羊(yang)血小板(ban)衍(yan)生(sheng)生長因子(zi)BB（PDGFBB）試劑(ji)盒(he)檢(jian)測(ce)原理(li)

國產(chan)ELISA試(shi)劑盒(he)采(cai)用(yong)雙抗體(ti)兩(liang)步(bu)夾心酶(mei)聯免(mian)疫吸附法(fa)。將(jiang)標準品、待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)加入到(dao)預先包(bao)被(bei)β幹擾素透(tou)明酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)中(zhong)，溫(wen)育(yu)足(zu)夠(gou)時間後，洗(xi)滌(di)除去(qu)未(wei)結(jie)合的(de)成分，再加(jia)入酶(mei)標(biao)工(gong)作液(ye)，溫(wen)育(yu)足(zu)夠(gou)時間後，洗(xi)滌(di)除去(qu)未(wei)結(jie)合的(de)成分。依次(ci)加(jia)入底(di)物A、B，底物（TMB）在辣根過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)（HRP）催(cui)化下轉化(hua)為(wei)藍色(se)產(chan)物，在酸的(de)作用下變成(cheng)黃(huang)色(se)，顏(yan)色(se)的(de)深淺與樣(yang)品中(zhong)β幹擾素濃(nong)度呈正相(xiang)關，450nm波長下測(ce)定OD值(zhi)，根據標準品和(he)樣(yang)品的(de)OD值(zhi)，計(ji)算樣(yang)本(ben)中β幹擾素含(han)量。
羊(yang)血小板(ban)衍(yan)生(sheng)生長因子(zi)BB（PDGFBB）試劑(ji)盒(he)操(cao)作步(bu)驟
、準備：從(cong)冰箱(xiang)取出試(shi)劑(ji)盒(he)，室(shi)溫(wen)復(fu)溫(wen)平(ping)衡(heng)30分(fen)鐘。
2、配(pei)液(ye)：用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)將(jiang)20倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye)稀釋(shi)成(cheng)原倍(bei)的(de)洗(xi)滌(di)液(ye)。
3、加(jia)標(biao)準品和(he)待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)：取足(zu)夠(gou)數量的(de)酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)，固(gu)定於框(kuang)架上(shang)，分(fen)別(bie)設置標(biao)準品孔(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)孔和(he)空白對照(zhao)孔(kong)，記(ji)錄(lu)各孔位置，在標準品孔(kong)中加入標(biao)準品50μL；待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)孔中(zhong)先加(jia)入待(dai)測(ce)樣(yang)本(ben)0μL，再加(jia)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)液(ye)40μL（即(ji)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)5倍(bei)）；空白對照(zhao)孔(kong)不加(jia)。
4、溫(wen)育(yu)：37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或(huo)恒溫(wen)箱溫(wen)育(yu)30min。
5、洗(xi)板(ban)：棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸水紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，每(mei)孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置(zhi)min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液(ye)，吸水紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，如此(ci)重復洗(xi)板(ban)4次(ci)（也可(ke)用洗(xi)板(ban)機按說(shuo)明書操(cao)作洗(xi)板(ban)）。
6、加(jia)酶(mei)標(biao)工(gong)作液(ye)：每(mei)孔加(jia)入酶(mei)標(biao)工(gong)作液(ye)50μL，空白對照(zhao)孔(kong)不加(jia)。
7、溫(wen)育(yu)：重復4的(de)操(cao)作。
8、洗(xi)板(ban)：重復5的(de)操(cao)作。
9、顯色(se)：每(mei)孔先加(jia)入顯色(se)劑(ji)A 液(ye)50μL，再加(jia)入顯色(se)劑(ji)B液(ye) 50μL，37℃避光顯色(se)5min。
0、終止：取(qu)出酶(mei)標(biao)板(ban)，每(mei)孔加(jia)終止液(ye)50μL，終止反應(ying)（顏(yan)色(se)由藍色(se)立轉黃色(se)）。
、測(ce)定：以空白孔調零，在終止後5分鐘內，用(yong)450nm波長測(ce)量(liang)各孔的(de)吸光值(zhi)（OD值(zhi)）。
2、計(ji)算：根據標準品的(de)濃(nong)度及(ji)對應(ying)的(de)OD值(zhi)，計(ji)算出標(biao)準曲(qu)線(xian)的(de)直線回歸(gui)方(fang)程，再根據樣(yang)本(ben)的(de)OD值(zhi)，在回歸(gui)方(fang)程上(shang)計(ji)算出對應(ying)的(de)樣(yang)品濃(nong)度，也可(ke)以使用(yong)各種應(ying)用(yong)軟件(jian)來(lai)計(ji)算。zui終濃(nong)度為實(shi)際(ji)測(ce)定濃(nong)度乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍(bei)數。
國產(chan)ELISA試(shi)劑盒(he)樣(yang)本(ben)要(yao)求
、樣(yang)本(ben)不能(neng)含(han)疊氮鈉(na)（NaN3），因為(wei)疊氮鈉(na)（NaN3）是(shi)辣(la)根過(guo)氧(yang)化(hua)物酶(mei)（HRP）的(de)抑制劑。
2、標(biao)本(ben)采(cai)集(ji)後盡(jin)早進(jin)行提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相(xiang)關文(wen)獻進(jin)行，提(ti)取(qu)後應(ying)盡(jin)快(kuai)進(jin)行實(shi)驗(yan)。若(ruo)不能(neng)立即(ji)試(shi)驗，可(ke)將(jiang)標本(ben)放(fang)於-20℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免(mian)反復凍(dong)融。
3、樣(yang)本(ben)應(ying)充(chong)分離心，不得(de)有溶血及(ji)顆(ke)粒。
羊(yang)血小板(ban)衍(yan)生(sheng)生長因子(zi)BB（PDGFBB）試劑(ji)盒(he)註(zhu)意(yi)事項
、實(shi)驗(yan)嚴(yan)格(ge)按照(zhao)說明(ming)書的(de)操(cao)作進(jin)行，實(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)判(pan)定必須以酶(mei)標(biao)儀讀數為準。
2、酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板(ban)開封後如未用完(wan)，應(ying)立即(ji)裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋(dai)中加(jia)幹燥劑(ji)保(bao)存(cun)。
3、建(jian)議所(suo)有的(de)標準品、樣(yang)本(ben)和(he)空白對照(zhao)都(dou)做(zuo)雙份檢(jian)測(ce)，取(qu)平均值(zhi)，以減(jian)小實(shi)驗(yan)誤差。
4、牢記(ji)樣(yang)本(ben)已(yi)經(jing)稀釋(shi)5倍(bei)，計(ji)算結(jie)果(guo)乘(cheng)以(yi)5才是(shi)樣(yang)本(ben)實(shi)際(ji)濃(nong)度。
5、本試劑盒(he)定量範(fan)圍為(wei)0.-200ng/ml，超(chao)過(guo)此(ci)範圍(wei)，為(wei)標(biao)準曲(qu)線(xian)延伸(shen)計(ji)算所(suo)得(de)，不做(zuo)為(wei)準確定量結(jie)果(guo)，請用特(te)殊稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)後測(ce)定準確結(jie)果(guo)（0.-200ng/ml範圍內），乘(cheng)以(yi)總稀釋(shi)倍(bei)數即(ji)為(wei)樣(yang)本(ben)zui終濃(nong)度。
6、若(ruo)顯色(se)過(guo)淺，可(ke)適(shi)當延長底(di)物溫育(yu)時間。
7、為避免(mian)交叉(cha)汙染，標(biao)準品、樣(yang)本(ben)和(he)空白對照(zhao)每(mei)加壹(yi)個(ge)就(jiu)要(yao)更換壹(yi)次(ci)吸頭(tou)；酶(mei)標(biao)工(gong)作液(ye)、樣(yang)本(ben)稀釋(shi)液(ye)和(he)底(di)物等公(gong)共(gong)組(zu)分(fen)，要(yao)懸臂加樣(yang)，不得(de)碰(peng)到微(wei)孔(kong)；不得(de)重復使用(yong)封板(ban)膜(mo)。
8、試(shi)劑盒(he)保(bao)質期內使用(yong)，不同批號的(de)國產(chan)ELISA試(shi)劑盒(he)不得(de)混用。
9、底物B對光敏感，避免(mian)長時間暴露於(yu)光下。