ELISA方法(fa)的(de)基(ji)本類(lei)型(xing)和操(cao)作(zuo)程(cheng)序分析

ELISA試(shi)劑(ji)盒價(jia)格(ge)根據(ju)ELISA所(suo)用的(de)固相(xiang)載體(ti)而區分為三大類(lei)型(xing)：壹是采用聚苯(ben)乙烯微(wei)量板(ban)為(wei)載(zai)體(ti)的(de)ELISA，即我(wo)們通常(chang)所指的(de)ELISA（微(wei)量板(ban)ELISA）；另(ling)壹(yi)類(lei)是(shi)用硝酸纖維膜為載體(ti)的(de)ELISA,稱(cheng)為(wei)斑點ELISA（Dot-ELISA）;再(zai)壹類(lei)是(shi)采用疏水(shui)性聚脂布作(zuo)為(wei)載體(ti)的(de)ELISA，稱(cheng)為(wei)布ELISA（C－ELISA）。在微(wei)量板(ban)ELISA中(zhong)，又根據(ju)其(qi)性質(zhi)不同(tong)分為間(jian)接ELISA、雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心ELISA、雙夾(jia)心ELISA、競爭ELISA、阻(zu)斷ELISA及(ji)抗體(ti)捕(bu)捉(zhuo)ELISA。

ELISA方(fang)法(fa)的(de)基(ji)本類(lei)型(xing)有以(yi)上(shang)8種(zhong)，常(chang)用的(de)有間(jian)接ELISA法(fa)、雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心ELISA法和雙(shuang)夾(jia)心ELISA法三種(zhong)：

.間(jian)接ELISA

ELISA試(shi)劑(ji)盒價(jia)格(ge)本法(fa)主要(yao)用於(yu)檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)。以(yi)鴨(ya)病(bing)毒(du)性(xing)肝炎(yan)（DVH）抗體(ti)的(de)ELISA為例(li)，間(jian)接ELISA的(de)操作(zuo)程(cheng)序如下。 （） 材(cai)料 　　① 包(bao)被液、洗滌液、保(bao)溫液、底(di)物液、終(zhong)止液； 　　② DVH包(bao)被抗原(yuan)、酶(mei)標抗(kang)抗體(ti)、陰性(xing)及(ji)陽(yang)性(xing)DVH參考血清(qing)；待(dai)檢(jian)鴨(ya)血清(qing)； 　　③ ELISA檢(jian)測(ce)儀(yi)、加(jia)樣(yang)器、聚苯(ben)乙烯微(wei)量板(ban)。 　　（2） 方(fang)法(fa)步(bu)驟(zhou) 　　① 加抗原(yuan)包(bao)被 → 4℃過夜(ye)，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　② 加(jia)待檢(jian)血清(qing) → 37℃ 2小(xiao)時(shi)，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　③ 加(jia)酶標抗(kang)體(ti) → 37℃ 2小(xiao)時(shi)，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　④ 加(jia)底(di)物液　→ 37℃ 30分鐘，加終(zhong)止液 　　⑤ 用ELISA檢(jian)測(ce)儀(yi)測(ce)定OD值，並(bing)計(ji)算出P/N比(bi)值。 　　（3） 結果判(pan)定　已知(zhi)陽(yang)性(xing)血清(qing)與已知(zhi)陰性(xing)血清(qing)的(de)比(bi)值（P/N）≥2.，而且(qie)已(yi)知(zhi)陽(yang)性(xing)血清(qing)的(de)OD值≥0.4；在上(shang)述條(tiao)件(jian)成立(li)的(de)情(qing)況下，如(ru)果(guo)待檢(jian)血清(qing)與已知(zhi)陰性(xing)血清(qing)的(de)比(bi)值（P/N）≥2.，而且(qie)待(dai)檢(jian)血清(qing)的(de)OD值≥0.4，則(ze)判(pan)為陽(yang)性(xing)，否則(ze)判(pan)為陰性(xing)。

2.雙(shuang)抗體(ti)夾(jia)心ELISA

本法(fa)主要(yao)用於(yu)檢(jian)測(ce)大分子(zi)抗原(yuan)。現以(yi)檢(jian)測(ce)雞傳(chuan)染(ran)性(xing)法(fa)氏囊病(bing)病毒(du)（IBDV）的(de)雙夾(jia)心抗體(ti)ELISA為(wei)例(li)介(jie)紹本法(fa)的(de)操作(zuo)程(cheng)序。 　　① 加抗體(ti)包(bao)被 → 4℃過夜(ye)，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　② 加(jia)待檢(jian)抗(kang)原(yuan) → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　③ 加(jia)酶標抗(kang)體(ti) → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　④ 加(jia)底(di)物液　→ 37℃ 5分鐘，加終(zhong)止液 　　⑤ 用ELISA檢(jian)測(ce)儀(yi)測(ce)定OD值。

3.雙夾心ELISA

ELISA試(shi)劑(ji)盒價(jia)格(ge)此(ci)法(fa)與雙抗體(ti)夾(jia)心ELISA的(de)主要(yao)區別(bie)在於(yu)：它是(shi)采用酶標抗(kang)抗體(ti)檢(jian)查(zha)多(duo)種(zhong)大分子(zi)抗原(yuan)，它(ta)不僅(jin)不必(bi)標記(ji)每(mei)壹(yi)種(zhong)抗體(ti)，還(hai)可提(ti)高(gao)試(shi)驗(yan)的(de)敏(min)感(gan)性。此(ci)法(fa)的(de)基(ji)本程(cheng)序為： 　　① 加抗體(ti)（Ab-）包(bao)被 → 4℃過夜(ye)，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　② 加(jia)待檢(jian)抗(kang)原(yuan)（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　③ 加(jia)用非同(tong)種(zhong)動(dong)物的(de)特(te)異(yi)性抗體(ti)（Ab-2）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　④ 加(jia)入(ru)酶(mei)標抗(kang)Ab-2抗體(ti)（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋(pao)幹(gan) 　　⑤ 加(jia)底(di)物液 → 37℃ 20分鐘，加終(zhong)止液 ⑥ 用ELISA檢(jian)測(ce)儀(yi)測(ce)定OD值。