人(ren)核(he)仁(ren)形成區嗜(shi)銀(yin)蛋(dan)白(bai)(Ag-NORs)免疫組(zu)化試劑盒​實(shi)驗(yan)步(bu)驟

人核(he)仁(ren)形成區嗜(shi)銀(yin)蛋(dan)白(bai)(Ag-NORs)免疫組(zu)化試劑盒實(shi)驗(yan)步(bu)驟（建(jian)議方案(an)）：

石(shi)蠟(la)包(bao)埋(mai)組(zu)織切(qie)片3~4μm 厚度

.烤片： 將(jiang)待做切片置(zhi)於切片架上，於60℃恒溫烤箱中(zhong)至(zhi)少(shao)烤 hr；

2.脫(tuo)蠟(la)： 切(qie)片放入盛有(you)二(er)甲苯的(de)容(rong)器中(zhong)脫(tuo)蠟(la)3 次(ci)（即二(er)甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次(ci)

0 min；

3.水化： 切片經(jing)下行酒精水化，無水乙醇(chun)5min，95%乙醇(chun)2 次(ci)（每次(ci)2min），85%

乙醇(chun)2 min；75%乙醇(chun)2min，自來水沖洗，ddH2O 洗(xi)2×2min；

4.抗(kang)原(yuan)修復： 根(gen)據(ju)抗體說明(ming)書(shu)方法(fa)進(jin)行抗原(yuan)修復，常(chang)采(cai)用高(gao)壓(ya)、微(wei)波(bo)（溫

度達(da)到98~00℃）或(huo)酶(mei)消(xiao)化修復法(fa)，室(shi)溫自然冷(leng)卻，自來水沖洗，ddH2O 洗(xi)2×

2min，TBS 洗(xi)滌(di)（2×2min）（具體(ti)修(xiu)復方法(fa)見(jian)附(fu)）* 註：有(you)些抗原(yuan)勿需(xu)修復，

直接(jie)進(jin)入第5 步(bu)封(feng)閉。

5.封(feng)閉： 滴加(jia)試(shi)劑(ji)B，37℃濕盒(he)孵(fu)育30 min；

6.加(jia)壹抗(kang)：滴(di)加(jia)用(yong)試劑(ji)C（即(ji)用型壹抗(kang)），37℃濕(shi)盒(he)孵(fu)育2 hr 或(huo)4℃過(guo)夜；

7.洗滌(di)： TBS-T 洗滌(di)（3×5 min）；

8.封(feng)閉： 滴加(jia)試(shi)劑(ji)B，37℃濕盒(he)孵(fu)育0 min；

9.加(jia)二(er)抗(kang)： 滴加用抗(kang)體(ti)稀釋液(ye)稀釋的(de)化二(er)抗(kang)（試劑D），37℃濕盒(he)中(zhong)孵(fu)育

30 min；

0.洗(xi)滌(di)： TBS-T 洗滌(di)（3×5 min）；

.封(feng)閉： 滴加(jia)試(shi)劑(ji)Tween 20，37℃濕盒(he)孵(fu)育封(feng)閉20 min；

2.加HRP-SA： 滴(di)加(jia)用(yong)抗體(ti)稀釋液(ye)稀釋的(de)試(shi)劑E（：50~200，終(zhong)濃(nong)度5~20 nM），

37℃濕盒中(zhong)孵(fu)育30 min；

3.洗(xi)滌(di)： TBS-T 洗滌(di)（3×5 min），TBS 洗滌(di)（2×5 min）；

4.顯色：應用(yong)DAB 溶液(ye)（試(shi)劑(ji)F）顯(xian)色；

5.復染(ran)：自來水充分沖洗，復染(ran)，脫(tuo)水，透明(ming)；

6.封(feng)片： 待組(zu)織標(biao)本(ben)幹後(hou)，用(yong)試(shi)劑(ji)緩沖甘(gan)油(you)封(feng)固劑(ji)封(feng)片；

7.觀(guan)察成(cheng)像： 顯微(wei)鏡下觀察成像。