ELISA技術法的(de)操作要點

ELISA技(ji)術法的(de)操作要點

 血清(qing)標本(ben)可(ke)按(an)常(chang)規方法采集，應(ying)留意避(bi)免溶血，紅細胞溶解(jie)時(shi)會(hui)開釋(shi)出(chu)具有過氧(yang)化(hua)物酶活性(xing)的(de)物質(zhi)，以(yi)HRP 為(wei)標記的(de)ELISA 測定(ding)中，溶血標本(ben)可(ke)能(neng)會增(zeng)加非特(te)異(yi)性(xing)顯色。ELISA的(de)操縱因(yin)固(gu)相載(zai)體的(de)形(xing)成(cheng)不(bu)同而(er)有所(suo)差(cha)異(yi)，海(hai)內(nei)醫學檢修壹(yi)般(ban)均(jun)用板式點。

的(de)試(shi)劑(ji)，良好的(de)儀器和準確(que)的(de)操縱是(shi)保(bao)證ELISA試(shi)劑(ji)盒檢測(ce)結(jie)果(guo)正(zheng)確(que)可(ke)靠(kao)的(de)必要前提。血清(qing)標本(ben)宜在新(xin)鮮時(shi)檢測(ce)。血(xue)漿中除尚(shang)含有纖(xian)維(wei)蛋白原(yuan)和抗(kang)凝(ning)劑(ji)外，其他成(cheng)份(fen)均(jun)同即是血清(qing)。如有(you)細菌汙染(ran)，菌(jun)體(ti)中可(ke)能(neng)含有內(nei)源性(xing)HRP ，也會(hui)產(chan)生(sheng)假陽(yang)性(xing)反應(ying)。有些(xie)標(biao)本(ben)可(ke)直接進(jin)行(xing)測定(ding)（如血(xue)清(qing)、尿液(ye)），有些(xie)則(ze)需經預(yu)處(chu)理（如糞(fen)便(bian)和某些(xie)分(fen)泌(mi)物）。制備血(xue)漿標本(ben)需借(jie)助於(yu)抗(kang)凝(ning)劑(ji)，而(er)血清(qing)標本(ben)只(zhi)要待(dai)血(xue)清(qing)天然凝(ning)固(gu)、血(xue)收縮(suo)後即可(ke)取得。大(da)部門(men)ELISA檢測(ce)均(jun)以(yi)血(xue)清(qing)為(wei)標本(ben)。在ELISA中(zhong)血漿和血清(qing)可(ke)平(ping)等應(ying)用。凍(dong)結(jie)血(xue)清(qing)融解(jie)後，蛋白質(zhi)局(ju)部濃(nong)縮(suo)，分(fen)布不(bu)均(jun)，應(ying)充分(fen)混(hun)勻宜輕緩，避(bi)免氣(qi)泡，可(ke)上下倒(dao)置混(hun)和，不(bu)要在混(hun)勻器上強烈振蕩。混(hun)濁或(huo)有沈(chen)澱的(de)血清(qing)標本(ben)應(ying)先離(li)心或(huo)過濾(lv)，澄清(qing)後再(zai)檢測(ce)。

標(biao)本(ben)的(de)采取和保(bao)留
    可(ke)用作(zuo)ELISA測(ce)定(ding)的(de)標本(ben)十分(fen)廣泛(fan)，體(ti)液(ye)（如血(xue)清(qing)）、分泌(mi)物（唾(tuo)液）和排泄(xie)物（如尿(niao)液(ye)、糞(fen)便(bian)）等均(jun)可(ke)作(zuo)標本(ben)以(yi)測(ce)定(ding)其中(zhong)某種(zhong)抗(kang)體(ti)或(huo)抗(kang)原(yuan)成(cheng)份(fen)。反復(fu)凍(dong)融(rong)會(hui)使抗(kang)體(ti)效價跌落，所(suo)以(yi)測(ce)抗(kang)體(ti)的(de)血清(qing)標本(ben)如需保(bao)留作多次(ci)檢測(ce)，宜(yi)少量分(fen)裝冰存。壹(yi)般(ban)說來，在5天(tian)內(nei)測定(ding)的(de)血清(qing)標本(ben)可(ke)放(fang)置於(yu)4℃，超(chao)過壹周測(ce)定(ding)的(de)需低溫(wen)冰存。如在冰箱中保(bao)留過久，其中(zhong)的(de)可(ke)發(fa)生(sheng)聚合(he)，在間(jian)接法(fa)ELISA 中(zhong)可(ke)使本(ben)底加深(shen)。保(bao)留血清(qing)自采集時(shi)就(jiu)應(ying)留意無(wu)菌操縱，也可(ke)加(jia)入適(shi)當防腐(fu)劑(ji)。除特(te)殊情況外，在醫(yi)學檢修中(zhong)均(jun)以(yi)血(xue)清(qing)作為(wei)檢測(ce)標(biao)本(ben)。本(ben)文(wen)將(jiang)敘述(shu)板式ELISA各(ge)個(ge)操縱步(bu)驟(zhou)的(de)留意要點，珠式、管式及磁性(xing)球ELISA，進口ELISA試(shi)劑(ji)盒均(jun)與特(te)殊儀器配(pei)合應(ying)用，兩(liang)者(zhe)均(jun)有具體的(de)使用說明，嚴格(ge)遵(zun)照劃(hua)定(ding)操縱，必(bi)能得(de)出(chu)正(zheng)確(que)的(de)結(jie)果(guo)。