雙抗夾心(xin) ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的反應時間

 雙抗(kang)夾心(xin) ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的反應時間

   在(zai)保證 ELISA 有(you)效檢測(ce)病(bing)原(yuan)菌的前提(ti)下(xia)，快(kuai)速、方 便也(ye)是雙(shuang)抗(kang)夾心(xin) ELISA 的必要條(tiao)件(jian)。雙(shuang)抗夾心(xin) ELISA 從 加(jia)入(ru)待(dai)測(ce)抗原(yuan)到(dao)得出結(jie)果(guo)，檢測(ce)大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 共(gong)需 要 5h 左(zuo)右(you)，而間接 ELISA 則(ze)需要 7h(包(bao)被(bei) 37℃，2h)或 者(zhe) 7h(包(bao)被(bei) 4℃guo夜(ye))。本(ben)論(lun)文篩選出的雙抗(kang)夾心(xin) ELISA 檢測(ce)大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 省(sheng)去(qu)封閉這壹步驟。在(zai)間接 ELISA 測(ce)定(ding)抗原(yuan)中(zhong)，封閉(bi)壹般(ban)是*的，因為(wei)包(bao) 被(bei)不(bu)同(tong)濃度(du)抗原(yuan)不(bu)壹定可以(yi)*覆(fu)蓋(gai)固(gu)相(xiang)載體表(biao)面，如(ru) 果(guo)不(bu)封(feng)閉，很(hen)可能(neng)使(shi)隨後(hou)加(jia)入(ru)的特異(yi)性(xing)抗(kang)體和酶標二(er)抗 直(zhi)接被(bei)吸(xi)附(fu)到(dao)固相(xiang)載體上(shang)，產(chan)生(sheng)非(fei)特異(yi)性(xing)顯(xian)色(se)而使檢測 結(jie)果(guo)偏高。但是(shi)對於(yu)雙(shuang)抗(kang)體夾心(xin) ELISA 來說，在(zai)包(bao)被(bei) 捕(bu)獲(huo)抗(kang)體時已經使固(gu)相(xiang)載體飽(bao)和，已(yi)經沒(mei)有(you)多(duo)余(yu)的吸附(fu) 力(li)來吸附(fu)隨(sui)後(hou)加(jia)入(ru)的特異(yi)性(xing)抗(kang)體和酶標二(er)抗，這都(dou)說明(ming) 了(le)雙(shuang)抗夾心(xin) ELISA 有(you)不(bu)需要封(feng)閉的可能(neng)，通(tong)過正交(jiao)試(shi)驗(yan) 結(jie)果(guo)也(ye)證明(ming)不(bu)封(feng)閉可(ke)以(yi)達(da)到(dao)理(li)想(xiang)實(shi)驗效(xiao)果(guo)，而且還縮(suo)短(duan) 了(le)整個(ge)檢(jian)測流(liu)程(cheng)和時(shi)間，說明(ming)只(zhi)要酶標記(ji)物是(shi)高活性(xing)的 並且(qie)操(cao)作(zuo)時(shi)洗(xi)滌(di)*，不(bu)經封閉(bi)也(ye)可得到滿(man)意(yi)結果(guo)。雙抗(kang)夾心(xin) ELISA 檢測(ce)法的特異(yi)性(xing)和(he)靈敏性(xing) 抗(kang)原抗體的結合(he)實(shi)際上(shang)只(zhi)發(fa)生(sheng)在(zai)抗原的抗原(yuan)決(jue)定簇與(yu)抗體的抗原(yuan)結(jie)合位(wei)點(dian)之間，由(you)於兩者在(zai)化學(xue)結構(gou)和空(kong) 間構(gou)型上(shang)呈互補關系，所(suo)以(yi)抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反應具有(you)高度(du)的特 異(yi)性(xing)。但(dan)這種(zhong)特異(yi)性(xing)並(bing)不(bu)是(shi)的，假使(shi)兩種(zhong)化合物 有(you)著部分(fen)相(xiang)同的結構(gou)，在(zai)抗原抗體反應中(zhong)可能(neng)出現(xian)交(jiao)叉(cha) 反(fan)應。本(ben)實(shi)驗以(yi)大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 及(ji)其(qi)他(ta)菌株(zhu)共 0 株(zhu)作 為(wei)抗原用(yong)來(lai)檢(jian)測(ce)本(ben)方(fang)法的特異(yi)性(xing)，結(jie)果(guo)顯示(shi)大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 呈(cheng)明(ming)顯陽性(xing)反(fan)應，其(qi)余(yu)各菌株(zhu)均(jun)呈(cheng)陰(yin)性(xing)反(fan)應， 說明(ming)本(ben)方(fang)法對大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 具(ju)有(you)明(ming)顯的檢測(ce)特(te)異(yi) 性(xing)，而對所(suo)測(ce)定(ding)的其(qi)它菌(jun)株(zhu)無交(jiao)叉(cha)反(fan)應。

   本(ben)論(lun)文所(suo)建(jian)立(li)的雙抗(kang)夾心(xin) ELISA 方法對純培養(yang)的 大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 檢(jian)出限(xian)均(jun)05CFU/ml，Kerr 和(he) Chart 等(deng)[6]建立(li)的雙抗(kang)夾心(xin) ELISA 檢測(ce)大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 的檢測(ce)限(xian)為 0 5 CFU/ml ，趙誌晶和劉(liu)秀梅(mei)[7] 建(jian)立(li)的雙抗(kang)夾心(xin)ELISA 檢測(ce)大腸(chang)桿(gan)菌(jun) O57:H7 的檢測(ce)限(xian)為 04CFU/ml，兩 者均(jun)用(yong)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體作為檢測(ce)抗(kang)體，而本(ben)方(fang)法使用(yong) IgY 抗(kang) 體與兔(tu)多(duo)克(ke)隆抗(kang)體，制備相(xiang)對比(bi)單(dan)克(ke)隆抗(kang)體簡單(dan)，對(dui)試(shi) 劑(ji)、成(cheng)本(ben)要求(qiu)也(ye)相(xiang)對降(jiang)低，其(qi)效果(guo)基本(ben)達(da)到檢(jian)測(ce)要求(qiu)。