滴(di)蟲通用PCR檢(jian)測試劑(ji)盒使用(yong)方法

滴(di)蟲通用PCR檢(jian)測試劑(ji)盒使用(yong)方法：

測定法的(de)靈敏度(du)來自(zi)作為報告(gao)的(de)酶。*，酶是壹種有(you)機催(cui)化劑(ji)，很(hen)少(shao)量的(de)酶(mei)即(ji)可誘(you)導大(da)量的(de)催(cui)化(hua)反應，產(chan)生(sheng)可供(gong)觀察(cha)的顯(xian)色(se)反應現象。因此該體(ti)系(xi)常(chang)被(bei)稱為酶放(fang)大(da)體(ti)系(xi)。
. 標(biao)準品(pin)的(de)稀釋：本試(shi)劑(ji)盒提供(gong)原倍標準品(pin)壹支，用(yong)戶(hu)可按(an)照下列(lie)圖表在小(xiao)試(shi)管(guan)中(zhong)進行稀釋。   24μg/ml    5號標(biao)準品(pin)    50μl的(de)原(yuan)倍標準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋液
 2μg/ml    4號標(biao)準品(pin)    50μl的(de)5號標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋液
 6μg/ml     3號標(biao)準品(pin)    50μl的(de)4號標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋液
 3μg/ml     2號標(biao)準品(pin)    50μl的(de)3號標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋液
 .5μg/ml   號標(biao)準品(pin)    50μl的(de)2號標(biao)準品(pin)加(jia)入50μl標(biao)準品(pin)稀釋液
2. 加(jia)樣：分(fen)別設(she)空(kong)白孔、標準孔、待(dai)測樣品(pin)孔。在酶(mei)標(biao)包被板(ban)上標準品(pin)準確(que)加(jia)樣50μl，待(dai)測樣品(pin)孔中先(xian)加(jia)樣品(pin)稀釋液40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待(dai)測樣品(pin)0μl（樣品(pin)終(zhong)稀釋度為5倍）。加(jia)樣將樣品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標板孔底部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸(chu)及孔壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻(yun)。|
3. 溫育：用(yong)封板(ban)膜封(feng)板(ban)後置37℃溫育30分(fen)鐘。   
4. 配(pei)液：將30倍濃縮(suo)洗滌(di)液用(yong)蒸餾(liu)水(shui)30倍稀釋後備(bei)用
5. 洗(xi)滌(di)：小(xiao)心(xin)揭(jie)掉(diao)封(feng)板(ban)膜，棄(qi)去(qu)液體(ti)，甩幹(gan)，每孔加(jia)滿(man)洗(xi)滌(di)液，靜(jing)置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去(qu)，如此(ci)重(zhong)復5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。
6. 加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入酶(mei)標試(shi)劑(ji)50μl，空白孔除外(wai)。
7. 溫育：操作(zuo)同3。
8. 洗滌(di)：操作(zuo)同5。
9. 顯(xian)色(se)：每(mei)孔先(xian)加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji)B50μl，輕輕震(zhen)蕩混(hun)勻(yun)，37℃避(bi)光顯(xian)色(se)5分(fen)鐘(zhong).
0. 終止：每(mei)孔加(jia)終止液50μl，終(zhong)止反應（此(ci)時(shi)藍色立(li)轉黃色）。
. 測定：以(yi)空(kong)白空調零，450nm波長(chang)依(yi)序測量各孔的吸(xi)光度（OD值）。 測定應在加(jia)終止液後(hou)5分(fen)鐘以(yi)內(nei)進行。