ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)如何(he)選(xuan)擇*化(hua)的包(bao)被條(tiao)件(jian)?

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)如何(he)選(xuan)擇*化(hua)的包(bao)被條(tiao)件(jian)?
.包被抗(kang)原的選(xuan)擇(ze)
包(bao)被抗(kang)原可分(fen)為(wei)天(tian)然(ran)蛋(dan)白(bai)、重組蛋(dan)白(bai)和小分(fen)子(zi)抗(kang)原三大類。天(tian)然(ran)蛋(dan)白(bai)需經(jing)純(chun)化(hua)才(cai)能(neng)用(yong)直(zhi)接(jie)吸附(fu)法(fa)包(bao)被，對(dui)於(yu)含雜質較(jiao)多(duo)的抗(kang)原可以(yi)采用(yong)間(jian)接(jie)捕(bu)獲法(fa)包(bao)被(先(xian)用(yong)能夠與(yu)目的抗(kang)原反(fan)應(ying)的物(wu)質(zhi)如(ru)抗(kang)體直(zhi)接(jie)吸附(fu)在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)上，再(zai)通過(guo)特(te)異(yi)性(xing)反(fan)應(ying)使抗(kang)原固相化(hua))。經(jing)純(chun)化的重組蛋(dan)白(bai)壹(yi)般(ban)皆(jie)可直(zhi)接(jie)包板(ban)。小分(fen)子(zi)抗(kang)原比如多(duo)肽(tai)以(yi)及(ji)壹(yi)些小分(fen)子(zi)有(you)機(ji)化(hua)合(he)物(wu)，由於(yu)分子(zi)量太小，往往難(nan)於(yu)直(zhi)接(jie)吸附(fu)在(zai)酶(mei)標(biao)板(ban)上，壹(yi)般(ban)都先(xian)使其與(yu)無關蛋(dan)白(bai)質如(ru)BSA等(deng)偶(ou)聯(lian)，偶(ou)聯(lian)物(wu)吸(xi)附(fu)於(yu)固相載(zai)體(ti)上(shang)。
2.包被液的選(xuan)擇(ze)
壹(yi)般(ban)常用(yong)的是pH9.6的碳(tan)酸鹽緩(huan)沖(chong)液，如(ru)果(guo)包被的抗(kang)原在堿性條(tiao)件(jian)下不穩定的話(hua)，也(ye)可以(yi)使用pH7.2的磷酸鹽緩(huan)沖(chong)液。
3.包(bao)被溫(wen)度(du)的選(xuan)擇(ze)
通(tong)常是4-8度(du)條(tiao)件(jian)下過夜(ye)或(huo)者37度(du)保(bao)溫2小時(shi)，我們強烈建(jian)議4-8度(du)條(tiao)件(jian)下包被，有(you)利(li)於(yu)蛋(dan)白(bai)活性(xing)的保(bao)持。
4.包(bao)被濃(nong)度(du)的選(xuan)擇(ze)
包(bao)被的zui適(shi)濃(nong)度(du)隨固相載(zai)體(ti)和包(bao)被物(wu)的性(xing)質(zhi)變(bian)化，壹(yi)般(ban)蛋(dan)白(bai)質的包(bao)被濃(nong)度(du)為(wei)-5ug/ml，要明(ming)確針對特定包被抗(kang)原的zui適(shi)包(bao)被濃(nong)度(du)需(xu)要(yao)通(tong)過實驗(yan)來確定。
包板(ban)後(hou)需要封(feng)閉(bi)嗎?應(ying)該(gai)選(xuan)擇什(shen)麽(me)樣的封(feng)閉(bi)體(ti)系(xi)?
封(feng)閉(bi)是否必(bi)要(yao)，取決於(yu)ELISA的模(mo)式(shi)及具(ju)體(ti)的實(shi)驗(yan)條(tiao)件(jian)。壹(yi)般(ban)說(shuo)來，雙(shuang)抗(kang)體夾心(xin)法(fa)，只(zhi)要(yao)酶(mei)標(biao)記物(wu)是高(gao)活性(xing)的，操(cao)作時(shi)洗滌(di)*，不(bu)經封(feng)閉(bi)也(ye)可得(de)到(dao)滿意(yi)的結(jie)果(guo)。而在間(jian)接(jie)法測(ce)定中，封閉(bi)壹(yi)般(ban)是*的。
常(chang)用(yong)的封(feng)閉(bi)劑(ji)有(you)0.05%-0.5%的BSA、0%的小牛(niu)血清、%明膠(jiao)、5%的脫(tuo)脂(zhi)奶粉，AbMART使用5%脫(tuo)脂(zhi)奶粉，價廉而且(qie)封閉(bi)能(neng)力強，不過(guo)5%脫(tuo)脂(zhi)奶粉只適(shi)合(he)短(duan)期內(nei)使用，不(bu)宜保(bao)存(cun)，所(suo)以(yi)試(shi)劑(ji)盒(he)中較(jiao)少使用。