ELSIA試(shi)劑(ji)盒(he)結果判(pan)斷方法

ELSIA試(shi)劑(ji)盒(he)結果判(pan)斷方法

    ELSIA試(shi)劑(ji)盒(he)定性測定的結果判(pan)斷是(shi)對(dui)受檢(jian)標本中是(shi)否(fou)含有(you)待(dai)測(ce)抗(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)體作出"有(you)"或(huo)"無(wu)"的簡單回答，分別用(yong)"陽(yang)性"、"陰(yin)性(xing)"表(biao)示(shi)。"陽性"表(biao)示(shi)該(gai)標本(ben)在該(gai)測定系(xi)統中有(you)反應(ying)。"陰(yin)性(xing)"則(ze)為(wei)無(wu)反應(ying)。用(yong)定性判(pan)斷法(fa)也(ye)可得到半(ban)定量結果，即用(yong)滴(di)度(du)來表(biao)示(shi)反應的強(qiang)度(du)，其實(shi)質(zhi)仍(reng)是(shi)壹個定性試(shi)驗。在這種(zhong)半(ban)定量測定中，將(jiang)標(biao)本作壹系(xi)列稀(xi)釋(shi)後進行(xing)試(shi)驗，呈陽性(xing)反(fan)應的zui高(gao)稀(xi)釋(shi)度(du)即為(wei)滴(di)度(du)。根據(ju)滴(di)度(du)的高(gao)低，可以(yi)判(pan)斷標(biao)本(ben)反應(ying)性的強(qiang)弱(ruo)，這比(bi)觀(guan)察不(bu)稀(xi)釋(shi)標本呈色(se)的(de)深(shen)淺(qian)判(pan)斷為(wei)強(qiang)陽性(xing)、弱(ruo)陽性(xing)更具定量意(yi)義。 在間接(jie)法(fa)和夾(jia)心(xin)法ELSIA中，陽(yang)性(xing)孔(kong)呈色(se)深(shen)於(yu)陰(yin)性(xing)孔(kong)。在競爭法ELISA中則(ze)相反(fan)，陰(yin)性(xing)孔(kong)呈色(se)深(shen)於(yu)陽(yang)性孔(kong)。兩(liang)類(lei)反(fan)應的結果判(pan)斷方法不(bu)同，分述於(yu)下(xia)。
（） 間接(jie)法(fa)和夾(jia)心(xin)法 
    這類(lei)反(fan)應的(de)定性結果可以(yi)用(yong)肉眼判(pan)斷。目(mu)視標(biao)本(ben)也無(wu)色(se)或(huo)近(jin)於(yu)無(wu)色(se)者(zhe)判(pan)為(wei)陰(yin)性(xing)，顯(xian)色(se)清(qing)晰(xi)者為(wei)陽性。但在ELSIA中，正(zheng)常(chang)人(ren)血清(qing)反應(ying)後常(chang)可出現呈色(se)的(de)本(ben)底(di)，此(ci)本(ben)底(di)的(de)深淺(qian)因試(shi)劑(ji)的組成(cheng)和實驗的條件(jian)不(bu)同而(er)異，因此(ci)實(shi)驗中必(bi)須(xu)加(jia)測(ce)陰(yin)性(xing)對(dui)照。陰(yin)性(xing)對(dui)照的(de)組成(cheng)應(ying)為(wei)不(bu)含受(shou)檢(jian)物的正常(chang)血清(qing)或(huo)類(lei)似物（見3.6）。在用肉(rou)眼判(pan)斷結果時，更宜用(yong)顯(xian)色(se)深(shen)於(yu)陰(yin)性(xing)對(dui)照作為(wei)標本陽(yang)性(xing)的(de)指標(biao)。目視法(fa)簡捷明了(le)，但頗(po)具主(zhu)觀(guan)性。在條件(jian)許(xu)可下(xia)，應該(gai)用比(bi)色(se)計(ji)測(ce)定吸(xi)光(guang)值，這樣(yang)可以(yi)得到客(ke)觀(guan)的數(shu)據(ju)。先(xian)讀(du)出標本(ben)（sample，S）、陽(yang)性對(dui)照（P）、和陰(yin)性(xing)對(dui)照（N）的(de)吸(xi)光(guang)值，然後進(jin)行(xing)計算(suan)。計算(suan)方法有(you)多種(zhong)，大(da)致可分為(wei)陽性判(pan)定值法(fa)和標本(ben)與陰(yin)性(xing)對(dui)照比(bi)值法(fa)兩(liang)類(lei)。
a． 陽(yang)性判(pan)定值 
    陽(yang)性判(pan)定值（cut-off value）壹(yi)般(ban)為(wei)陰(yin)性(xing)對(dui)照A值加(jia)上(shang)壹個特(te)定的常(chang)數(shu)，以此(ci)作為(wei)判(pan)斷結果陽性(xing)或(huo)陰(yin)性(xing)的(de)標(biao)準。用此(ci)法(fa)判(pan)斷結果要求實(shi)驗條件(jian)十分恒定，試(shi)劑(ji)的制備(bei)必(bi)須(xu)標(biao)準化，陽(yang)性和陰(yin)性(xing)的(de)對(dui)照品應符合(he)壹(yi)定的規格(ge)，須(xu)配(pei)用精密(mi)的儀器(qi)，並(bing)嚴格(ge)按(an)規(gui)定操(cao)作。陽性(xing)判(pan)定值公(gong)式中的(de)常(chang)數(shu)是(shi)在這特(te)定的系(xi)統中通(tong)過對(dui)大(da)量標(biao)本的(de)實驗檢測而得到的。現舉(ju)某(mou)種(zhong)檢(jian)測(ce)HBsAg的試(shi)劑(ji)盒(he)為(wei)例。試(shi)劑(ji)盒(he)中的(de)陰(yin)性(xing)對(dui)照品為(wei)不(bu)含HBsAg的(de)復(fu)鈣人(ren)血漿，陽(yang)性對(dui)照品HBsAg的含(han)量(liang)標明為(wei)P=9±2ng/ml。每次試(shi)驗設(she)2個陽(yang)性(xing)對(dui)照和3個陰(yin)性(xing)對(dui)照。測(ce)得A值後(hou)，先計(ji)算(suan)陰(yin)性(xing)對(dui)照A值的(de)平均數(shu)（NCX）和陽性(xing)對(dui)照A值的(de)平均數(shu)（PCX），兩(liang)個(ge)平(ping)均數(shu)的差(cha)（P-N）必須(xu)大(da)於(yu)壹(yi)個特定的數值（例0.400），試(shi)驗才有(you)效。3個(ge)陰(yin)性(xing)對(dui)照A值均應(ying)≥0.5×NCX，並(bing)≤.5×NCX，如(ru)其(qi)中之壹超(chao)出此(ci)範(fan)圍，則棄(qi)去(qu)，而已(yi)另兩(liang)個(ge)陰(yin)性(xing)對(dui)照重(zhong)新計算(suan)NCX；如(ru)有(you)兩(liang)個(ge)陰(yin)性(xing)對(dui)照A值超(chao)出以上(shang)範圍，則該(gai)次實(shi)驗無(wu)效。陽(yang)性(xing)判(pan)定值按(an)下(xia)式計(ji)算(suan)： 
陽性(xing)判(pan)定值=NCX+0.05 標(biao)本A值＞陽(yang)性判(pan)定值的(de)為(wei)陽性，小(xiao)於(yu)陽(yang)性判(pan)定值的(de)為(wei)陰(yin)性(xing)。應(ying)註(zhu)意(yi)的是(shi)，式中0.05為(wei)該(gai)試(shi)劑(ji)盒(he)的常(chang)數(shu)，只適合(he)於(yu)該(gai)特定條件(jian)下(xia)，而不(bu)是(shi)對(dui)各(ge)種試(shi)劑(ji)均可通(tong)用(yong)。
根據(ju)以(yi)上(shang)敘述可以(yi)看(kan)出，在這種(zhong)方法中陰(yin)性(xing)對(dui)照和陽性(xing)對(dui)照也(ye)起到試(shi)驗的質(zhi)控(kong)作用，試(shi)劑(ji)變質(zhi)和操(cao)作不(bu)當(dang)均會(hui)產生"試(shi)驗無(wu)效"的(de)後(hou)果。
b.標本(ben)/陰(yin)性(xing)對(dui)照比(bi)值 
   ELSIA試(shi)劑(ji)盒(he)在實驗條件(jian)（包(bao)括試(shi)劑(ji)）較難保證恒(heng)定的情況下(xia)，這種(zhong)判(pan)斷法(fa)較(jiao)為(wei)合適。在得出標本(ben)（S）和陰(yin)性(xing)對(dui)照（N）的(de)A值後(hou)，計算(suan)S/N值。也(ye)有(you)寫作P/N的，這裏的P不(bu)代表(biao)陽性(xing)（positive），而是(shi)病(bing)人(ren)（patient）的(de)縮(suo)寫，不(bu)應誤(wu)解。為(wei)避免混淆(xiao)，更宜用(yong)S/N表(biao)示(shi)。在早(zao)期(qi)的(de)間接(jie)法(fa)ELISA中，有(you)些作者定出S/N為(wei)陽性標(biao)準，現多(duo)為(wei)各(ge)種測(ce)定所(suo)沿(yan)用。實際上(shang)每壹測(ce)定系(xi)統應(ying)該(gai)用實(shi)驗求出各(ge)自的(de)S/N的閾(yu)值。更應(ying)註(zhu)意(yi)的是(shi)，N所(suo)代(dai)表(biao)的陰(yin)性(xing)對(dui)照是(shi)不(bu)含受(shou)檢(jian)物質(zhi)的(de)人(ren)血清(qing)。有(you)的試(shi)劑(ji)盒(he)中所(suo)設(she)陰(yin)性(xing)對(dui)照為(wei)不(bu)含蛋(dan)白(bai)質(zhi)或(huo)蛋(dan)白(bai)質(zhi)含(han)量(liang)較(jiao)底(di)的(de)緩沖液，以致反(fan)應(ying)後產生的(de)本(ben)底(di)可能較(jiao)正(zheng)常(chang)人(ren)血清(qing)的本(ben)底(di)低(di)得多(duo)。
b. 抑制率(lv)法(fa) 
     抑制率(lv)表(biao)示(shi)標本在競爭結合(he)中標(biao)本(ben)對(dui)陰(yin)性(xing)反(fan)應(ying)顯(xian)色(se)的(de)抑制程(cheng)度(du)，按下(xia)式計(ji)算(suan)：抑制率(lv)（%）= （陰(yin)性(xing)對(dui)照A值-標(biao)本A值）×00%/陰(yin)性(xing)對(dui)照A值.壹(yi)般(ban)規定抑制率(lv)≥50%為(wei)陽性，＜50%為(wei)陰(yin)性(xing)。