裸鼠(shu)白(bai)細(xi)胞介素ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)固(gu)體樣(yang)本(ben)的(de)收(shou)集(ji)

裸鼠(shu)白(bai)細(xi)胞介素-6（IL-6）ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)固(gu)體樣(yang)本(ben)的(de)收(shou)集(ji) :

、組(zu)織(zhi)標(biao)本(ben)：切(qie)割標本(ben)後，稱(cheng)取(qu) g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 9ml 的(de) pH7.2-7.4 左(zuo)右(you)的(de) PBS，用(yong)手工(gong)或勻漿(jiang)器(qi)將(jiang)標本(ben)勻(yun)漿(jiang)充分。離心(xin) 20 分鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000 轉/分），仔細(xi)收集上(shang)清。分裝(zhuang)壹 份待(dai)檢(jian)測，其(qi)余(yu)冷凍備(bei)用(yong)，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有(you)沈澱形(xing)成，應再次離心(xin)。對(dui)於植(zhi)物(wu)組(zu)織(zhi)，不(bu)好(hao)勻(yun)漿(jiang)的話(hua)，就(jiu)在液(ye)氮(dan)中(zhong)充分研磨(mo)。

2、細胞內(nei)蛋(dan)白(bai)樣(yang)本(ben)：許(xu)多(duo)待(dai)測蛋白(bai)不(bu)是分泌(mi)蛋(dan)白(bai)，而(er)是存在於細胞內的(de)蛋(dan)白(bai)，這個時候(hou)，要(yao)先(xian)收(shou)集(ji)細胞，洗(xi)滌幹凈，再破(po)碎(sui)細胞(bao)，離心(xin)取(qu)上(shang)清。

（）培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)

A、動物(wu)細胞(bao)：用(yong) PH7.2-7.4 的(de) PBS 稀(xi)釋(shi)細(xi)胞懸液，使(shi)細胞(bao)濃(nong)度(du)達(da)到 00 萬(wan)/ml 左(zuo)右(you)。通(tong)過(guo)反復(fu)凍(dong)融(rong)（如(ru)果(guo)反復(fu)凍(dong)融(rong)，破(po)碎(sui)效果(guo)不好(hao)，就(jiu)采用(yong)超(chao)聲波(bo)破(po)碎(sui)），以(yi)使細胞破(po)壞並(bing)放出細(xi)胞內(nei)成(cheng)份。2-8℃條件離心(xin) 20 分鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000 轉/分），仔細(xi)收集上(shang)清，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有(you)沈澱形(xing)成，應再次離心(xin)。

B、植(zhi)物(wu)細胞(bao)：用(yong) PH7.2-7.4 的(de) PBS 稀(xi)釋(shi)細(xi)胞懸液，使(shi)細胞(bao)濃(nong)度(du)達(da)到 00 萬(wan)/ml 左(zuo)右(you)，置(zhi)於冰盒(he)上(shang)，用(yong)超(chao)聲破(po)碎(sui)儀，設(she)置(zhi)破(po)碎(sui) 2s，冷卻(que) 30s 的方(fang)式(shi)，充分破(po)碎(sui)細胞(bao)，以(yi)使細胞破(po)壞並(bing)放出細(xi)胞內(nei)成(cheng)份。2-8℃條件離心(xin) 20 分鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000 轉/分），仔細(xi)收集上(shang)清，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有(you)沈澱形(xing)成，應再次離心(xin)。

（2）組(zu)織(zhi)的(de)細(xi)胞(bao)

切(qie)割標本(ben)後，稱(cheng)取(qu) g 組(zu)織(zhi)，加(jia)入(ru) 9ml 的(de) pH7.2-7.4 左(zuo)右(you)的(de) PBS，用(yong)手工(gong)或勻漿(jiang)器(qi)將(jiang)標本(ben)勻(yun)漿(jiang)充分。2-8℃條件離心(xin) 20 分鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000 轉/分），去(qu)除上(shang)清，再用(yong) pH7.2-7.4左(zuo)右(you)的(de) PBS 小(xiao)心(xin)洗(xi)滌(di)沈(chen)澱的(de)細胞三(san)遍(bian)。再用(yong)上(shang)述的(de)細(xi)胞破(po)碎(sui)方法(fa)破(po)碎(sui)細胞(bao)。

3、細胞(bao)內(nei)蛋白(bai)樣(yang)本(ben)：許(xu)多(duo)待(dai)測蛋白(bai)不(bu)是分泌(mi)蛋(dan)白(bai)，而(er)是存在於細胞內的(de)蛋(dan)白(bai)，這個時候(hou)，要(yao)先(xian)收(shou)集(ji)細胞，洗(xi)滌幹凈，再破(po)碎(sui)細胞(bao)，離心(xin)取(qu)上(shang)清。

4、咽(yan)拭子(zi)：加入(ru) 2ml 的 pH7.2-7.4 左(zuo)右(you)的(de) PBS，溶(rong)解(jie)咽(yan)拭子(zi)頭部(bu)，搖(yao)勻(yun)，用(yong)鑷(nie)子(zi)取出(chu)咽拭子(zi)並(bing)擠幹液體，2-8℃條件離心(xin) 20 分鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000 轉/分），仔細(xi)收集上(shang)清。分裝(zhuang)壹份待(dai)檢(jian)測，其(qi)余(yu)冷凍備(bei)用(yong)，保(bao)存過程(cheng)中(zhong)如有(you)沈澱形(xing)成，應再次離心(xin)。如(ru)果(guo)是測分泌(mi)蛋(dan)白(bai)，直(zhi)接(jie)取上(shang)清檢(jian)測，測試(shi)細胞(bao)內(nei)蛋(dan)白(bai)，要(yao)破(po)碎(sui)細胞(bao)。

5、植(zhi)物(wu)標本(ben)：取(qu)組(zu)織(zhi)塊(kuai)（0.2g～0.5g）少可(ke)到 5～0mg 在(zai)冰冷(leng)的 PBS 中(zhong)漂(piao)洗，濾紙(zhi)拭幹，準確稱(cheng)重，放入 5ml 的(de)勻漿(jiang)管(guan)中(zhong)；按重量(mg):體積(ml)=:9 的(de)比(bi)例加入(ru) 9 倍(bei)體積的(de)勻(yun)漿(jiang)介質(zhi)於勻漿(jiang)管(guan)中(zhong)，冰水(shui)浴條件下,用(yong)眼(yan)科(ke)小(xiao)剪(jian)盡快(kuai)剪碎(sui)組(zu)織(zhi)塊(kuai)；勻漿(jiang)的方(fang)式(shi)：手工(gong)勻(yun)漿(jiang)，機(ji)器(qi)勻(yun)漿(jiang)。 ① 手工(gong)勻(yun)漿(jiang)：左(zuo)手持勻(yun)漿(jiang)管(guan)將(jiang)下(xia)端插(cha)入盛有(you)冰水(shui)混合物(wu)的器(qi)皿(min)中(zhong)，右(you)手將(jiang)搗(dao)桿(gan)垂(chui)直(zhi)插(cha)入套(tao)管(guan)中(zhong)，上(shang)下轉動研磨(mo)數十次（6～8 分鐘(zhong)），充分研碎(sui)，制(zhi)成(cheng) 20%的勻漿(jiang)液。 ② 機(ji)器(qi)勻(yun)漿(jiang)：用(yong)組(zu)織(zhi)搗(dao)碎(sui)機(ji) 0000～5000 轉/分 上(shang)下研(yan)磨(mo)制(zhi)成(cheng) 0%組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)，也(ye)可(ke)用(yong)內(nei)切(qie)式組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)機(ji)制(zhi)備(bei)（勻漿(jiang)時間(jian) 0 秒(miao)/次(ci)，間隙 30 秒(miao)，連(lian)續 3～5 次，在冰(bing)水(shui)中(zhong)進(jin)行(xing),可(ke)適(shi)當(dang)延長勻漿(jiang)時間(jian)），鏡檢觀(guan)察(cha):取(qu)少量組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)作塗(tu)片（直接(jie)塗(tu)片、染色(se)均可(ke)以(yi)），顯微鏡下觀(guan)察(cha)細(xi)胞(bao)是(shi)否(fou)破(po)碎(sui)，若(ruo)沒有(you)則(ze)可(ke)延長勻漿(jiang)時間(jian)。將制(zhi)備(bei)好的 0%勻(yun)漿(jiang)液用(yong)普(pu)通離心(xin)機(ji)或低溫低速(su)離心(xin)機(ji) 4000 轉/分左(zuo)右(you),離心(xin) 0～5 分鐘(zhong)，取上(shang)清液(ye)進(jin)行(xing)測定(ding)。