ELISA試(shi)劑盒(he)方(fang)法(fa)測(ce)定(ding)抗(kang)體原(yuan)理(li)及(ji)操(cao)作步驟(zhou)

        在運(yun)用科(ke)研ELISA試劑(ji)盒(he)方(fang)法(fa)測(ce)定(ding)抗(kang)體方(fang)面(mian)，通(tong)常(chang)所用的方(fang)法(fa)稱(cheng)為(wei)間接(jie)法(fa)，也是(shi)目前(qian)zui常(chang)用的方(fang)法(fa)，其原(yuan)理(li)：間接(jie)法(fa)首(shou)先(xian)用抗(kang)原(yuan)包被(bei)於(yu)固(gu)相(xiang)載(zai)體，這些(xie)包(bao)被的抗(kang)原(yuan)必須(xu)是(shi)可溶(rong)性的，或者至(zhi)少是(shi)極微(wei)小的顆粒，經洗(xi)滌(di)，加(jia)入(ru)含有被測(ce)抗(kang)體之(zhi)標(biao)本，再(zai)經孵(fu)育洗(xi)滌(di)後(hou)，加(jia)入(ru)酶標(biao)記(ji)抗(kang)抗(kang)體，(對人(ren)的標(biao)本來(lai)說(shuo)即(ji)加(jia)酶(mei)標(biao)抗(kang)人(ren)球(qiu)蛋白IgG、IgM)，再(zai)經孵(fu)育洗(xi)滌(di)後(hou)，加(jia)底(di)物(wu)顯色(se),底物降解的量(liang)，即(ji)為(wei)欲測(ce)抗(kang)體的量(liang)，其結果可用目(mu)測(ce)或用分(fen)光(guang)光度計定量(liang)測(ce)定(ding)。

操(cao)作步驟(zhou)：

.將(jiang)抗(kang)原(yuan)按5 μg/ml稀釋於(yu)碳(tan)酸(suan)鹽(yan)緩(huan)沖液(pH 9.6)，00 μl /孔，4℃過夜(ye)。

2.加(jia)2％BSA封(feng)閉室(shi)溫(wen) h，200 μl /孔。

3.次(ci)日(ri)PBS－T清洗(xi)4次(ci)(快慢(man)3，間隔(ge)5分(fen)鐘)。

4.陽性(xing)對照(zhao)從0ug/ml，做(zuo)倍(bei)必(bi)稀釋，待測(ce)血清從：50做(zuo)倍(bei)比(bi)稀釋，預試驗(yan)後(hou)確定(ding)稀釋倍(bei)數及(ji)陽性(xing)對照(zhao)的起(qi)始濃(nong)度及(ji)稀釋數量(liang)（以(yi)可以(yi)做(zuo)標(biao)準曲線為(wei)參(can)數），室(shi)溫(wen)h。

5.PBS－T清洗(xi)4次(ci)(快慢(man)3，間隔(ge)5分(fen)鐘)。

6.PBS－T清洗(xi)4次(ci)(快慢(man)3，間隔(ge)5分(fen)鐘)。

7.加(jia)入(ru)：3000（不同公(gong)司(si)有不同的稀釋度） PBS－T稀釋的HRP標(biao)記(ji)的山(shan)羊(yang)抗(kang)人(ren)IgG，00 μl /孔(kong)，室(shi)溫(wen)h。

8.顯色(se)，00 μl /孔，顏色(se)變深(shen)後(hou)中(zhong)止(zhi)顯色(se)，2M硫酸(suan)在BIO－RAD酶標(biao)儀上(shang)讀數，可用ABTS，OPD，TMB等(deng)