(jiao)後(hou)立即(ji)取出(chu)，然(ran)後用(yong)銅(tong)絲小(xiao)匙(chi)將(jiang)長方小(xiao)條凝膠(jiao)取(qu)出。以小(xiao)片(pian)濾(lv)紙(zhi)吸幹(gan)小(xiao)槽中(zhong)水分，用(yong)血色(se)素吸管吸取經過(guo)預(yu)染的血清(qing)約5μl，註入(ru)凝膠(jiao)板(ban)上的(de)小(xiao)槽內(nei)。

4．電泳：將(jiang)加(jia)過(guo)血清(qing)的(de)凝膠(jiao)板(ban)平(ping)行(xing)放(fang)入電泳槽(cao)中，樣(yang)品(pin)應(ying)在(zai)陰極(ji)壹(yi)端(duan)。兩塊(kuai)三(san)層(ceng)紗(sha)布(bu)於(yu)緩(huan)沖(chong)液中浸(jin)潤(run)，然後(hou)輕輕緊(jin)密貼(tie)在(zai)凝膠(jiao)板(ban)兩端，紗布的(de)另(ling)壹(yi)端(duan)浸(jin)於(yu)電泳槽(cao)內的(de)緩沖(chong)液（註意(yi)：此(ci)電極(ji)緩(huan)沖(chong)液不能(neng)用(yong)三(san)羥甲(jia)烷緩(huan)沖(chong)液代替）。接通(tong)電源(yuan)，電壓(ya)為(wei)20~30V，每(mei)片(pian)電流為3~4mA。約經電泳5至(zhi)55分鐘(zhong)，即可見分(fen)離之(zhi)色(se)帶。

結果(guo)及(ji)臨(lin)床(chuang)意(yi)義:

．正(zheng)常(chang)人(ren)血清(qing)脂(zhi)蛋白(bai)可(ke)出現三(san)條區帶，從負極(ji)到(dao)正(zheng)極(ji)依(yi)次(ci)為β-脂(zhi)蛋白(bai)（zui深(shen)）、前β-脂(zhi)蛋白(bai)（zui淺(qian)）、α-脂蛋白(bai)（比(bi)前β-脂(zhi)蛋白(bai)略(lve)深些(xie)），在(zai)原點(dian)處(chu)應(ying)無(wu)乳(ru)糜微(wei)粒(li)。

2．如果(guo)前β-脂(zhi)蛋白(bai)比(bi)α-脂蛋白(bai)深(shen)，結合(he)血清(qing)甘油(you)三(san)酯(zhi)明(ming)顯升高和正常或(huo)略高，可以定(ding)為Ⅳ型(xing)高脂蛋白(bai)血癥(zheng)。

3．如(ru)果β-脂(zhi)蛋白(bai)區帶比(bi)正常(chang)血清(qing)明(ming)顯深染者，同時(shi)結(jie)合(he)血清(qing)總(zong)明(ming)顯增高、甘油(you)三(san)酯(zhi)正常(chang)者為(wei)Ⅱa型(xing)；若結合血清(qing)總(zong)增高而甘油(you)三(san)酯(zhi)略高的前β略溶(rong)者為(wei)Ⅱb型(xing)。

4．結果β-和前β-兩區帶分(fen)離不開(kai)連(lian)在(zai)壹(yi)起稱(cheng)“寬(kuan)β區帶"，結(jie)合血清(qing)甘油(you)三(san)酯(zhi)和均(jun)有(you)所增(zeng)高，可定(ding)為Ⅲ型(xing)。

5．如(ru)果原點(dian)出(chu)現乳(ru)糜微(wei)粒(li)，β，前β均(jun)正常(chang)或(huo)減低，結(jie)合血清(qing)甘油(you)三(san)酯(zhi)明(ming)顯升高，可定(ding)為Ⅰ型(xing)。

註意(yi)事項(xiang):

．電泳樣(yang)品(pin)要求(qiu)為新鮮(xian)的(de)空腹血清(qing)。

2．每(mei)壹(yi)塊(kuai)凝(ning)膠(jiao)上可(ke)平(ping)行(xing)挖(wa)兩條小(xiao)槽，因而可(ke)加(jia)兩個(ge)樣品(pin)。

3．如(ru)果(guo)用壹(yi)形(xing)狀(zhuang)大小(xiao)和小(xiao)槽壹(yi)樣(yang)的(de)有(you)機玻璃(li)片(pian)，在(zai)瓊脂糖(tang)膠(jiao)凝(ning)固(gu)前(qian)固(gu)定(ding)於適(shi)當位子上，當凝固(gu)後(hou)取(qu)出(chu)有(you)機玻璃(li)片(pian)，凝(ning)膠(jiao)板(ban)上留(liu)下小(xiao)槽可(ke)直接加(jia)樣，不需(xu)挖(wa)槽(cao)。

4．如果需(xu)要保留電泳樣(yang)本(ben)，可(ke)將(jiang)電泳後(hou)之凝(ning)膠(jiao)板(ban)（連(lian)同玻片(pian)）放(fang)於清(qing)水中浸(jin)泡脫鹽2小(xiao)時(shi)，然(ran)後(hou)放(fang)烘箱(xiang)（80℃左右）烘幹(gan)即可(ke)。蛋白(bai)