eNOS elisa酶聯(lian)免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒雙抗體夾心(xin)法

eNOS elisa酶(mei)聯免(mian)疫(yi)試(shi)劑(ji)盒雙抗體夾心(xin)法：
.包被(bei)：用0.05MPH9.牰碳(tan)酸(suan)鹽(yan)包(bao)被(bei)緩沖(chong)液(ye)將抗(kang)體稀釋(shi)至(zhi)蛋(dan)白質含(han)量(liang)為(wei)～0μg/ml。在每(mei)個聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯板的反(fan)應孔(kong)中加(jia)0.ml，4℃ 過夜。次日(ri)，棄(qi)去(qu)孔(kong)內溶(rong)液(ye)，用洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)洗3次，每(mei)次3分(fen)鐘。（簡稱洗(xi)滌，下(xia)同）。
2. 加樣：加壹定(ding)稀釋(shi)的(de)待檢(jian)樣品0.ml於上(shang)述(shu)已包被(bei)之反(fan)應孔(kong)中，置(zhi)37℃ 孵育(yu)小(xiao)時。然(ran)後洗滌。（同時做(zuo)空白孔(kong)，陰性對照(zhao)孔(kong)及(ji)陽(yang)性對照(zhao)孔(kong)）。
3. 加(jia)酶(mei)標抗體：於(yu)各(ge)反(fan)應孔(kong)中，加(jia)入(ru)新(xin)鮮稀釋(shi)的(de)酶標抗體（經(jing)滴定(ding)後的稀釋(shi)度(du)）0.ml。37℃ 孵(fu)育(yu)0.5～小(xiao)時，洗(xi)滌(di)。
4. 加(jia)底物(wu)液(ye)顯色(se)：於(yu)各反(fan)應孔(kong)中加(jia)入(ru)臨時配(pei)制的TMB底(di)物(wu)溶(rong)液(ye)0.ml，37℃ 0～30分鐘。
5. 終(zhong)止反(fan)應：於(yu)各反(fan)應孔(kong)中加(jia)入(ru)2M硫(liu)酸(suan)0.05ml。
6. 結(jie)果(guo)判(pan)定(ding)：可(ke)於白色(se)背(bei)景上，直接用肉(rou)眼(yan)觀察(cha)結(jie)果(guo)：反(fan)應孔(kong)內顏(yan)色(se)越(yue)深(shen)，陽(yang)性程度(du)越(yue)強(qiang)，陰性反(fan)應為(wei)無色(se)或極(ji)淺，依(yi)據(ju)所呈(cheng)顏(yan)色(se)的(de)深淺，以(yi)“+”、“-”號(hao)表示。也(ye)可(ke)測(ce)OD值：在ELISA檢(jian)測(ce)儀(yi)上，於(yu)450nm（若以(yi)ABTS顯色(se)，則40nm）處(chu)，以(yi)空白對照(zhao)孔(kong)調(tiao)零後測(ce)各孔(kong)OD值(zhi)，若大於規定(ding)的陰性對照(zhao)OD值(zhi)的(de)2.倍，即(ji)為(wei)陽(yang)性。