大(da)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)樣本處(chu)理(li)要(yao)求和(he)註意事(shi)項(xiang)介紹(shao)

　　大(da)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)樣本處(chu)理(li)要(yao)求和(he)註意事(shi)項(xiang)介紹(shao)
　　實(shi)驗(yan)原理(li)
　　大(da)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)采用(yong)雙抗體(ti)壹(yi)步夾心法酶聯免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)試(shi)驗(yan)（ELISA）。往預(yu)先包(bao)被(bei)大(da)鼠(shu)鉀離(li)子通(tong)道2（PIC2）捕獲(huo)抗(kang)體(ti)的(de)包被(bei)微孔(kong)中(zhong)，依(yi)次加入(ru)標(biao)本(ben)、標(biao)準品、HRP標記的(de)檢測抗體(ti)，經(jing)過(guo)溫育並*洗滌。用(yong)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧化物(wu)酶的(de)催化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色，並在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化成(cheng)終(zhong)的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺和(he)樣品中(zhong)的(de)大(da)鼠(shu)鉀離(li)子通(tong)道2（PIC2）呈(cheng)正相(xiang)關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測定吸(xi)光(guang)度（OD值(zhi)），計算樣品濃度。
　　樣本處(chu)理(li)及要(yao)求
　　.血清(qing)：將(jiang)收集於(yu)血(xue)清分離(li)管的(de)全(quan)血(xue)標本(ben)在(zai)室(shi)溫放(fang)置2小時或4℃過(guo)夜，然(ran)後(hou)000×g離(li)心20分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)，或將(jiang)上清(qing)置於(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
　　2.血漿(jiang)：用(yong)EDTA或肝(gan)素作(zuo)為(wei)抗凝(ning)劑采集標(biao)本(ben)，並將(jiang)標(biao)本在(zai)采(cai)集後(hou)的(de)30分鐘(zhong)內(nei)於(yu)2-8℃000×g離(li)心5分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測，或將(jiang)上清(qing)置於(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
　　3.組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：用(yong)預(yu)冷的(de)PBS(0.0M,pH=7.4)沖洗(xi)組(zu)織，去(qu)除(chu)殘留(liu)血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂(lie)解的(de)紅細(xi)胞會影響(xiang)測量(liang)結(jie)果(guo)），稱(cheng)重(zhong)後(hou)將(jiang)碎(sui)。將(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織與對(dui)應體(ti)積(ji)的(de)PBS（壹般(ban)按:9的(de)重量(liang)體(ti)積(ji)比，比如g的(de)組(zu)織樣品對應(ying)9mL的(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需要(yao)適當(dang)調(tiao)整(zheng)，並做好記錄(lu)。在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入(ru)蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)）加(jia)入(ru)玻(bo)璃勻(yun)漿(jiang)器中(zhong)，於(yu)冰(bing)上充(chong)分研磨。為(wei)了進(jin)壹步(bu)裂(lie)解組(zu)織細(xi)胞，可(ke)以(yi)對勻(yun)漿(jiang)液進行超聲破(po)碎(sui)，或反復(fu)凍融。後(hou)將(jiang)勻(yun)漿(jiang)液於(yu)5000×g離(li)心5~0分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)檢測。
　　4.細(xi)胞培養(yang)物上清(qing)或其它生物(wu)標(biao)本：請(qing)000×g離(li)心20分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測，或將(jiang)上清(qing)置於(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
　　註：標(biao)本(ben)溶血(xue)會影響(xiang)後(hou)檢(jian)測結果(guo)，因此溶(rong)血(xue)標(biao)本(ben)不(bu)宜(yi)進(jin)行此項(xiang)檢測。
　　需要(yao)而(er)未(wei)提供(gong)的(de)試(shi)劑(ji)和(he)器材(cai)
　　.酶標(biao)儀(yi)（450nm）
　　2.高(gao)精度加(jia)樣器及槍頭(tou)：0.5-0uL、2-20uL、20-200uL、200-000uL
　　3.37℃恒溫箱
　　4.蒸餾水(shui)或去(qu)離(li)子水(shui)
　　註意事(shi)項(xiang)
　　.嚴格按照(zhao)規(gui)定的(de)時間(jian)和(he)溫度進(jin)行溫育以保證準確結果(guo)。所有試(shi)劑(ji)都(dou)必須(xu)在(zai)使用(yong)前達到室(shi)溫20-25℃。使用(yong)後(hou)立(li)即(ji)冷(leng)藏(zang)保(bao)存試(shi)劑(ji)。
　　2.洗(xi)板不正確可(ke)以(yi)導致不準確的(de)結果(guo)。在(zai)加(jia)入(ru)底(di)物(wu)前(qian)確保盡量(liang)吸(xi)幹孔(kong)內(nei)液體(ti)。溫(wen)育過(guo)程中(zhong)不(bu)要(yao)讓(rang)微孔(kong)幹燥掉。
　　3.消除(chu)板底(di)殘(can)留(liu)的(de)液體(ti)和(he)手指(zhi)印，否則(ze)影響(xiang)OD值。
　　4.底(di)物(wu)顯(xian)色(se)液應呈(cheng)無(wu)色或很淺的(de)顏色(se)，已(yi)經(jing)變(bian)藍(lan)的(de)底(di)物(wu)液不能使用(yong)。
　　5.避免(mian)試(shi)劑(ji)和(he)標本(ben)的(de)交(jiao)叉汙(wu)染(ran)以免(mian)造(zao)成錯(cuo)誤結果(guo)。
　　6.在(zai)儲(chu)存和(he)溫育時避免(mian)強光(guang)直接(jie)照射(she)。
　　7.平(ping)衡至(zhi)室(shi)溫後(hou)再(zai)打(da)開(kai)密封(feng)袋(dai)以(yi)防(fang)水(shui)滴(di)凝(ning)聚在(zai)冷(leng)板條上。
　　8.任(ren)何反(fan)應(ying)試(shi)劑(ji)不(bu)能接觸(chu)漂白(bai)溶劑或漂白(bai)溶劑所散(san)發的(de)強烈(lie)氣體(ti)。任(ren)何漂白(bai)成分都(dou)會破(po)壞試(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)反(fan)應(ying)試(shi)劑(ji)的(de)生物(wu)活(huo)性(xing)。
　　9.不能使用(yong)過(guo)期產品。
　　0.如果(guo)可(ke)能傳(chuan)播(bo)疾病，所有的(de)樣品都(dou)應管理(li)好(hao)，按照(zhao)規(gui)定的(de)程序(xu)處(chu)理(li)樣品和(he)檢測裝置。
　　試(shi)劑(ji)準備
　　大(da)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)從(cong)冷藏(zang)環(huan)境中(zhong)取(qu)出應在(zai)室(shi)溫平(ping)衡後(hou)方可(ke)使用(yong)。
　　20×洗滌(di)緩沖液的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸餾水(shui)按：20稀(xi)釋(shi)，即(ji)份(fen)20×洗滌(di)緩沖液加9份(fen)蒸餾水(shui)。