鱈魚源(yuan)性成(cheng)分探針(zhen)法(fa)熒(ying)光定量(liang)PCR試劑盒熒(ying)光定量(liang)PCR實(shi)驗步驟(zhou)

鱈魚(yu)源(yuan)性成(cheng)分探針(zhen)法(fa)熒(ying)光定量(liang)PCR試劑盒熒(ying)光定量(liang)PCR實(shi)驗步驟(zhou)：

①產(chan)品僅(jin)用於(yu)科研取(qu)凍存已(yi)裂(lie)解(jie)的(de)細胞，室溫放置(zhi)5分鐘(zhong)使(shi)其(qi)*溶解。
②兩相(xiang)分離(li) 每(mei)ml的(de)TRIZOL試(shi)劑裂解的(de)樣(yang)品中(zhong)加入(ru)0.2ml的(de)lvfang，蓋(gai)緊(jin)管蓋(gai)。手動劇(ju)烈(lie)振(zhen)蕩管(guan)體5秒(miao)後，5到30℃孵(fu)育2到3分鐘。4℃下2000rpm離(li)心(xin)5分鐘(zhong)。離心(xin)後混合(he)液體將(jiang)分為下(xia)層(ceng)的(de)紅色酚lvfang相(xiang)，中(zhong)間(jian)層以(yi)及(ji)無色水相(xiang)上(shang)層(ceng)。RNA全(quan)部被分配於水相(xiang)中(zhong)。水(shui)相(xiang)上(shang)層(ceng)的(de)體積(ji)大(da)約是勻漿時(shi)加入(ru)的(de)TRIZOL試(shi)劑的(de)60%。
③RNA沈澱(dian) 將(jiang)水相(xiang)上(shang)層(ceng)轉(zhuan)移到壹(yi)幹凈(jing)無RNA酶的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)。加等(deng)體積(ji)異(yi)丙醇(chun)混合(he)以(yi)沈澱(dian)其(qi)中(zhong)的(de)RNA，混勻(yun)後5到30℃孵(fu)育0分(fen)鐘後，於(yu)4℃下(xia)2000rpm 離(li)心(xin)0分鐘(zhong)。此時(shi)離心(xin)前不可(ke)見的(de)RNA沈澱(dian)將(jiang)在(zai)管底部和(he)側壁(bi)上(shang)形(xing)成(cheng)膠(jiao)狀(zhuang)沈澱(dian)塊。
④RNA清(qing)洗 移去(qu)上(shang)清(qing)液，每(mei)mlTRIZOL試(shi)劑裂解的(de)樣(yang)品中(zhong)加入(ru)至(zhi)少(shao)ml的(de)75%乙(yi)醇(chun)(75%乙(yi)醇(chun)用DEPCH2O配制)，清(qing)洗RNA沈澱(dian)。混勻(yun)後，4℃下(xia)7000rpm離(li)心(xin)5分鐘(zhong)。
⑤RNA幹燥 小(xiao)心(xin)吸(xi)去大(da)部分乙(yi)醇(chun)溶液，使RNA沈澱(dian)在(zai)室溫空氣(qi)中(zhong)幹(gan)燥5-0分(fen)鐘。
⑥溶解RNA沈澱(dian) 溶解RNA時(shi)，先(xian)加入(ru)無RNA酶的(de)水(shui)40μl用槍(qiang)反復吹(chui)打(da)幾(ji)次，使其(qi)*溶解，獲(huo)得的(de)RNA溶液保(bao)存(cun)於-80℃待(dai)用。 )紫外(wai)吸(xi)收法(fa)測(ce)定先用稀(xi)釋(shi)用的(de)TE溶液將(jiang)分光光度(du)計(ji)調零(ling)。然(ran)後取(qu)少(shao)量(liang)RNA溶液用TE稀(xi)釋(shi)(:00)後，讀(du)取(qu)其(qi)在(zai)分光光度(du)計(ji)260nm和(he)280nm處的(de)吸(xi)收值(zhi)，測(ce)定RNA溶液 濃度(du)和(he)純度。

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