ELISA法(fa)在生(sheng)物醫學(xue)各(ge)領域(yu)的應用範圍(wei)日益(yi)擴大，可(ke)概括(kuo)四個方面

       科研(yan)ELISA試(shi)劑盒法(fa)是免(mian)疫診斷中的壹項(xiang)新(xin)技術，現(xian)已(yi)成功(gong)地(di)應用於(yu)多(duo)種病原(yuan)微生(sheng)物所引起的傳染(ran)病、寄(ji)生(sheng)蟲病及非傳染(ran)病(bing)等(deng)方面的免疫(yi)診斷。也已應用於(yu)大分(fen)子(zi)抗原(yuan)和小(xiao)分(fen)子(zi)抗原(yuan)的定量測定，根(gen)據已經使用的結(jie)果，認(ren)為(wei)ELISA法(fa)具(ju)有靈敏、特異(yi)、簡(jian)單、快速(su)、穩定及易於(yu)自動(dong)化(hua)操(cao)作(zuo)等(deng)特點。不(bu)僅(jin)適用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)標(biao)本(ben)的檢查(zha)，而且(qie)由(you)於(yu)壹(yi)天(tian)之(zhi)內可以(yi)檢查幾百(bai)甚至上千(qian)份標(biao)本,因(yin)此，也適合於(yu)血(xue)清(qing)流行(xing)病(bing)學(xue)調查。本(ben)法(fa)不僅(jin)可以用來(lai)測定抗體(ti)，而且(qie)也可用於(yu)測定體(ti)液中(zhong)的循環抗(kang)原(yuan)，所以(yi)也是壹種(zhong)早期診斷的良好(hao)方法(fa)。因(yin)此ELISA法(fa)在生(sheng)物醫學(xue)各(ge)領域(yu)的應用範圍(wei)日益(yi)擴大，可(ke)概括(kuo)四個方面： 、免疫酶(mei)染色(se)各(ge)種細(xi)胞(bao)內成(cheng)份(fen)的定位。 2、研究(jiu)抗(kang)酶抗體(ti)的合成(cheng)。 3、顯(xian)現(xian)微量的免疫(yi)沈澱反應。 4、定量檢測體(ti)液中(zhong)抗原(yuan)或抗(kang)體(ti)成份(fen)。

基本方法(fa)壹 用(yong)於(yu)檢(jian)測未(wei)知(zhi)抗原(yuan)的雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心(xin)法(fa):

. 包(bao)被：用(yong)0.05M PH9.牰碳(tan)酸(suan)鹽包(bao)被緩(huan)沖液將(jiang)抗(kang)體(ti)稀釋至蛋(dan)白質含(han)量為(wei)～0μg／ml。在(zai)每(mei)個聚(ju)苯乙烯板(ban)的反應孔(kong)中(zhong)加0.ml，4℃過(guo)壹(yi)夜。次(ci)日(ri)，棄(qi)去孔(kong)內(nei)溶液，用洗滌緩(huan)沖液洗3次，每(mei)次(ci)3分(fen)鐘(zhong)。（簡(jian)稱洗滌(di)，下(xia)同(tong)）。
2. 加樣：加壹(yi)定稀釋的待(dai)檢樣品(pin)0.ml於(yu)上(shang)述已包(bao)被之(zhi)反應孔(kong)中(zhong)，置37℃孵(fu)育(yu)小(xiao)時。然(ran)後(hou)洗滌。（同(tong)時做(zuo)空(kong)白孔(kong)，陰(yin)性對照(zhao)孔(kong)及(ji)陽性對照(zhao)孔(kong)）。
3. 加酶(mei)標(biao)抗體(ti)：於(yu)各(ge)反應孔(kong)中(zhong)，加入(ru)新(xin)鮮稀釋的酶標(biao)抗體(ti)（經滴(di)定後的稀釋度）0.ml。37℃孵(fu)育(yu)0.5～小(xiao)時，洗(xi)滌(di)。
4. 加底(di)物(wu)液顯(xian)色(se)：於(yu)各(ge)反應孔(kong)中(zhong)加入(ru)臨(lin)時配制(zhi)的TMB底物(wu)溶液0.ml，37℃0～30分鐘(zhong)。
5. 終(zhong)止(zhi)反應：於(yu)各(ge)反應孔(kong)中(zhong)加入(ru)2M硫酸0.05ml。
6. 結(jie)果判定：可於(yu)白(bai)色背景(jing)上，直(zhi)接用肉眼(yan)觀(guan)察(cha)結(jie)果：反(fan)應孔(kong)內(nei)顏色越(yue)深，陽性程(cheng)度(du)越強，陰性反(fan)應為(wei)無(wu)色或(huo)極(ji)淺(qian)，依(yi)據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hao)表示。也可測O·D值(zhi)：在ELISA檢測儀(yi)上(shang)，於(yu)450nm（若(ruo)以ABTS顯色，則(ze)40nm）處(chu)，以空(kong)白對照(zhao)孔(kong)調零(ling)後測各(ge)孔(kong)O·D值(zhi)，若大於(yu)規(gui)定的陰性對照(zhao)OD值(zhi)的2.倍，即(ji)為(wei)陽(yang)性。

基(ji)本(ben)方法(fa)二 用於(yu)檢(jian)測未(wei)知(zhi)抗體(ti)的間接法(fa)：
用包(bao)被緩(huan)沖液將(jiang)已(yi)知(zhi)抗原(yuan)稀釋至～0μg／ml，每(mei)孔(kong)加0.ml，4℃過(guo)壹(yi)夜。次(ci)日(ri)洗(xi)滌(di)3次。
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加壹(yi)定稀釋的待(dai)檢樣品(pin)（未知(zhi)抗體(ti)）0.ml於(yu)上(shang)述已包(bao)被之(zhi)反應孔(kong)中(zhong),置37℃孵(fu)育(yu)小(xiao)時,洗(xi)滌(di)。（同(tong)時做(zuo)空(kong)白、陰性及(ji)陽(yang)性孔(kong)對照(zhao)）
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於(yu)反(fan)應孔(kong)中(zhong)，加入(ru)新(xin)鮮稀釋的酶標(biao)第(di)二抗體(ti)（抗抗(kang)體(ti)）0.ml，37℃孵(fu)育(yu)30-60分鐘(zhong)，洗(xi)滌,zui後壹(yi)遍(bian)用DDW洗(xi)滌(di)。
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其余步驟(zhou)同(tong)“雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾心(xin)法(fa)”的4、5、6。