、植(zhi)物組(zu)織(zhi)蛋白(bai)質提取(qu)方法(fa)
、根(gen)據樣品(pin)重量(liang)(g樣品(pin)加(jia)入(ru)3.5ml提(ti)取(qu)液(ye),可根(gen)據材料不(bu)同適(shi)當(dang)加(jia)入(ru)),準(zhun)備提取液(ye)放在(zai)冰(bing)上。
2、把樣品(pin)放在(zai)研(yan)缽中(zhong)用(yong)液(ye)氮(dan)研磨(mo),研(yan)磨(mo)後(hou)加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)中在(zai)冰(bing)上靜(jing)置(3-4小(xiao)時)。
3、用(yong)離心機(ji)離(li)心(xin)8000rpm40min4℃或00rpm20min4℃
4、提(ti)取上清(qing)夜,樣(yang)品(pin)制備完成(cheng)。
蛋白(bai)質提取(qu)液(ye):300ml
、Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(you)(Glycerol)75ml
3、聚(ju)乙(yi)烯吡咯烷酮(tong)(Polyvinylpolypyrrordone)6g
這種(zhong)方法(fa)針(zhen)對SDS-PAGE,垂(chui)直(zhi)板(ban)電(dian)泳!
2、植(zhi)物組(zu)織(zhi)蛋白(bai)質提取(qu)方法(fa)
三(san)氯(lv)醋(cu)酸(suan)—丙酮(tong)沈澱法(fa)
、在(zai)液(ye)氮(dan)中研(yan)磨(mo)葉(ye)片
2、加(jia)入(ru)樣(yang)品(pin)體積(ji)3倍(bei)的(de)提取液(ye)在(zai)-20℃的(de)條件(jian)下(xia)過夜(ye),然(ran)後(hou)離心(xin)(4℃8000rpm以(yi)上小(xiao)時)棄上清(qing)。
3、加(jia)入(ru)等(deng)體(ti)積的冰(bing)浴(yu)丙酮(含(han)0.07%的β-巰(qiu)基乙(yi)醇),搖(yao)勻後(hou)離心(xin)(4℃8000rpm以(yi)上小(xiao)時),然(ran)後(hou)真(zhen)空幹(gan)燥沈澱,備用(yong)。
4、上樣(yang)前加(jia)入(ru)裂(lie)解(jie)液(ye),室溫(wen)放置30分(fen)鐘(zhong),使(shi)蛋白(bai)充分(fen)溶(rong)於裂(lie)解(jie)液(ye)中,然(ran)後(hou)離心(xin)(5℃8000rpm以(yi)上小(xiao)時或更長(chang)時間(jian)以沒(mei)有沈澱為(wei)標(biao)準(zhun)),可臨時保存(cun)在(zai)4℃待用(yong)。
5、用(yong)Brandford法定量(liang)蛋白(bai),然(ran)後(hou)可分(fen)裝放入-80℃備用(yong)。
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