新手必須知道的(de)Elisa的(de)實驗(yan)步(bu)驟(zhou)

進(jin)口(kou)ELISA試劑盒基(ji)礎是抗原或抗體(ti)的(de)固(gu)相(xiang)化(hua)及(ji)抗原或抗體(ti)的(de)酶(mei)標記(ji)。結(jie)合在固(gu)相(xiang)載體(ti)表(biao)面(mian)的(de)抗原或抗體(ti)仍保(bao)持(chi)其(qi)免(mian)疫學活性，酶(mei)標記(ji)的(de)抗原或抗體(ti)既保(bao)留其免(mian)疫學活性，又保留酶(mei)的(de)活性(xing)。在測定時(shi)，受(shou)檢標本(ben)（測(ce)定其中的(de)抗體(ti)或抗原）與固(gu)相(xiang)載體(ti)表(biao)面(mian)的(de)抗原或抗體(ti)起反應。用(yong)洗滌的(de)方法(fa)使固(gu)相(xiang)載體(ti)上形成(cheng)的(de)抗原抗體(ti)復合物與液(ye)體(ti)中的(de)其他物質分(fen)開(kai)。再(zai)加(jia)入(ru)酶(mei)標記(ji)的(de)抗原或抗體(ti)，也通(tong)過(guo)反應而(er)結(jie)合在固(gu)相(xiang)載體(ti)上。此(ci)時(shi)固(gu)相(xiang)上的(de)酶(mei)量(liang)與(yu)標(biao)本(ben)中(zhong)受(shou)檢物質的(de)量(liang)呈(cheng)壹定的(de)比例(li)。加入酶(mei)反應的(de)底(di)物後，底(di)物被(bei)酶(mei)催化(hua)成(cheng)為有色產(chan)物，產(chan)物的(de)量(liang)與(yu)標(biao)本(ben)中(zhong)受(shou)檢物質的(de)量(liang)直(zhi)接(jie)相(xiang)關，故(gu)可根(gen)據(ju)呈(cheng)色的(de)深淺(qian)進(jin)行(xing)定性或定量(liang)分(fen)析。由(you)於(yu)酶(mei)的(de)催化(hua)效率(lv)很(hen)高，間(jian)接地放(fang)大了(le)免(mian)疫(yi)反應的(de)結(jie)果(guo)，使測定方法(fa)達(da)到很高的(de)敏感度。

進(jin)口(kou)ELISA試劑盒操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou):

．從(cong)已平(ping)衡(heng)至室(shi)溫的(de)密封袋(dai)中取(qu)出試驗(yan)所(suo)需板條，未(wei)用的(de)板條和幹燥(zao)劑請放(fang)回鋁箔(bo)袋(dai)內(nei)壓 實自(zi)封(feng)條(tiao)，密封口(kou)袋(dai)，放(fang)回4℃。

2．空白(bai)孔加標(biao)準(zhun)品(pin)和標(biao)本(ben)稀(xi)釋(shi)液(ye)，其(qi)余(yu)相(xiang)應孔中加(jia)標(biao)本(ben)或(huo)不同(tong)濃(nong)度標(biao)準(zhun)品(pin)(00ul/孔)，用封(feng)板膠紙封(feng)住(zhu)反應孔，36℃孵箱(xiang)孵(fu)育90分(fen)鐘。

3．提(ti)前(qian)20分(fen)鐘準(zhun)備(bei)化(hua)抗體(ti)工作(zuo)液(ye)。

4．洗(xi)板5次(ci)。

5．空白(bai)孔加化(hua)抗體(ti)稀(xi)釋(shi)液(ye)，其(qi)余(yu)孔加入(ru)化(hua)抗體(ti)工作(zuo)液(ye)(00ul/孔)。用新封(feng)板膠紙封(feng)住(zhu)反應孔，36℃孵箱(xiang)孵(fu)育60分(fen)鐘。

6．提(ti)前(qian)20分(fen)鐘準(zhun)備(bei)酶(mei)結(jie)合物工作(zuo)液(ye)。避光室(shi)溫(22-25 ) ℃ 放(fang)置。

7．洗(xi)板5次(ci)。

8．空白(bai)孔加酶(mei)結(jie)合物稀(xi)釋(shi)液(ye)，其(qi)余(yu)孔加入(ru)酶(mei)結(jie)合物工作(zuo)液(ye)(00ul/孔)。用新封(feng)板膠紙封(feng)住(zhu)反應孔，36℃孵箱(xiang)，避光孵育(yu)30分(fen)鐘。

9．打(da)開(kai)酶(mei)標儀(yi)電(dian)源(yuan)，預熱(re)儀(yi)器，設(she)置好(hao)檢測程(cheng)序(xu)。

0．洗板5次(ci)。

．加入(ru)顯色底(di)物(TMB)00ul/孔，避光36℃孵箱(xiang)，避光孵育(yu)5分(fen)鐘。

2．加(jia)入(ru)終(zhong)止液(ye)00ul/孔, 混勻(yun)後(hou)即刻(ke)測(ce)量(liang)OD450值(3分(fen)鐘內(nei))。在儀(yi)器保(bao)存讀數結(jie)果(guo)並打(da)印壹份紙質(zhi)結(jie)果(guo)。

3．進(jin)口(kou)ELISA試劑盒實驗(yan)完畢後(hou)將(jiang)未(wei)用完的(de)試劑按規(gui)定的(de)保存(cun)溫度放(fang)回電(dian)冰(bing)箱保存(cun)至有效期(qi)結(jie)束(shu)。 建(jian)議(yi)保(bao)存酶(mei)標板框(kuang)，以備(bei)下次(ci)或者(zhe)今後(hou)試驗(yan)使用。