葉綠(lv)素的(de)實驗(yan)步驟(zhou)

    葉(ye)綠素(su)（chlorophyll)是壹(yi)類(lei)與光(guang)合作用(yong)(photosynthesis)有關的(de)zui重(zhong)要的(de)色素。光(guang)合作用(yong)是通過(guo)合成(cheng)壹(yi)些有機(ji)化(hua)合物將光(guang)能(neng)轉變為化(hua)學能(neng)的(de)過(guo)程(cheng)。葉綠(lv)素實際上存在於所(suo)有能(neng)營造(zao)光(guang)合作用(yong)的(de)生物體，包(bao)括綠(lv)色植物、原核(he)的(de)藍綠(lv)藻（藍(lan)菌(jun)）和(he)真(zhen)核(he)的(de)藻類(lei)。葉綠(lv)素從(cong)光(guang)中吸(xi)收能(neng)量，然(ran)後(hou)能(neng)量被(bei)用來(lai)將二(er)氧化(hua)碳轉變為碳水(shui)化(hua)合物。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

壹(yi)、原(yuan)理(li)

    根據(ju)葉(ye)綠體色素提取液(ye)對可見光(guang)譜的(de)吸收(shou)，利用分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)在某壹(yi)特(te)定(ding)波(bo)長(chang)測定(ding)其吸光(guang)度，即(ji)可用公式計(ji)算出(chu)提取液(ye)中各色素的(de)含量。根據(ju)朗(lang)伯—比爾定(ding)律，某有色溶液(ye)的(de)吸光(guang)度A與(yu)其中(zhong)溶質(zhi)濃度(du)C和(he)液(ye)層(ceng)厚(hou)度L成(cheng)正比，即A＝αCL式中(zhong)：α比例(li)常數(shu)。當(dang)溶液(ye)濃度(du)以(yi)百(bai)分濃度為單位，液(ye)層(ceng)厚(hou)度為cm時(shi)，α為該(gai)物質(zhi)的(de)吸光(guang)系數(shu)。各種有色物質(zhi)溶液(ye)在不同波(bo)長(chang)下的(de)吸光(guang)系數(shu)可通過(guo)測定(ding)已知濃度(du)的(de)純物質(zhi)在不同波(bo)長(chang)下的(de)吸光(guang)度而(er)求得。如果溶液(ye)中有數(shu)種吸光(guang)物質(zhi)，則此(ci)混(hun)合液(ye)在某壹(yi)波(bo)長(chang)下的(de)總吸光(guang)度等於各組(zu)分在相應(ying)波(bo)長(chang)下吸光(guang)度的(de)總和。這就(jiu)是吸(xi)光(guang)度的(de)加(jia)和(he)性。今(jin)欲(yu)測定(ding)葉綠體色素混合提取液(ye)中葉(ye)綠(lv)素(su)a、b和類(lei)胡蘿蔔(bu)素(su)的(de)含量，只需(xu)測定(ding)該提取液(ye)在三個(ge)特(te)定(ding)波(bo)長(chang)下的(de)吸光(guang)度A，並根據(ju)葉(ye)綠素a、b及類(lei)胡蘿蔔(bu)素(su)在該波(bo)長(chang)下的(de)吸光(guang)系數(shu)即可求出(chu)其濃度(du)。在測定(ding)葉綠素a、b時(shi)為了(le)排(pai)除(chu)類(lei)胡蘿蔔(bu)素(su)的(de)幹擾(rao)，所(suo)用單色光(guang)的(de)波(bo)長(chang)選(xuan)擇(ze)葉(ye)綠素(su)在紅光(guang)區的(de)zui大吸(xi)收峰(feng)。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

二、材料、儀器設備(bei)及試(shi)劑(ji)

（壹(yi)）材(cai)料：新(xin)鮮（或(huo)烘(hong)幹）的(de)植物葉片(pian)。

（二）儀(yi)器設備(bei)：. 分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)；2. 電子(zi)頂載天(tian)平（感量0.0g）；3. 研(yan)缽(bo)；4. 棕色容量瓶；5. 小漏(lou)鬥(dou)；6. 定(ding)量濾(lv)紙(zhi)；7. 吸(xi)水(shui)紙(zhi)；8. 擦境紙；9. 滴(di)管。

（三）試(shi)劑(ji)：96％乙醇(chun)（或(huo)80％丙酮）；石英砂；碳酸(suan)鈣粉(fen)。

三、實(shi)驗(yan)步驟(zhou)

. 取新(xin)鮮植(zhi)物葉片(pian)（或其(qi)它(ta)綠(lv)色組(zu)織(zhi)）或(huo)幹材料，擦凈(jing)組(zu)織(zhi)表面汙物，剪碎(sui)（去(qu)掉中脈(mai)），混(hun)勻。2. 稱取剪碎(sui)的(de)新(xin)鮮樣(yang)品0.2g，共(gong)3份(fen)，分別放入(ru)研(yan)缽(bo)中(zhong)，加(jia)少(shao)量石英砂和(he)碳酸(suan)鈣粉(fen)及2～3ml95％乙醇(chun)，研(yan)成(cheng)均漿，再(zai)加(jia)乙醇(chun)0ml，繼續研(yan)磨(mo)至組(zu)織(zhi)變(bian)白。靜置3～5min。3. 取濾(lv)紙(zhi)張(zhang)，置(zhi)漏(lou)鬥(dou)中，用(yong)乙醇(chun)濕潤，沿(yan)玻棒(bang)把提取液(ye)倒入(ru)漏(lou)鬥(dou)中，過(guo)濾(lv)到25ml棕色容量瓶中，用(yong)少量乙醇(chun)沖(chong)洗(xi)研(yan)缽(bo)、研(yan)棒(bang)及殘(can)渣數(shu)次(ci)，zui後(hou)連(lian)同殘(can)渣壹(yi)起(qi)倒(dao)入(ru)漏(lou)鬥(dou)中。4. 用(yong)滴(di)管吸取乙醇(chun)，將(jiang)濾(lv)紙(zhi)上的(de)葉綠(lv)體色素全部洗(xi)入容(rong)量瓶中。直至(zhi)濾(lv)紙(zhi)和(he)殘(can)渣中(zhong)無(wu)綠色為止。zui後(hou)用乙醇(chun)定(ding)容至25ml，搖(yao)勻。5. 把(ba)葉綠(lv)體(ti)色素提取液(ye)倒入(ru)光(guang)徑cm的(de)比色杯內(nei)。以(yi)95％乙醇(chun)為空(kong)白(bai)，在波(bo)長(chang)665nm、649nm下測定(ding)吸光(guang)度。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)

四、實驗(yan)結果計(ji)算：將(jiang)測定(ding)得到的(de)吸光(guang)值代入下面的(de)式子(zi)：Ca=3.9665－6.88A649；Cb=24.96A649－7.32A665。據(ju)此(ci)即(ji)可得到葉綠(lv)素(su)a和(he)葉(ye)綠(lv)素(su)b的(de)濃度(du)（Ca、Cb：mg/L），二者(zhe)之(zhi)和為總葉綠素的(de)濃度(du)。zui後(hou)根據(ju)下式可進壹(yi)步求出(chu)植物組(zu)織(zhi)中(zhong)葉綠素的(de)含量：
葉(ye)綠素(su)的(de)含量（mg/g）= [葉(ye)綠素(su)的(de)濃度(du)×提取液(ye)體積(ji)×稀(xi)釋(shi)倍(bei)數]/樣(yang)品(pin)鮮重(zhong)（或幹(gan)重(zhong)）。