ELISA試劑盒(he)定性(xing)測(ce)定的(de)比色可(ke)在室溫(wen)進(jin)行？

ELISA試劑盒(he)定性(xing)測(ce)定的(de)比色可(ke)在室溫(wen)進(jin)行？此(ci)時酶(mei)催(cui)化(hua)無色(se)的底物(wu)生(sheng)成有(you)色的(de)產(chan)物(wu)。反(fan)應的溫度(du)和(he)時(shi)間(jian)仍是影(ying)響(xiang)顯色(se)的(de)因(yin)素。在壹(yi)定時(shi)間(jian)內，陰(yin)性(xing)孔可保(bao)持無(wu)色，而(er)陽(yang)性(xing)孔則(ze)隨時間(jian)的延(yan)長而(er)呈色加(jia)強。適當(dang)提(ti)高(gao)溫度(du)有(you)助於(yu)加(jia)速顯色(se)進(jin)行。在定量測(ce)定中(zhong)，加(jia)入(ru)底(di)物(wu)後的(de)反(fan)應溫度和(he)時(shi)間(jian)應按規定(ding)力(li)求(qiu)準(zhun)確(que)。ELISA試劑盒(he)時間(jian)壹(yi)般不需(xu)要嚴(yan)格(ge)控(kong)制(zhi)，有(you)時可根據(ju)陽(yang)性(xing)對照孔和(he)陰(yin)性(xing)對照孔的(de)情況適當(dang)縮短(duan)或延(yan)長反(fan)應時間(jian)，及時(shi)判斷(duan)。

OPD底物(wu)顯色(se)壹(yi)般在室外(wai)溫(wen)或37 ℃反(fan)應20-30分(fen)鐘後即不再(zai)加(jia)深(shen)，再(zai)延長反(fan)應時間(jian)，可使(shi)本(ben)底值(zhi)增高(gao)。OPD底物(wu)液受(shou)光(guang)照會自(zi)行變色(se)，顯色(se)反(fan)應應避光(guang)進(jin)行，顯色(se)反(fan)應結束時(shi)加(jia)入(ru)終(zhong)止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反(fan)應。OPD產(chan)物(wu)用(yong)硫酸終(zhong)止(zhi)後，顯色(se)由(you)橙(cheng)黃色(se)轉(zhuan)向棕(zong)黃色(se)。

    TMB受(shou)光(guang)照的影(ying)響(xiang)不大(da)，ELISA試劑盒(he)可在室溫(wen)中(zhong)置(zhi)於(yu)操(cao)作臺上(shang)，邊(bian)反(fan)應觀(guan)察結(jie)果(guo)。但(dan)為保(bao)證實(shi)驗(yan)結果的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)，宜(yi)在規定(ding)的適當(dang)時(shi)間(jian)閱讀(du)結(jie)果(guo)。TMB經(jing)HRP作用後，約40分(fen)鐘顯色(se)達，隨即逐漸減(jian)弱，至2小(xiao)時(shi)後即可*消(xiao)退至無(wu)色(se)。TMB的終(zhong)止(zhi)液有多種(zhong)，疊氮(dan)鈉和(he)十(shi)二烷(wan)基硫酸鈉（SDS）等酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)均可(ke)使(shi)反(fan)應終(zhong)止(zhi)。這(zhe)類(lei)終(zhong)止(zhi)劑(ji)尚(shang)能(neng)使(shi)藍(lan)色(se)維(wei)持較(jiao)長時(shi)間(jian)（2-24小時(shi)）不褪(tui)，是(shi)目(mu)視(shi)判斷(duan)的良好終(zhong)止(zhi)劑(ji)。此(ci)外，各(ge)類(lei)酸(suan)性(xing)終(zhong)止(zhi)液則(ze)會使(shi)藍色轉(zhuan)變成(cheng)黃色(se)，此(ci)時可(ke)用特定的波(bo)長（450 nm）測(ce)讀(du)吸光(guang)值(zhi)。

比色

    比色前(qian)應(ying)先用潔(jie)凈的吸水(shui)紙(zhi)拭(shi)幹(gan)板底附著(zhe)的液體，ELISA試劑盒(he)然後將(jiang)板正確(que)放(fang)入(ru)酶(mei)標(biao)比色儀(yi)的比色架中。以(yi)軟板為載體的試驗(yan)，需先將(jiang)板置(zhi)於(yu)標(biao)準96孔的座架中，才可進(jin)行比色。在加(jia)底(di)物(wu)液顯色(se)前(qian)，先(xian)將軟板邊(bian)緣剪凈，這樣，此板就(jiu)可(ke)*平妥坐入(ru)座(zuo)架中。