【概要描(miao)述(shu)】大(da)鼠(shu)鞏膜(mo)成(cheng)纖維細(xi)胞公司正(zheng)在(zai)出售(shou)的(de)產(chan)品(pin)：NCI-H226間皮(pi)瘤(liu)Y79人視(shi)網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞ZR-75-1人乳腺(xian)癌細(xi)胞ZR-75-1+luc人乳腺(xian)癌細(xi)胞熒(ying)光(guang)酶標(biao)記(ji)ZR-75-30人(ren)乳(ru)腺癌細(xi)胞3T3-L1小(xiao)鼠(shu)胚(pei)胎成纖維細(xi)胞4T1小(xiao)鼠(shu)乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞4T1+luc小(xiao)鼠(shu)乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞熒(ying)光(guang)酶標(biao)記(ji)AML-12小(xiao)鼠(shu)肝實(shi)質細(xi)胞Ana-1小(xiao)鼠(shu)巨噬細(xi)胞

大(da)鼠鞏膜(mo)成(cheng)纖維分離自(zi)鞏膜(mo)組(zu)織(zhi)，鞏膜(mo)是(shi)眼(yan)球(qiu)壁的(de)主(zhu)要組(zu)成之壹(yi)。是(shi)眼(yan)球(qiu)纖維膜的後(hou)5/6部(bu)分。前(qian)方聯接角(jiao)膜(mo)，後(hou)方與(yu)視(shi)神(shen)經(jing)的(de)鞘膜延續(xu)。鞏膜(mo)在(zai)視(shi)神(shen)經(jing)穿(chuan)出(chu)部附(fu)近(jin)最(zui)厚(hou)，愈前(qian)愈薄(bo)，在肌(ji)腱附(fu)著處(chu)又(you)復增(zeng)厚(hou)。其(qi)與(yu)角膜(mo)交界(jie)處(chu)，外(wai)面(mian)有環形的角(jiao)膜溝(gou)，深(shen)部(bu)有鞏膜(mo)靜(jing)脈竇。小(xiao)兒(er)的(de)鞏膜(mo)為(wei)淺藍(lan)色，成(cheng)年(nian)為(wei)白色(se)，老年(nian)因脂肪沈著而帶(dai)黃(huang)色(se)。鞏膜(mo)結(jie)構(gou)堅韌，有支(zhi)持和保護眼(yan)內組(zu)織(zhi)的(de)作用。成纖維細(xi)胞是(shi)疏(shu)松結締(di)組(zu)織(zhi)的(de)主(zhu)要細(xi)胞成分，由胚胎時期的間(jian)充質細(xi)胞分化而(er)來；成(cheng)纖維細(xi)胞較(jiao)大，輪(lun)廓清(qing)楚(chu)，多為(wei)突起的(de)紡錘形或星形的扁(bian)平(ping)狀(zhuang)結構(gou)，其細(xi)胞核呈規則的卵圓(yuan)形，核仁(ren)大而明顯(xian)。成(cheng)纖維細(xi)胞功能(neng)活(huo)動(dong)旺(wang)盛，細(xi)胞質嗜(shi)弱(ruo)堿性(xing)，具(ju)明顯的(de)蛋白質合(he)成(cheng)和分泌(mi)活(huo)動(dong)，在(zai)壹(yi)定(ding)條件下，它可以(yi)實(shi)現(xian)跟(gen)纖維細(xi)胞的互相轉(zhuan)化(hua)；成(cheng)纖維細(xi)胞對(dui)不同(tong)程(cheng)度的細(xi)胞變(bian)性(xing)、壞(huai)死(si)和組(zu)織(zhi)缺損(sun)的修復有著十分重(zhong)要(yao)的作用。剛(gang)分離的(de)成纖維細(xi)胞呈圓(yuan)形、折光(guang)性(xing)良(liang)好(hao)，懸浮於培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)。30min細(xi)胞貼壁，其(qi)中(zhong)部(bu)分開始(shi)伸(shen)出偽(wei)足(zu)，表現為(wei)小(xiao)的(de)突起；6h後(hou)細(xi)胞基本貼壁wan全，伸(shen)展成梭形，胞核清晰(xi)，分布較(jiao)均勻，散在(zai)生長(chang)，不聚(ju)集成(cheng)團；細(xi)胞生長(chang)迅(xun)速(su)，5-7天即(ji)呈(cheng)融(rong)合(he)狀(zhuang)態(tai)，細(xi)胞排(pai)列緊(jin)密(mi)，有的交叉重(zhong)疊(die)生長(chang)，平(ping)坦(tan)、胞體較(jiao)大，細(xi)胞質透(tou)明，細(xi)胞核較(jiao)大，呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形，顏(yan)色(se)淡。細(xi)胞融合(he)，並彼此連(lian)接成(cheng)網(wang)狀(zhuang)；細(xi)胞呈突起的(de)紡錘形或星形的扁(bian)平(ping)分布。
方(fang)法簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分離的(de)大鼠(shu)鞏膜(mo)成(cheng)纖維采用混合(he)膠(jiao)原(yuan)酶消化(hua)法(fa)結合(he)差速貼(tie)壁法(fa)制(zhi)備(bei)而來，細(xi)胞總量(liang)約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司實(shi)驗(yan)室(shi)分離的(de)大鼠(shu)鞏膜(mo)成(cheng)纖維經Vimentin免(mian)疫熒(ying)光(guang)鑒(jian)定(ding)，純(chun)度可達90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細(xi)菌、酵(jiao)母和真菌等(deng)。

本公司(si)所(suo)有產品僅(jin)供科(ke)學實(shi)驗(yan)，不做其(qi)他(ta)科(ke)學實(shi)驗(yan)外(wai)的(de)使(shi)用！

包(bao)被(bei)條件 貼(tie)壁不包(bao)被(bei)

培(pei)養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天換(huan)液壹(yi)次(ci)

生長(chang)特性(xing) 貼(tie)壁

細(xi)胞形態(tai) 成(cheng)纖維細(xi)胞樣(yang)

傳(chuan)代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)2-3代(dai)左右(you)

消化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白酶(mei)

培(pei)養(yang)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材(cai)準備(bei)：準備(bei)無菌(jun)的(de)培(pei)養(yang)皿(min)、培(pei)養(yang)瓶、移液(ye)管(guan)、離(li)心(xin)管(guan)、手術器(qi)械(xie)等(deng)，並進行高壓滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合(he)適(shi)的(de)消毒處(chu)理(li)。

2. 試(shi)劑準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或購(gou)買(mai)合(he)適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如、膠原(yuan)酶等(deng)）、胎牛(niu)血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等(deng)試(shi)劑，確(que)保(bao)其無菌(jun)且在(zai)有效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物或組(zu)織(zhi)來源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實(shi)驗(yan)需(xu)求(qiu)，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的(de)動(dong)物並進行相應(ying)的(de)麻(ma)醉(zui)或處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需組(zu)織(zhi)；或從(cong)已有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織(zhi)。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在無(wu)菌(jun)條件下，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，盡(jin)量減少對(dui)組(zu)織(zhi)的(de)損傷，並去除(chu)多余的脂肪、結(jie)締(di)組(zu)織(zhi)等(deng)非目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清(qing)洗(xi)：將(jiang)取(qu)出(chu)的組(zu)織(zhi)用預冷(leng)的(de)無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數(shu)次(ci)，以(yi)去除(chu)血(xue)液(ye)和雜質。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便後(hou)續消化(hua)。

細(xi)胞分離

1. 消化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊(kuai)放入(ru)含(han)有適量消化(hua)酶(mei)的離心(xin)管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期間可輕輕搖晃離(li)心(xin)管(guan)，使(shi)消化(hua)更(geng)均勻。

2. 終(zhong)止(zhi)消化(hua)：當組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分被(bei)消化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞懸液(ye)或小(xiao)細(xi)胞團時，加入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止(zhi)消化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與(yu)離心(xin)：用細(xi)胞篩(shai)過(guo)濾(lv)細(xi)胞懸液(ye)，去(qu)除未消化(hua)的(de)組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然後(hou)將濾(lv)液以(yi)適當的轉(zhuan)速(su)離心(xin)，收(shou)集(ji)細(xi)胞沈澱(dian)。

細(xi)胞觀(guan)察與(yu)檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察：每天用倒置顯(xian)微鏡觀(guan)察細(xi)胞的形態(tai)、生長(chang)狀(zhuang)態(tai)、密度等(deng)，記錄(lu)細(xi)胞的變(bian)化情(qing)況，如發(fa)現(xian)細(xi)胞汙(wu)染或異(yi)常(chang)，及(ji)時采取相應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞計數與(yu)活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時，可采用臺盼藍(lan)染色(se)等(deng)方法(fa)對(dui)細(xi)胞進行計(ji)數和活(huo)力檢測(ce)，以(yi)了(le)解(jie)細(xi)胞的生長(chang)情(qing)況和健(jian)康狀(zhuang)態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快(kuai)速操作

- 組(zu)織(zhi)取(qu)材(cai)後(hou)需立即(ji)處(chu)理(li)，避免長(chang)時間暴(bao)露於室溫(wen)或非(fei)營(ying)養環(huan)境(jing)。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生理(li)鹽(yan)水(shui)沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質。

2. 消化(hua)酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消化(hua)酶(mei)，避免過(guo)度消化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞損傷。

- 消化(hua)時間需嚴(yan)格(ge)控制（通常(chang) 10-30 分鐘），可通過顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞解離狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條件優化

1. 培(pei)養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或特定(ding)生長(chang)因子的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞需添(tian)加(jia)胰(yi)島素、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁(fan)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)品(pin)牌或批(pi)次(ci)，減少細(xi)胞適應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代細(xi)胞貼壁能(neng)力較(jiao)弱，可能(neng)需要(yao)包(bao)被(bei)培(pei)養(yang)皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋白、多聚賴(lai)氨(an)酸(suan)）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯合(he)會導致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制和分化。

三(san)、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈臺操作(zuo)，使(shi)用壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避免交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長(chang)期使(shi)用可能(neng)影響細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期檢測(ce)支(zhi)原(yuan)體汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需及(ji)時丟棄細(xi)胞。

四(si)、狀(zhuang)態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察

- 每(mei)天檢查細(xi)胞形態(tai)、密度及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色(se)，及(ji)時更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)基(ji)（通常(chang)每(mei) 2-3 天換(huan)液壹(yi)次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增(zeng)多）可能(neng)提(ti)示(shi)汙(wu)染或營(ying)養(yang)不足(zu)。

2. 傳(chuan)代(dai)與(yu)凍存(cun)

- 原(yuan)代細(xi)胞分裂次(ci)數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及(ji)時凍存早期代次(ci)細(xi)胞。

- 凍(dong)存液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或專用凍存培(pei)養(yang)基(ji)），梯度降溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存。