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壹(yi)、ELISA試劑(ji)盒臨床標本的(de)收集和(he)保存
用(yong)於(yu)ELISA測定的(de)臨(lin)床標本zui為(wei)常用的(de)是(shi)血清(qing)(漿(jiang)),有(you)時(shi)因為(wei)特定的(de)檢(jian)測目的(de),也(ye)用到(dao)唾液、腦(nao)脊(ji)液(ye)、尿液(ye)、糞便(bian)等(deng)標(biao)本(ben)。目前臨床(chuang)上(shang)使用血清(qing)標(biao)本(ben)測定的(de)標(biao)誌(zhi)物壹(yi)般有(you)傳染性病原(yuan)體(ti)的(de)抗(kang)原(yuan)和抗(kang)體(ti)、腫瘤(liu)標誌(zhi)物、激(ji)素、特種(zhong)蛋白、細胞(bao)因子和治(zhi)療(liao)藥(yao)物等(deng)。對(dui)用(yong)於激(ji)素和(he)治療(liao)藥(yao)物測定的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本(ben)的(de)收集,要(yao)註(zhu)意(yi)收集時(shi)間(jian)甚或(huo)體(ti)位有可(ke)能(neng)會對測定結(jie)果產生影響。如可(ke)的(de)松(song)在(zai)早(zao)晨(chen)4~6點(dian)之間(jian),會有壹(yi)峰(feng)值出現(xian):生長激(ji)素、促黃體(ti)激(ji)素(LH)和(he)促卵泡(pao)激(ji)素(FSH)均(jun)以陣(zhen)發(fa)性方式釋放,因此(ci),在(zai)測定此類激(ji)素時(shi),有必(bi)要在密切相連的(de)時(shi)間(jian)間(jian)隔內采取數份血樣本,以(yi)其中(zhong)間(jian)值為(wei)測定值。又(you)如(ru)當(dang)從(cong)臥位變(bian)為(wei)站立(li)位時,血(xue)清(qing)中(zhong)腎素(su)活(huo)性將出現(xian)明顯增(zeng)高。再如(ru)治(zhi)療(liao)藥(yao)物的(de)檢(jian)測,應根(gen)據(ju)藥(yao)代(dai)動(dong)力(li)學選(xuan)擇服(fu)藥(yao)後的(de)zui適(shi)時間(jian)抽血(xue)檢(jian)測。用於(yu)傳染性病原(yuan)體(ti)的(de)抗(kang)原(yuan)和抗(kang)體(ti)、腫瘤(liu)標誌(zhi)物和(he)特種(zhong)蛋白等(deng)的(de)檢(jian)測的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本(ben)的(de)收集則沒(mei)有時(shi)間(jian)和體(ti)位方面的(de)影響,只(zhi)是(shi)在(zai)處(chu)理(li)和保(bao)存方(fang)面要(yao)考(kao)慮以(yi)下(xia)幾(ji)個方面:
()要(yao)註(zhu)意(yi)避免(mian)出現(xian)嚴重(zhong)溶血(xue)。血(xue)紅蛋白中含(han)有血(xue)紅(hong)素(su)基(ji)團(tuan),其有(you)類(lei)似過氧(yang)化物的(de)活(huo)性,因此(ci),在(zai)以HRP為(wei)標記(ji)酶(mei)的(de)ELISA測定中,如血清(qing)標(biao)本(ben)中(zhong)血(xue)紅蛋白濃(nong)度(du)較(jiao)高,則其就很容(rong)易在(zai)溫育(yu)過程中吸附於固(gu)相,從(cong)而(er)與(yu)後(hou)面加(jia)入的(de)HRP底(di)物反(fan)應(ying)顯(xian)色(se)。
(2)樣本的(de)采集及血清(qing)分離中要註(zhu)意(yi)盡量避免(mian)細菌(jun)汙(wu)染,壹(yi)則細菌(jun)的(de)生長,其所分泌的(de)壹(yi)些酶(mei)可(ke)能(neng)會對抗(kang)原(yuan)抗(kang)體(ti)等(deng)蛋白產生分解作(zuo)用;二則壹(yi)些細菌(jun)的(de)內源性酶(mei)如大(da)腸桿(gan)菌(jun)的(de)β-半(ban)乳糖苷(gan)酶(mei)本(ben)身(shen)會對用相應酶(mei)作(zuo)標記(ji)的(de)測定方法產生非特異性幹擾。
(3)血清(qing)標(biao)本(ben)如(ru)是(shi)以無菌操(cao)作(zuo)分離,則可(ke)以(yi)在(zai)2~8℃下(xia)保(bao)存壹(yi)周,如為(wei)有(you)菌操作(zuo),則建(jian)議(yi)冰(bing)凍保存。樣本的(de)長(chang)時間(jian)保存,應(ying)在(zai)-70℃以下(xia)。
(4)冰(bing)凍保存的(de)血(xue)清(qing)標(biao)本(ben)須(xu)註(zhu)意(yi)避免(mian)因停(ting)電等(deng)造(zao)成的(de)反(fan)復(fu)凍融(rong)。標(biao)本(ben)的(de)反(fan)復(fu)凍融(rong)所產生的(de)機(ji)械(xie)剪(jian)切力(li)將對(dui)標本中的(de)蛋白等(deng)分子產生破壞(huai)作(zuo)用,從(cong)而(er)引(yin)起假陰(yin)性結(jie)果。此外(wai),凍融(rong)標(biao)本(ben)的(de)混(hun)勻亦應(ying)註(zhu)意(yi),不要進(jin)行劇(ju)烈振(zhen)蕩,反(fan)復(fu)顛(dian)倒混(hun)勻(yun)即可(ke)。
(5)標(biao)本(ben)在(zai)保(bao)存中(zhong)如(ru)出現(xian)細菌(jun)汙(wu)染所致(zhi)的(de)混(hun)濁或絮狀(zhuang)物(wu)時,應(ying)離(li)心沈(chen)澱(dian)後取上清(qing)檢(jian)測。
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