ELISA試劑(ji)盒(he)分為內源性物(wu)質和外源性物(wu)質兩種

血清是(shi)zui常用的標(biao)本，血漿壹(yi)般(ban)可視為與(yu)血清同(tong)等(deng)的標本，標(biao)本(ben)引起的假陽(yang)性和假(jia)陰(yin)性結(jie)果(guo)主要(yao)是(shi)幹擾性(xing)物(wu)質所(suo)致(zhi)，ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)分為內源性物(wu)質和外源性物(wu)質兩種：

． 內源性物(wu)質

普遍認為大約40%的(de)人(ren)血清標本中(zhong)含有(you)非(fei)特異性幹擾物(wu)質，可以(yi)不同(tong)程度(du)影(ying)響(xiang)檢測結果(guo)。常(chang)見的幹擾物(wu)質有(you)：類風濕(shi)因子(zi)、補(bu)體、嗜(shi)異(yi)性(xing)抗體、嗜(shi)靶(ba)抗原自(zi)身(shen)抗體、醫(yi)源性誘(you)導的(de)抗鼠(shu)Ig （s）抗體、交叉(cha)反應(ying)物(wu)質和其它(ta)物(wu)質等。

（）類風濕(shi)因子(zi)

人(ren)血清中(zhong)IgM、IgG型類風濕(shi)因子(zi)（RF）可(ke)以(yi)與(yu)ELISA系統中(zhong)的(de)捕(bu)獲(huo)抗體及(ji)酶(mei)標(biao)記(ji)二(er)抗的FC段直接結合，從(cong)而(er)導致(zhi)假(jia)陽(yang)性。解決(jue)該(gai)情(qing)況(kuang)的(de)辦法(fa)是(shi)：①用F（ab）2替代完整(zheng)的IgG；②標(biao)本(ben)用聯有(you)熱變(bian)性（63℃，0 min）IgG的固相吸附劑(ji)處(chu)理（將(jiang)熱變(bian)性IgG加入到標(biao)本(ben)稀釋(shi)液(ye)中(zhong)同(tong)樣(yang)有(you)效）；③檢(jian)測抗原時，可(ke)以(yi)用2-巰(qiu)基(ji)乙醇(chun)等(deng)加入到標(biao)本(ben)稀釋(shi)液(ye)中(zhong)，使(shi)RF降解。

（2）補體

ELISA系統中(zhong)固相壹(yi)抗和標(biao)記(ji)二(er)抗過程中(zhong)，抗體分子(zi)發(fa)生(sheng)變(bian)構，其FC段的(de)補體Cq分子(zi)結(jie)合位點被暴(bao)露(lu)出來，使Cq 可(ke)以(yi)將(jiang)二(er)者連(lian)接起(qi)來，從(cong)而(er)造成(cheng)假陽(yang)性。解決(jue)的(de)辦法(fa)是(shi)：①用EDTA稀釋(shi)標(biao)本(ben)；②用53℃，0 min或56℃，30 min加熱血清使Cq滅活。

（3）嗜(shi)異(yi)性(xing)抗體

人類(lei)血清中(zhong)含有(you)能與(yu)嚙(nie)齒(chi)類動物（如(ru)鼠(shu)等(deng)）Ig （s） 結(jie)合的天(tian)然(ran)嗜(shi)異(yi)性(xing)抗體，可將(jiang)ELISA系統中(zhong)壹(yi)抗和二(er)抗連(lian)接起(qi)來，也能造成假(jia)陽(yang)性。解決(jue)的(de)辦法(fa)是(shi)：可在(zai)標本(ben)稀釋(shi)液(ye)中(zhong)加(jia)入過(guo)量(liang)的動物Ig （s） ，但加入量(liang)不足(zu)或亞類不同(tong)時(shi)無(wu)效。

（4）嗜(shi)靶(ba)抗原的自(zi)身(shen)抗體

抗甲(jia)狀(zhuang)腺球(qiu)蛋(dan)白、抗胰島(dao)素等(deng)嗜(shi)靶(ba)抗原的自(zi)身(shen)抗體，ELISA試劑(ji)盒有(you)時能與(yu)靶(ba)抗原結合形(xing)成(cheng)復合物，在(zai)ELISA方法(fa)中(zhong)均可(ke)幹擾抗原抗體測定(ding)結果(guo)。為避免(mian)以(yi)上(shang)情(qing)況(kuang)出(chu)現(xian)，解決(jue)的(de)辦法(fa)是(shi)：測定(ding)前需(xu)用理化(hua)方(fang)法(fa)將(jiang)其解離後再測定(ding)。

（5）醫(yi)源性誘(you)導的(de)抗鼠(shu)Ig （s） 抗體

人ELISA試(shi)劑盒(he)臨(lin)床(chuang)開(kai)展(zhan)的(de)用鼠(shu)源性CD3等(deng)單克隆抗體治療，用放(fang)射(she)性同(tong)位素標(biao)記(ji)鼠(shu)源性抗體的影(ying)像診(zhen)斷及(ji)靶(ba)向(xiang)治(zhi)療等新技術(shu)，均有(you)可能使這些(xie)病(bing)人(ren)體內產(chan)生抗鼠(shu)抗體；另外，被鼠(shu)等(deng)嚙(nie)齒(chi)類動物咬(yao)傷(shang)的(de)病(bing)人(ren)體內也(ye)可以(yi)產(chan)生(sheng)抗鼠(shu)Ig （s） 抗體。這些(xie)病(bing)人(ren)ELISA測定(ding)時均可(ke)產(chan)生(sheng)假陽(yang)性。解決(jue)的(de)辦法(fa)是(shi)：測定(ding)抗原時，在(zai)標本(ben)中(zhong)加(jia)入足(zu)量(liang)的正(zheng)常(chang)鼠(shu)Ig （s） ，從(cong)而(er)克服由(you)於上述(shu)原因造成的(de)假陽(yang)性。

（6）交叉(cha)反應(ying)物(wu)質

、類AFP樣物質等，是(shi)與(yu)靶(ba)抗原有(you)交叉(cha)反應(ying)的(de)物質。在(zai)用多抗測定(ding)抗原時對(dui)測定(ding)結果(guo)影(ying)響(xiang)不大(da)，但在(zai)用單克隆抗體測定(ding)抗原時，如(ru)果(guo)交(jiao)叉(cha)抗原決(jue)定(ding)簇(cu)正(zheng)好是(shi)所(suo)用單克隆抗體相對(dui)應(ying)的(de)靶決(jue)定(ding)簇(cu)時，也(ye)會出(chu)現(xian)假陽(yang)性結果(guo)。

（7）標(biao)本中(zhong)其它(ta)成(cheng)分的影(ying)響(xiang) 血清脂(zhi)質過高(gao)、、血紅蛋(dan)白及(ji)血液粘度(du)過(guo)大(da)等，均對(dui)ELISA測定(ding)結果(guo)有(you)幹擾作用。

2． 外源性物(wu)質

外源性物(wu)質常常是(shi)由於用於ELISA測定(ding)的血標本的采(cai)集(ji)、貯存不當(dang)等原因所(suo)致(zhi)。如(ru)標(biao)本(ben)溶血、標本被細菌(jun)汙(wu)染、標(biao)本(ben)貯存過(guo)久、標本凝集(ji)不全(quan)和(he)中(zhong)添(tian)加(jia)物(wu)等(deng)影(ying)響(xiang)。

（）標本(ben)溶血   

由於各種人(ren)為原因引起的標本溶血，均可(ke)因紅細胞破(po)壞溶(rong)解時釋(shi)放(fang)出(chu)大(da)量(liang)具(ju)有(you)過氧化(hua)物(wu)酶(mei)活性(xing)的(de)血紅蛋(dan)白，在(zai)以(yi)辣根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)為標記(ji)的(de)ELISA測定(ding)中(zhong)，會(hui)導(dao)致(zhi)非(fei)特異性顯(xian)色，幹擾測定(ding)結果(guo)。為克服上(shang)述(shu)幹擾作用，標本(ben)采(cai)集(ji)時(shi)必(bi)須(xu)註(zhu)意避免(mian)溶血。

（2）標本受細菌(jun)汙(wu)染   

因菌(jun)體中(zhong)可(ke)能含有(you)內源性辣根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)，因此，被細菌(jun)汙(wu)染的(de)標(biao)本同(tong)溶(rong)血標本壹(yi)樣(yang)，亦可(ke)產(chan)生非(fei)特異性顯(xian)色而(er)幹擾測定(ding)結果(guo)。

（3）標(biao)本保存不當(dang)

在(zai)冰(bing)箱(xiang)中(zhong)保(bao)存過(guo)久的標本，血清中(zhong)IgG可(ke)聚(ju)合成多聚(ju)體、AFP可形(xing)成(cheng)二(er)聚體，在(zai)間接法(fa)ELISA測定(ding)中(zhong)會(hui)導(dao)致(zhi)本(ben)底(di)過(guo)深(shen)、甚至造成假陽(yang)性；標本(ben)放(fang)置(zhi)時間過長（如壹(yi)天(tian)以(yi)上(shang)），有(you)時抗原或抗體免(mian)疫(yi)活性(xing)減弱(ruo)，亦可(ke)出(chu)現(xian)假陰(yin)性。為克服上(shang)述(shu)幹擾，ELISA測定(ding)的血清標本宜(yi)為新鮮(xian)采(cai)集(ji)；如(ru)不能立(li)即(ji)測定(ding)，5天(tian)內(nei)測定(ding)的血清標本可存放(fang)於4℃，周後(hou)測定(ding)的血清標本應(ying)低(di)溫凍存；凍存後(hou)融(rong)解的標本，蛋(dan)白質局(ju)部濃(nong)縮，分布不均，應(ying)充(chong)分混合後再測定(ding)，但混勻(yun)時應(ying)輕(qing)柔，不可(ke)強(qiang)烈(lie)振蕩(dang)。

（4）標(biao)本凝集(ji)不全(quan)

在(zai)沒有(you)促凝(ning)劑(ji)和抗凝劑(ji)存在(zai)的情(qing)況(kuang)下，正(zheng)常(chang)血液采(cai)集(ji)後(hou)/2~2h開(kai)始(shi)凝(ning)固，8~24h*凝固。臨(lin)床(chuang)檢驗工作中(zhong)，有(you)時為了爭取(qu)時間快(kuai)速檢(jian)測，常在(zai)血液還未開(kai)始(shi)凝(ning)固時即(ji)強(qiang)行離(li)心(xin)分離血清，此時的血清中(zhong)仍(reng)殘(can)留(liu)部分纖維蛋(dan)白原，在(zai)ELISA測定(ding)過程中(zhong)可(ke)以(yi)形(xing)成(cheng)肉(rou)眼可見的纖(xian)維蛋(dan)白塊(kuai)，易造(zao)成(cheng)假陽(yang)性結果(guo)；這類(lei)情(qing)況(kuang)於次(ci)日復查(zha)時(shi)因血凝已*，血清中(zhong)不再有(you)纖維蛋(dan)白原存在(zai)，故(gu)復查(zha)結(jie)果(guo)變(bian)為陰(yin)性。為避免(mian)上述(shu)幹擾作用，解決(jue)的(de)辦法(fa)是(shi)血液標本采(cai)集(ji)後(hou)必(bi)須(xu)使其充(chong)分凝固後再分離血清，或標本采(cai)集(ji)時(shi)用帶分離膠的(de)或於中(zhong)加(jia)入適(shi)當(dang)的促凝(ning)劑(ji)。

（5）人ELISA試(shi)劑盒標(biao)本管(guan)中(zhong)添(tian)加(jia)物(wu)質的影(ying)響(xiang)

抗凝劑(ji)（如(ru)肝(gan)素，EDTA）、酶(mei)抑(yi)制劑(ji)（如(ru)NaN3可抑(yi)制ELISA系統中(zhong)辣根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)活性(xing)）及(ji)快(kuai)速分離血清的分離膠等(deng)均對(dui)ELISA測定(ding)有(you)壹(yi)定(ding)幹擾作用。

通(tong)過(guo)以(yi)上(shang)的(de)分析和總結(jie)，臨(lin)床(chuang)檢驗ELISA測定(ding)中(zhong)出(chu)現(xian)假陽(yang)性或假陰(yin)性等(deng)錯誤(wu)的(de)結果(guo)，排除ELISA試(shi)劑盒(he)因素和(he)操作因素，再有(you)就是(shi)從(cong)標本(ben)因素進(jin)行分析，並應(ying)采(cai)取(qu)相應(ying)措(cuo)施(shi)排除幹擾，從(cong)而(er)確(que)保(bao)檢(jian)測結果(guo)的(de)準確(que)性(xing)。