小(xiao)鼠IgG ELISA試劑(ji)盒操(cao)作(zuo)步驟

小(xiao)鼠IgG ELISA試劑(ji)盒基(ji)本原(yuan)理：
    本實驗(yan)采(cai)用雙抗體夾(jia)心(xin) ELISA法。用抗小(xiao)鼠IgG單抗包被於(yu)酶標板上，標(biao)準(zhun)品(pin)和(he)樣(yang)品(pin)中的 IgG與單(dan)抗結(jie)合(he)，加入(ru)酶標抗體，形成(cheng)免(mian)疫復(fu)合(he)物(wu)連(lian)接(jie)在(zai)板上(shang)，加入酶底物(wu)TMB，出(chu)現(xian)藍色，加(jia)終止液(ye)硫酸，顏色變(bian)黃(huang)，在(zai)450nm處(chu)測OD值，IgG濃(nong)度與OD值(zhi)成(cheng)正(zheng)比，可通(tong)過繪制(zhi)標(biao)準曲(qu)線求(qiu)出(chu)標(biao)本中IgG濃(nong)度。
小(xiao)鼠IgG ELISA試劑(ji)盒操(cao)作(zuo)步驟
    實(shi)驗(yan)開始前，各(ge)試劑(ji)均(jun)應(ying)平衡(heng)至(zhi)室溫(wen)（試劑(ji)不(bu)能直接(jie)在(zai)37℃溶解）；試劑(ji)或(huo)樣(yang)品(pin)稀釋(shi)時(shi)，均(jun)需混勻(yun)，混勻(yun)時(shi)盡(jin)量避免起(qi)泡(pao)。實(shi)驗(yan)前應(ying)測量樣品(pin)含量，如樣(yang)品(pin)濃(nong)度過高(gao)時，應(ying)對樣(yang)品(pin)進(jin)行稀(xi)釋(shi)，以(yi)使(shi)稀(xi)釋(shi)後的樣品(pin)符合(he)試劑(ji)盒的檢(jian)測(ce)範(fan)圍，計算(suan)時(shi)再乘(cheng)以(yi)相(xiang)應(ying)的稀釋(shi)倍(bei)數。
. 加樣：分(fen)別(bie)設(she)空白孔、標(biao)準孔、待(dai)測樣(yang)品(pin)孔。空(kong)白孔加(jia)樣品(pin)稀釋(shi)液(ye)00μl，余(yu)孔分(fen)別(bie)加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)或待(dai)測樣(yang)品(pin)00μl，註意(yi)不(bu)要有氣(qi)泡(pao)，加(jia)樣(yang)將樣品(pin)加於(yu)酶標板孔底(di)部(bu)，盡(jin)量不觸及孔壁(bi)，輕(qing)輕晃動(dong)混勻(yun)，酶標板加上(shang)蓋(gai)或(huo)覆(fu)膜，37℃反應(ying)20分鐘。為(wei)保(bao)證實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)有(you)效性(xing)，每(mei)次實(shi)驗(yan)請(qing)使用新的標準(zhun)品(pin)溶液(ye)。ELISA試劑(ji)盒
2. 棄(qi)去(qu)液(ye)體，甩幹，不用洗滌。每(mei)孔加(jia)檢(jian)測(ce)溶液(ye)A工作(zuo)液(ye) 00μl（在(zai)使用前壹(yi)小(xiao)時內配制(zhi)），酶標板加上(shang)覆(fu)膜, 37℃反應(ying)60分鐘。
3. 溫(wen)育(yu)60分(fen)鐘後，棄去孔內(nei)液(ye)體，甩幹，洗板3次，每(mei)次浸泡(pao)-2分(fen)鐘，大約400μl/每(mei)孔，甩(shuai)幹（也可(ke)輕拍將孔內(nei)液(ye)體拍幹(gan)）。 
4. 每(mei)孔加(jia)檢(jian)測(ce)溶液(ye)B工作(zuo)液(ye)（同檢(jian)測(ce)A工作(zuo)液(ye)） 00μl，酶標板加上(shang)覆(fu)膜37℃反應(ying)60分鐘。
5. 溫(wen)育(yu)60分(fen)鐘後，棄去孔內(nei)液(ye)體，甩幹，洗板5次，每(mei)次浸泡(pao)-2分(fen)鐘，350μl/每(mei)孔，甩(shuai)幹（也可(ke)輕拍將孔內(nei)液(ye)體拍幹(gan)）。
6. 依(yi)序每(mei)孔加(jia)底物(wu)溶液(ye)90μl，酶標板加上(shang)覆(fu)膜37℃避光顯色（30分(fen)鐘內，此時(shi)肉(rou)眼可見標準(zhun)品(pin)的前3-4孔(kong)有(you)明顯的梯度蘭(lan)色，後3-4孔梯度不明(ming)顯，即可(ke)終止）。ELISA試劑(ji)盒
7. 依(yi)序每(mei)孔加(jia)終止溶液(ye)50μl，終止反(fan)應(ying)，此時(shi)藍色立(li)轉(zhuan)黃色。終止液(ye)的加入(ru)順序應(ying)盡(jin)量與底(di)物(wu)液(ye)的加入(ru)順序相(xiang)同。為(wei)了(le)保(bao)證實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)的準確(que)性(xing)，底(di)物(wu)反應(ying)時間到(dao)後應(ying)盡(jin)快(kuai)加入(ru)終止液(ye)。
8. 用酶聯儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)依(yi)序測量各(ge)孔的光密度（OD值）。 在(zai)加終止液(ye)後立(li)即(ji)進(jin)行檢(jian)測(ce)。