重(zhong)組(zu)體克隆(long)的篩(shai)選與(yu)鑒定

重組體克隆(long)的篩(shai)選與(yu)鑒定

    由(you)體(ti)外重組產(chan)生的DNA分子，通過轉(zhuan)化(hua)、轉(zhuan)染、轉(zhuan)導等適當(dang)途(tu)徑引入(ru)宿主(zhu)會得(de)到大(da)量的重(zhong)組體(ti)細胞(bao)或噬菌(jun)體(ti)。然(ran)而在(zai)這(zhe)些(xie)眾多的重(zhong)組體(ti)中，會有(you)多(duo)種類型的DNA分子，其中包(bao)括：不帶任何外源DNA插(cha)入(ru)片段，僅(jin)是(shi)由線(xian)性(xing)載體分子自身連接(jie)形(xing)成(cheng)的環(huan)狀(zhuang)DNA分子；由(you)壹個載體分子和(he)壹個或數個外源DNA片段構(gou)成(cheng)的重(zhong)組體(ti)DNA分子；單(dan)純(chun)由數個外源DNA片段彼(bi)此(ci)連(lian)接(jie)形(xing)成(cheng)的多(duo)聚DNA分子。當(dang)然(ran)zui後這(zhe)類多聚DNA分子由(you)於(yu)不具備復(fu)制起點(dian)和(he)復(fu)制基(ji)因(yin)，不能在(zai)轉化(hua)子中(zhong)存(cun)留，zui後被(bei)消(xiao)耗(hao)掉(diao)成(cheng)為(wei)無用(yong)的分子。盡(jin)管(guan)如(ru)此(ci)，面(mian)對(dui)由這(zhe)種混合的DNA制劑轉(zhuan)化(hua)而(er)來(lai)的大(da)量的克(ke)隆(long)群體，需(xu)要采(cai)用(yong)特殊的方法才能篩(shai)選(xuan)出(chu)可(ke)能含有(you)目的基(ji)因(yin)的重(zhong)組體(ti)克隆(long)。同時也(ye)需(xu)要用(yong)某種方法檢測從(cong)這(zhe)些(xie)克(ke)隆(long)中(zhong)提取的質(zhi)粒(li)或噬菌(jun)體(ti)DNA，看(kan)其是(shi)否確實(shi)具(ju)有壹個插入(ru)的外(wai)源DNA片段。即(ji)便在(zai)這(zhe)壹問題得到了證(zheng)實(shi)之後，也(ye)還不能肯(ken)定(ding)這(zhe)些(xie)重(zhong)組載體所含有(you)的外(wai)源DNA片段就(jiu)壹定是(shi)編碼所研究的目的基(ji)因(yin)的序(xu)列。為(wei)解決(jue)這(zhe)壹系列的問(wen)題，從為(wei)數眾多的轉(zhuan)化子克(ke)隆(long)中(zhong)分離出(chu)含有(you)目的基(ji)因(yin)的重(zhong)組體(ti)克隆(long)，需(xu)要建(jian)立壹整套行之有(you)效的特殊方法。

    目前已(yi)經(jing)發展和(he)應(ying)用(yong)了壹系列構(gou)思巧妙、可(ke)靠(kao)性(xing)較(jiao)高的重(zhong)組體(ti)克隆(long)檢(jian)測法，包(bao)括使用(yong)特異性(xing)探(tan)針的核酸(suan)雜交(jiao)法、免(mian)疫化學(xue)法、遺(yi)傳檢測法和物(wu)理檢測法等。細胞(bao)

遺(yi)傳檢測法

    遺(yi)傳檢測法可(ke)分為(wei)根據載體表型特征和根(gen)據插入(ru)序(xu)列的表(biao)型特征選擇重(zhong)組子兩(liang)種方法。

根據載體表型特征選擇重(zhong)組體分子的直接(jie)選擇法

    根據載體分子所提供(gong)的表(biao)型特征直接(jie)選擇重(zhong)組體DNA分子的遺(yi)傳選擇法是(shi)壹種十(shi)分有效的方法，當(dang)它(ta)與微生物(wu)學(xue)技(ji)術(shu)相(xiang)配(pei)合時便可(ke)適(shi)用(yong)於(yu)大量(liang)群體的篩(shai)選。在(zai)基(ji)因(yin)工程中使(shi)用(yong)的所有(you)的載體分子都帶有壹個可(ke)選(xuan)擇的遺(yi)傳標記(ji)或表型特征。質粒(li)以(yi)及(ji)柯斯(si)載體具有抗(kang)藥(yao)性(xing)標(biao)記(ji)或營養標記(ji)，而對(dui)於(yu)噬菌(jun)體(ti)來(lai)說(shuo)，噬菌(jun)斑(ban)的形(xing)成(cheng)則(ze)是(shi)它(ta)們的自我(wo)選(xuan)擇特征。根據載體分子所提供(gong)的遺(yi)傳特征進行(xing)選(xuan)擇，是(shi)獲(huo)得(de)重(zhong)組(zu)體(ti)DNA分子群體的*的條件之壹。正如(ru)已(yi)經(jing)敘述過(guo)的，這(zhe)種遺(yi)傳選擇法能將(jiang)重組(zu)體的DNA分子同非(fei)重組(zu)體(ti)的親(qin)本載體分子區(qu)別(bie)開(kai)來(lai)。抗(kang)生(sheng)素(su)抗(kang)性(xing)選(xuan)擇基(ji)因(yin)插入(ru)失(shi)活選(xuan)擇，或者是(shi)諸(zhu)如(ru)β-半(ban)乳(ru)糖(tang)苷酶(mei)基(ji)因(yin)壹類的顯(xian)色(se)反應(ying)，便是(shi)屬(shu)於(yu)這(zhe)種依(yi)據載體編碼的遺(yi)傳特性(xing)選(xuan)擇重(zhong)組體分子的典(dian)型方法。細胞(bao)