惡(e)臭醋(cu)酸(suan)桿菌混(hun)濁(zhuo)變種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)的配(pei)制(zhi)

惡(e)臭醋(cu)酸(suan)桿菌混(hun)濁(zhuo)變種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)的配(pei)制(zhi)：

）、Camp-BAP固體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的配(pei)制(zhi)：
稱取(qu)8.92g培(pei)養(yang)基(ji)，溶(rong)於(yu)200ml蒸餾(liu)水中(zhong)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌，待冷(leng)卻(que)至(zhi)55°C左(zuo)右加入(ru)200ul添加劑(ji)A、200ul添(tian)加劑(ji)B和0ml脫纖維(wei)裂(lie)解(jie)羊血(xue)，充分(fen)搖勻(yun)後(hou)倒(dao)平(ping)板。(添加劑(ji)A和B為購(gou)買附(fu)帶(dai))。
2）、Skirrow固(gu)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的配(pei)制(zhi)：
稱取(qu)8.5g培(pei)養(yang)基(ji)，溶(rong)於(yu)200ml蒸餾(liu)水中(zhong)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌，待冷(leng)卻(que)至(zhi)55°C左(zuo)右加入(ru)2ml FBP原(yuan)液和0ml脫纖維(wei)裂(lie)解(jie)羊血(xue)，充分(fen)搖勻(yun)後(hou)倒(dao)平(ping)板。
FBP原(yuan)液配(pei)置：
分別稱取(qu)0.5g焦亞(ya)硫酸(suan)鈉、0.5g丙(bing)酮酸鈉和0.5g，溶於(yu)20ml蒸餾(liu)水中(zhong)，濾膜過濾除菌，放(fang)置4°C冰箱可(ke)保(bao)存(cun)壹(yi)周(zhou)。
3）、布氏肉(rou)湯(tang)增菌液的配(pei)制(zhi)：
稱取(qu)28.g布氏肉(rou)湯(tang)粉末(mo)，溶解(jie)於(yu)000ml蒸餾(liu)水中(zhong)高(gao)壓(ya)滅(mie)菌，冷(leng)卻(que)後(hou)備用(yong)。

2、增菌培(pei)養(yang)
寬鱗(lin)大孔菌將(jiang)新(xin)鮮(xian)食(shi)品(pin)，如(ru)雞肉(rou)，減碎(sui)，取(qu)5g置(zhi)於(yu)50ml離(li)心管中(zhong)，加入(ru)布氏肉(rou)湯(tang)至液面(mian)覆蓋雞肉(rou)樣品，擰(ning)緊(jin)離(li)心管，先在37°C下(xia)預增菌4小(xiao)時，在加入(ru)00 ul（30mg/ml），並顛倒(dao)混(hun)勻(yun)，放(fang)置在微(wei)需氧(yang)培(pei)養(yang)箱中(zhong)42°C培(pei)養(yang)48小時(shi)。

3、分(fen)離(li)純(chun)化

用(yong)接(jie)種(zhong)環(huan)沾(zhan)取(qu)增菌液劃(hua)線於(yu)Skirrow血(xue)平(ping)板上，在平(ping)板上挑取(qu)不(bu)溶(rong)血(xue)、灰(hui)色、有光(guang)澤、且邊緣(yuan)整齊發(fa)亮(liang)的菌落(luo)在Camp-BAP平(ping)板上純(chun)化，挑(tiao)取(qu)扁(bian)平(ping)、灰(hui)色、像水滴(di)樣菌落(luo)多(duo)次(ci)純(chun)化後(hou)保(bao)存(cun)。

4、菌株(zhu)培(pei)養(yang)

將(jiang)純(chun)化的彎(wan)曲(qu)桿菌單(dan)菌落(luo)接(jie)種(zhong)到Skirrow血(xue)平(ping)板上，放置(zhi)在42°C的微(wei)需氧環(huan)境(jing)下培(pei)養(yang)48小時(shi)，觀(guan)察(cha)細(xi)菌生長狀(zhuang)態(tai)。微需氧(yang)條件(jian)的創(chuang)造(zao)可(ke)用微(wei)需氧(yang)產氣袋和密(mi)閉(bi)培(pei)養(yang)罐，也可(ke)以用微需(xu)氧(yang)培(pei)養(yang)箱（三(san)氣培(pei)養(yang)箱）培(pei)養(yang)。

5、菌株(zhu)保(bao)存(cun)方(fang)法(fa)

挑取(qu)單(dan)克隆菌株(zhu)在Skirrow固(gu)體培(pei)養(yang)基(ji)上平(ping)板劃線(xian)，放(fang)置(zhi)在42°C的微(wei)需氧環(huan)境(jing)下培(pei)養(yang)48小時(shi)，用(yong)滅(mie)菌棉(mian)簽從平(ping)板上刮下長出(chu)的菌落(luo)，懸浮在50%甘油(you)的布氏肉(rou)湯(tang)保(bao)種(zhong)液中(zhong)，置(zhi)於(yu)-80°C超(chao)低溫(wen)保(bao)存(cun)。在-20°C冰(bing)箱中(zhong)保(bao)存(cun)效果較差，存放(fang)壹周(zhou)後細(xi)菌復(fu)蘇率(lv)即顯著下降。此外(wai)，保(bao)存(cun)菌株(zhu)需要(yao)每隔(ge)壹(yi)年(nian)重(zhong)新(xin)活(huo)化(hua)保(bao)存(cun)壹(yi)次。