鳥(niao)類多瘤(liu)病(bing)毒(du)PCR檢(jian)測(ce)試劑盒反應的(de)特異(yi)性決(jue)定(ding)因(yin)素

鳥(niao)類多瘤(liu)病(bing)毒(du)PCR檢(jian)測(ce)試劑盒反應的(de)特異(yi)性決(jue)定(ding)因(yin)素為(wei)：
①引物與(yu)模板DNA特異(yi)正(zheng)確(que)的(de)結合；
②堿(jian)基配對原(yuan)則(ze)；
③Taq DNA聚合酶(mei)合成(cheng)反(fan)應的(de)忠實(shi)性；
④靶基因(yin)的(de)特異(yi)性與保守性。
其中(zhong)引物與(yu)模板的(de)正確(que)結合是(shi)關鍵(jian)。引物與(yu)模板的(de)結合及引物鏈(lian)的(de)延(yan)伸是(shi)遵(zun)循堿基配對原(yuan)則(ze)的(de)。聚合酶(mei)合成(cheng)反(fan)應的(de)忠實(shi)性及Taq DNA聚合酶(mei)耐(nai)高溫性，使反(fan)應中(zhong)模板(ban)與(yu)引(yin)物的(de)結合(復(fu)性)可(ke)以(yi)在(zai)較(jiao)高的(de)溫度下(xia)進行，結合的(de)特異(yi)性大(da)大(da)增(zeng)加(jia)，被擴(kuo)增的(de)靶基因(yin)片段也就能保持很高的(de)正確(que)度。再通(tong)過(guo)選擇(ze)特異(yi)性和保(bao)守性高的(de)靶基因(yin)區，其特(te)異(yi)性程度就更(geng)高。
(2) 靈敏(min)度高
PCR產物的(de)生成(cheng)量(liang)是(shi)以(yi)指數方(fang)式(shi)增加(jia)的(de)，能將皮(pi)克(ke)(pg=0-2g)量級(ji)的(de)起(qi)始(shi)待測(ce)模板擴增到(dao)微(wei)克(ke)(ug=0-6g)水平。能從(cong)00萬(wan)個(ge)細胞(bao)中(zhong)檢(jian)出(chu)壹個靶細胞(bao)；在(zai)病(bing)毒(du)的(de)檢(jian)測(ce)中(zhong)，PCR的(de)靈敏(min)度可(ke)達3個(ge)RFU(空(kong)斑形(xing)成(cheng)單(dan)位(wei))；在(zai)細菌(jun)學中(zhong)zui小檢(jian)出(chu)率(lv)為(wei)3個細菌(jun)。
(3) 對標(biao)本(ben)的(de)純度要(yao)求(qiu)低(di)
不(bu)需(xu)要(yao)分(fen)離(li)病(bing)毒(du)或細菌(jun)及培養(yang)細胞(bao)，DNA 粗(cu)制品(pin)及總RNA均(jun)可(ke)作(zuo)為(wei)擴增模(mo)板(ban)。可(ke)直接用臨(lin)床(chuang)標(biao)本(ben)如(ru)血(xue)液、體(ti)腔液(ye)、洗(xi)嗽液、毛(mao)發(fa)、細胞(bao)、活(huo)PCR技(ji)術概論(lun)。

(4) 簡(jian)便、快速
PCR反應用耐(nai)高溫的(de)Taq DNA聚合酶(mei)，壹次性地將反(fan)應液加(jia)好後(hou)，即(ji)在DNA擴增液(ye)和水浴鍋上進行變性-退火-延(yan)伸反(fan)應，壹般(ban)在(zai)2～4 小時(shi)完(wan)成(cheng)擴(kuo)增(zeng)反(fan)應。擴增產物壹(yi)般(ban)用電泳(yong)分(fen)析(xi)，不(bu)壹定(ding)要(yao)用同位(wei)素(su)，無放射(she)性汙染、易(yi)推(tui)廣(guang)。