定(ding)性(xing)夾(jia)心免疫檢測(ce)技(ji)術

     ELISA檢(jian)測試劑盒(he)應用(yong)定(ding)性(xing)夾(jia)心免疫檢測(ce)技(ji)術，用(yong)合(he)成的(de)HEV多(duo)肽抗原(yuan)包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)板(ban)板(ban)條(tiao)，這(zhe)些多肽是(shi)中國(guo)型HEV毒株(zhu)核心氨(an)基(ji)酸序(xu)列中抗原(yuan)性(xing)很強(qiang)的(de)肽段(duan)，分別(bie)來自於(yu)該(gai)毒株(zhu)的(de)開放(fang)閱(yue)讀(du)框2和開(kai)放(fang)閱(yue)讀(du)框3。

    將樣(yang)品(pin)或標準(zhun)品加入(ru)孔(kong)中並(bing)孵(fu)育(yu)，如果(guo)其(qi)中存(cun)在HEV IgM抗體(ti)，這(zhe)些抗體(ti)就會(hui)與HEV 的(de)多(duo)肽抗原(yuan)結(jie)合(he)，並固(gu)定(ding)在上面(mian)，洗板(ban)除(chu)去其它(ta)非(fei)特異性抗體(ti)和樣(yang)品(pin)中的(de)其(qi)它(ta)成(cheng)份(fen)。然後(hou)加入(ru)羊(yang)抗人IgM-HRP（辣根過氧化(hua)物酶(mei)）酶(mei)結(jie)合(he)物，經第(di)二(er)次(ci)孵(fu)育(yu)後(hou)，酶(mei)結(jie)合(he)物就(jiu)會(hui)與*次(ci)孵(fu)育(yu)結(jie)合(he)上的(de)HEV IgM抗體(ti)相結(jie)合(he)，洗板(ban)除(chu)去未結(jie)合(he)的酶(mei)結(jie)合(he)物，加入(ru)TMB底(di)物溶(rong)液(ye)，在第三(san)次(ci)孵(fu)育(yu)時會(hui)發生(sheng)酶(mei)-底(di)物反應，只(zhi)有那(na)些含有(you)HEV IgM抗體(ti)和酶(mei)結(jie)合(he)物所(suo)形(xing)成的復(fu)合(he)物的(de)孔(kong)才(cai)會(hui)發生(sheng)顏色(se)變化，加入(ru)硫(liu)酸溶液(ye)終止(zhi)酶(mei)和底(di)物間(jian)的(de)反應，並(bing)在波(bo)長: 450nm處測(ce)量O.D.值(zhi),按(an)照(zhao)本(ben)HEV IgM抗體(ti)elisa試劑盒(he)的測試標準(zhun), O.D.值(zhi)大(da)於(yu)或等於Cut-Off值(zhi)的(de)樣(yang)品(pin)被(bei)認(ren)為是(shi)初(chu)試陽(yang)性(xing)。

elisa技(ji)術流(liu)程(cheng)

    ELISA的(de)基(ji)礎(chu)是(shi)抗原(yuan)或抗體(ti)的固相化(hua)及抗原(yuan)或抗體(ti)的酶(mei)標記(ji)。結(jie)合(he)在固相載體(ti)表(biao)面(mian)的抗原(yuan)或抗體(ti)仍(reng)保(bao)持(chi)其(qi)免(mian)疫學(xue)活(huo)性，酶(mei)標記(ji)的(de)抗原(yuan)或抗體(ti)既保(bao)留(liu)其(qi)免(mian)疫學(xue)活(huo)性，又(you)保留(liu)酶(mei)的(de)活(huo)性。在測定(ding)時(shi)，受檢(jian)標本(ben)（測(ce)定(ding)其(qi)中的(de)抗體(ti)或抗原(yuan)）與(yu)固相載體(ti)表(biao)面(mian)的抗原(yuan)或抗體(ti)起(qi)反應。

    用(yong)洗滌的方法(fa)使(shi)固(gu)相載體(ti)上形(xing)成的抗原(yuan)抗體(ti)復(fu)合(he)物與(yu)液(ye)體(ti)中的(de)其(qi)他(ta)物質(zhi)分(fen)開。再(zai)加入(ru)酶(mei)標記(ji)的(de)抗原(yuan)或抗體(ti)，也通過反應而(er)結(jie)合(he)在固相載體(ti)上。此時固相上(shang)的(de)酶(mei)量(liang)與(yu)標本(ben)中受檢(jian)物質(zhi)的(de)量呈(cheng)壹定(ding)的(de)比(bi)例。加入(ru)酶(mei)反應的(de)底(di)物後(hou)，底物被(bei)酶(mei)催(cui)化(hua)成(cheng)為有(you)色(se)產(chan)物，產(chan)物的(de)量(liang)與標本(ben)中受檢(jian)物質(zhi)的(de)量直(zhi)接(jie)相關(guan)，故(gu)可根據呈(cheng)色(se)的(de)深(shen)淺(qian)進(jin)行定(ding)性(xing)或定(ding)量(liang)分(fen)析(xi)。由於酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)效率(lv)很(hen)高，間接(jie)地放(fang)大了(le)免疫反應的(de)結(jie)果，使(shi)測(ce)定(ding)方法(fa)達到(dao)很高的敏(min)感度(du)。 ELISA可用(yong)於(yu)測(ce)定(ding)抗原(yuan)，也(ye)可用(yong)於(yu)測(ce)定(ding)抗體(ti)。然而(er)，影(ying)響Elisa試驗結(jie)果的(de)因(yin)素(su)很(hen)多(duo)，故(gu)加強(qiang)各(ge)個環(huan)節(jie)的(de)質(zhi)量(liang)保證才(cai)能(neng)充(chong)分(fen)發揮(hui)其(qi)方法(fa)學(xue)的(de)優(you)點。