雞(ji)甲狀(zhuang)腺素（T4）elisa試劑盒(he)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)

雞(ji)甲狀(zhuang)腺素(T4)elisa試劑盒(he)操(cao)作(zuo)步驟(zhou)：

. 標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)稀釋(shi)與(yu)加(jia)樣：在(zai)酶(mei)標(biao)包(bao)被(bei)板上設標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)0孔，在di壹、第(di)二(er)孔(kong)中分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)00μl，然(ran)後(hou)在di壹、第(di)二(er)孔(kong)中加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻；然(ran)後(hou)從di壹孔、第(di)二(er)孔(kong)中各取00μl分(fen)別加(jia)到第(di)三孔(kong)和(he)第(di)四(si)孔(kong)，再(zai)在(zai)第(di)三、第(di)四(si)孔(kong)分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻；然(ran)後(hou)在第(di)三孔(kong)和(he)第(di)四(si)孔(kong)中先各取50μl棄(qi)掉(diao)，再(zai)各取50μl分(fen)別加(jia)到第(di)五、第(di)六(liu)孔中(zhong)，再(zai)在(zai)第(di)五、第(di)六(liu)孔中(zhong)分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50ul，混(hun)勻；混勻後(hou)從第(di)五、第(di)六(liu)孔中(zhong)各取50μl分(fen)別加(jia)到第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻後(hou)從第(di)七、第(di)八(ba)孔(kong)中分(fen)別取50μl加(jia)到第(di)九(jiu)、第(di)十(shi)孔(kong)中，再(zai)在(zai)第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)分(fen)別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)50μl，混(hun)勻後(hou)從第(di)九(jiu)第(di)十(shi)孔(kong)中各取50μl棄(qi)掉(diao)。（稀釋(shi)後(hou)各孔加(jia)樣量(liang)都(dou)為(wei)50μl，濃(nong)度(du)分(fen)別為(wei)80 ng/L，20 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，5 ng/L）。
2. 加(jia)樣：分(fen)別設空(kong)白孔（空(kong)白對(dui)照孔不(bu)加(jia)樣品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑，其余(yu)各步操(cao)作(zuo)相同）、待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)。在(zai)酶標(biao)包(bao)被(bei)板上待(dai)測(ce)樣品(pin)孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)後(hou)再(zai)加(jia)待測(ce)樣品(pin)0μl（樣品(pin)最(zui)終(zhong)稀釋(shi)度(du)為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣將樣品(pin)加(jia)於(yu)酶標(biao)板孔底(di)部(bu)，盡(jin)量不(bu)觸(chu)及(ji)孔(kong)壁(bi)，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動(dong)混(hun)勻。
3. 溫育(yu)：用(yong)封板膜(mo)封板後(hou)置37℃溫(wen)育(yu)30分(fen)鐘(zhong)。
4. 配液(ye)：將30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)濃(nong)縮洗滌(di)液用(yong)蒸餾(liu)水(shui)30（48T的(de)20倍(bei)）倍(bei)稀(xi)釋(shi)後(hou)備(bei)用(yong)。
5. 洗滌(di)：小(xiao)心(xin)揭掉(diao)封板膜(mo)，棄(qi)去液(ye)體，甩(shuai)幹(gan)，每(mei)孔加(jia)滿洗(xi)滌(di)液(ye)，靜置30秒(miao)後(hou)棄(qi)去，如(ru)此重復(fu)5次(ci)，拍(pai)幹(gan)。
6. 加(jia)酶：每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標(biao)試劑50μl，空(kong)白孔除(chu)外(wai)。
7. 溫育(yu)：操作同3。
8. 洗(xi)滌(di)：操(cao)作(zuo)同5。
9. 顯(xian)色：每(mei)孔先加(jia)入顯色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光顯色5分(fen)鐘(zhong).
0. 終(zhong)止：每(mei)孔加(jia)終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反(fan)應（此時藍色立(li)轉黃色）。
. 測(ce)定(ding)：以(yi)空(kong)白空(kong)調零，450nm波(bo)長依序測(ce)量(liang)各孔的(de)吸(xi)光度(du)（OD值(zhi)）。 測(ce)定(ding)應在加(jia)終(zhong)止液(ye)後(hou)5分(fen)鐘(zhong)。

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