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ELISA試劑盒操作(zuo)步(bu)驟:
. 標(biao)準品的稀釋與加(jia)樣(yang):在(zai)酶(mei)標(biao)包被(bei)板上設標(biao)準品孔(kong)0孔(kong),在(zai)di壹、第二(er)孔(kong)中(zhong)分別加(jia)標(biao)準品00μl,然後在(zai)di壹(yi)、第二(er)孔(kong)中(zhong)加(jia)標(biao)準品稀釋液50μl,混(hun)勻(yun);然後從di壹(yi)孔(kong)、第(di)二(er)孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)00μl分別加(jia)到(dao)第三孔(kong)和(he)第四孔(kong),再(zai)在第三、第四孔(kong)分別加(jia)標(biao)準品稀釋液50μl,混(hun)勻(yun);然後在(zai)第(di)三孔(kong)和(he)第四孔(kong)中(zhong)先(xian)各取(qu)50μl棄掉(diao),再各(ge)取(qu)50μl分別加(jia)到(dao)第五、第六(liu)孔(kong)中(zhong),再(zai)在第五、第(di)六(liu)孔(kong)中(zhong)分別加(jia)標(biao)準品稀釋液50ul,混(hun)勻(yun);混(hun)勻(yun)後從第(di)五(wu)、第六(liu)孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)50μl分別加(jia)到(dao)第七、第(di)八孔(kong)中(zhong),再(zai)在第七、第(di)八孔(kong)中(zhong)分別加(jia)標(biao)準品稀釋液50μl,混(hun)勻(yun)後從第(di)七、第(di)八孔(kong)中(zhong)分別取(qu)50μl加(jia)到(dao)第九、第十(shi)孔(kong)中(zhong),再(zai)在第九第(di)十(shi)孔(kong)分別加(jia)標(biao)準品稀釋液50μl,混(hun)勻(yun)後從第(di)九(jiu)第十(shi)孔(kong)中(zhong)各(ge)取(qu)50μl棄掉(diao)。(稀釋後(hou)各(ge)孔(kong)加(jia)樣(yang)量都為(wei)50μl,濃(nong)度分別為(wei)80 ng/L,20 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,5 ng/L)。
2. 加(jia)樣(yang):分別設(she)空(kong)白孔(kong)(空(kong)白對(dui)照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶(mei)標(biao)試劑,其余(yu)各步操作(zuo)相(xiang)同(tong))、待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。在(zai)酶(mei)標(biao)包被(bei)板上待測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)中(zhong)先(xian)加(jia)樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液40μl,然後再(zai)加(jia)待測(ce)樣(yang)品(pin)0μl(樣(yang)品(pin)最(zui)終稀釋度為(wei)5倍)。加(jia)樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)加(jia)於(yu)酶(mei)標(biao)板孔(kong)底(di)部(bu),盡(jin)量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁(bi),輕輕晃動混(hun)勻(yun)。
3. 溫育:用封板膜(mo)封板後(hou)置(zhi)37℃溫(wen)育30分鐘。
4. 配(pei)液:將30(48T的(de)20倍)倍濃(nong)縮洗滌液用蒸(zheng)餾(liu)水30(48T的20倍)倍稀釋後(hou)備(bei)用。
5. 洗(xi)滌:小(xiao)心揭(jie)掉(diao)封板膜(mo),棄去(qu)液體(ti),甩幹(gan),每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液,靜置(zhi)30秒(miao)後(hou)棄去,如(ru)此(ci)重復5次(ci),拍幹(gan)。
6. 加(jia)酶(mei):每(mei)孔(kong)加(jia)入(ru)酶(mei)標(biao)試劑50μl,空白孔(kong)除(chu)外(wai)。
7. 溫(wen)育:操作(zuo)同(tong)3。
8. 洗滌:操作(zuo)同(tong)5。
9. 顯(xian)色(se):每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑A50μl,再加(jia)入(ru)顯(xian)色(se)劑B50μl,輕輕震蕩(dang)混(hun)勻(yun),37℃避(bi)光顯(xian)色(se)5分鐘.
0. 終止:每(mei)孔(kong)加(jia)終止液50μl,終止反應(ying)(此(ci)時藍(lan)色(se)立(li)轉(zhuan)黃色(se))。
. 測(ce)定(ding):以(yi)空(kong)白空調(tiao)零(ling),450nm波(bo)長(chang)依(yi)序(xu)測(ce)量各孔(kong)的(de)吸光度(OD值(zhi))。 測(ce)定(ding)應(ying)在加(jia)終止液後5分鐘。
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