【概要描述(shu)】大(da)鼠顳下(xia)頜關(guan)節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)公司正在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品(pin)：NCI-H2452間皮(pi)瘤(liu)BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)bEnd.3小鼠腦微(wei)血(xue)管內皮(pi)細(xi)胞(bao)株Beta-TC-6小鼠胰(yi)島瘤(liu)胰(yi)島Beta細(xi)胞(bao)BV2小鼠小膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)C17.2小鼠神(shen)經(jing)幹細(xi)胞(bao)C2C12小鼠成肌細(xi)胞(bao)C3H/10T1/2 Clone8 小鼠胚胎成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)CT26小鼠結(jie)腸癌(ai)細(xi)胞(bao)CT26+LUC小鼠結(jie)腸癌(ai)細(xi)胞(bao)熒光(guang)酶(mei)標記

大鼠顳下(xia)頜關(guan)節(jie)軟(ruan)骨分離自(zi)顳下(xia)頜關節(jie)軟(ruan)骨組(zu)織，顳(nie)下頜關節(jie)又稱顳(nie)頜關(guan)節(jie)"或下(xia)頜關(guan)節(jie)"。由(you)下頜頭與(yu)顳骨下(xia)頜(he)窩(wo)和關節(jie)結(jie)節(jie)組(zu)成，左右合成(cheng)壹聯(lian)合(he)關(guan)節(jie)，主(zhu)理張(zhang)口閉(bi)口和咀嚼運(yun)動(dong)。關(guan)節(jie)囊(nang)松弛(chi)，側方(fang)為內、外側韌帶(dai)所(suo)加(jia)強(qiang)。囊內的關(guan)節(jie)盤(pan)呈(cheng)卵圓(yuan)形(xing)，由(you)纖(xian)維(wei)軟(ruan)骨組(zu)成，區(qu)分為前(qian)、中(zhong)、後(hou)三部(bu)分。上面(mian)呈鞍狀(zhuang)，前(qian)凹後(hou)凸(tu)，與關節(jie)結(jie)節(jie)和下頜窩(wo)的(de)凸(tu)凹(ao)輪(lun)廓(kuo)相對應(ying)；下面(mian)凹(ao)正對下(xia)頜頭，周(zhou)緣與關(guan)節(jie)囊(nang)相接(jie)，前(qian)緣與穿(chuan)過關節(jie)囊(nang)的翼(yi)外肌腱相(xiang)連。關節(jie)盤(pan)將(jiang)關節(jie)腔(qiang)分成上(shang)、下兩半。關(guan)節(jie)外(wai)更有蝶(die)下頜(he)韌帶(蝶(die)棘至(zhi)下頜小(xiao)舌(she))和莖(jing)突(tu)下頜韌帶(dai)(莖(jing)突(tu)至下頜角(jiao))予(yu)以(yi)加(jia)固(gu)。關節(jie)軟(ruan)骨屬(shu)於(yu)透(tou)明軟(ruan)骨，表(biao)面光滑、呈淡藍色(se)、有光澤(ze)，它是由壹(yi)種(zhong)特(te)殊(shu)的叫(jiao)做(zuo)致密(mi)結(jie)締組(zu)織的(de)膠(jiao)原纖(xian)維(wei)構(gou)成(cheng)的基(ji)本(ben)框(kuang)架，這(zhe)種(zhong)框(kuang)架呈(cheng)半環形(xing)，類(lei)似拱形(xing)球門(men)，其(qi)底(di)端(duan)緊緊附(fu)著在(zai)下面(mian)的骨質(zhi)上，上(shang)端(duan)朝向關節(jie)面(mian)，這(zhe)種(zhong)結(jie)構使(shi)關節(jie)軟(ruan)骨緊緊與骨結(jie)合起來而不(bu)會掉下(xia)來，同(tong)時當受到(dao)壓力時候，還可(ke)以(yi)有少許(xu)的變(bian)形(xing)，起到緩沖(chong)壓力的作(zuo)用。在(zai)這(zhe)些纖(xian)維(wei)之(zhi)間(jian)，散(san)在(zai)分布(bu)著軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)，軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)由淺層向深層(ceng)逐(zhu)漸由扁平樣至橢(tuo)圓(yuan)或圓(yuan)形(xing)的(de)細(xi)胞(bao)組(zu)成，這(zhe)些軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)維(wei)持(chi)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨的(de)正常(chang)代(dai)謝(xie)。關節(jie)軟(ruan)骨沒(mei)有神(shen)經(jing)支配(pei)，也(ye)沒有血(xue)管，其(qi)營(ying)養成(cheng)分必(bi)須(xu)從(cong)關節(jie)液(ye)中(zhong)取(qu)得(de)，而其(qi)代(dai)謝廢(fei)物也(ye)必(bi)須(xu)排(pai)至(zhi)關(guan)節(jie)液(ye)中(zhong)，關節(jie)軟(ruan)骨的(de)這(zhe)種(zhong)營(ying)養代(dai)謝(xie)必(bi)須(xu)通(tong)過關節(jie)運(yun)動(dong)，使(shi)關節(jie)軟(ruan)骨不(bu)斷(duan)的(de)受到(dao)壓力刺激才行(xing)，所以(yi)關(guan)節(jie)運(yun)動(dong)對於(yu)維(wei)持(chi)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨的(de)正常(chang)結(jie)構起重(zhong)要的作(zuo)用(yong)。關節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)位於(yu)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨陷(xian)窩(wo)內。幼稚(zhi)的關節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)位於(yu)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨組(zu)織的(de)表(biao)層，單(dan)個(ge)分布(bu)、體(ti)積(ji)較小、呈橢(tuo)圓(yuan)形(xing)，長(chang)軸與關節(jie)軟(ruan)骨表(biao)面平行(xing)，越向深層(ceng)的(de)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)體(ti)積(ji)之(zhi)間增(zeng)大(da)呈圓形(xing)，細(xi)胞(bao)核(he)圓(yuan)形(xing)或(huo)卵(luan)圓形(xing)、染(ran)色(se)淺，細(xi)胞(bao)質(zhi)弱嗜(shi)堿性，常(chang)見(jian)數量不壹的脂滴。成(cheng)熟的(de)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)多2-8個(ge)成群分布(bu)於(yu)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨陷(xian)窩(wo)內，這(zhe)些關(guan)節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)由同(tong)壹(yi)個(ge)母細(xi)胞(bao)分裂增(zeng)殖(zhi)而成(cheng)，稱為同(tong)源(yuan)細(xi)胞(bao)群。電(dian)鏡下(xia)，關節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)有突起和皺(zhou)褶，細(xi)胞(bao)質(zhi)內有大量的粗面內質(zhi)網(wang)和發達的(de)高爾(er)基(ji)復(fu)合體(ti)及少量的線粒(li)體(ti)。在組(zu)織切片中(zhong)，關節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)收(shou)縮為不規則(ze)形(xing)，在(zai)軟(ruan)骨囊(nang)和細(xi)胞(bao)之間出現較大的腔(qiang)隙。體(ti)外培養的(de)關(guan)節(jie)軟(ruan)骨細(xi)胞(bao)對於(yu)研究(jiu)其(qi)生理功能、藥物作(zuo)用以(yi)及各種(zhong)致(zhi)病(bing)因(yin)素作(zuo)用下(xia)的(de)病(bing)理(li)生理改(gai)變(bian)具重(zhong)要意義。
方(fang)法(fa)簡介：

公司(si)實驗室分離的(de)大鼠顳下(xia)頜關(guan)節(jie)軟(ruan)骨采用(yong)膠(jiao)原酶(mei)聯合(he)中(zhong)性dan白酶(mei)消(xiao)化(hua)制(zhi)備而來，細(xi)胞(bao)總量約(yue)為5×10?cells/瓶。
質(zhi)量檢測：

公司(si)實驗室分離的(de)大鼠顳下(xia)頜關(guan)節(jie)軟(ruan)骨經(jing)Ⅱ型膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)免疫熒光(guang)鑒(jian)定，純度可達90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌、酵母和真菌等。

本(ben)公司(si)所有產(chan)品(pin)僅供科(ke)學實驗，不(bu)做(zuo)其(qi)他(ta)科(ke)學實驗外(wai)的(de)使(shi)用！

培養基(ji) 含(han)FBS、生長(chang)添加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每3-4天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長(chang)特(te)性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 梭形(xing)、多角(jiao)形(xing)

傳代特(te)性 可傳5代左右；3代以(yi)內狀(zhuang)態

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培養條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗器(qi)材(cai)準備：準備無(wu)菌的培養皿(min)、培養瓶、移液(ye)管、離心管、手術器(qi)械(xie)等，並進行高壓滅(mie)菌或其(qi)他(ta)合適的消(xiao)毒(du)處(chu)理。

2. 試劑準備：配制(zhi)或(huo)購買(mai)合(he)適(shi)的(de)培養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎牛(niu)血(xue)清、雙抗(kang)等試劑，確(que)保其(qi)無(wu)菌且在有效(xiao)期內。

3. 實驗動(dong)物或(huo)組(zu)織來源(yuan)準備：根據實驗需(xu)求，選(xuan)擇(ze)合(he)適(shi)的動物並(bing)進行(xing)相應的(de)麻(ma)醉或(huo)處(chu)死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已有的組(zu)織樣(yang)本(ben)庫(ku)中(zhong)獲取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與(yu)處(chu)理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌條件(jian)下，迅(xun)速取(qu)出(chu)目標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減少(shao)對組(zu)織的(de)損(sun)傷(shang)，並(bing)去(qu)除多余的脂肪(fang)、結(jie)締組(zu)織等非(fei)目的(de)組(zu)織。

2. 清洗：將取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織用(yong)預冷的無(wu)菌PBS沖洗數次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)和雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以(yi)便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊放入含(han)有適量消(xiao)化(hua)酶(mei)的離(li)心(xin)管中(zhong)，在37℃恒溫(wen)搖(yao)床或(huo)培養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間可(ke)輕輕搖(yao)晃離心(xin)管，使(shi)消(xiao)化(hua)更均(jun)勻。

2. 終止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組(zu)織塊大部(bu)分被(bei)消(xiao)化(hua)成(cheng)單(dan)細(xi)胞(bao)懸液(ye)或(huo)小細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入含(han)血(xue)清的培養基(ji)終(zhong)止消(xiao)化(hua)。

3. 過濾與(yu)離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸液(ye)，去(qu)除未消(xiao)化(hua)的(de)組(zu)織碎(sui)片，然(ran)後(hou)將(jiang)濾液(ye)以(yi)適(shi)當(dang)的轉(zhuan)速離(li)心，收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀察與檢測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每天(tian)用(yong)倒置顯(xian)微(wei)鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生長(chang)狀(zhuang)態、密(mi)度(du)等，記錄細(xi)胞(bao)的變化情(qing)況(kuang)，如(ru)發(fa)現細(xi)胞(bao)汙(wu)染或(huo)異(yi)常，及時采取(qu)相(xiang)應(ying)措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活(huo)力檢測：在需(xu)要時，可采用(yong)臺(tai)盼(pan)藍染(ran)色等方(fang)法(fa)對細(xi)胞(bao)進行計數(shu)和活(huo)力檢測，以(yi)了(le)解細(xi)胞(bao)的生長(chang)情(qing)況(kuang)和健康(kang)狀(zhuang)態。

壹、取(qu)材(cai)與(yu)分離

1. 快速(su)操作

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後(hou)需(xu)立即處(chu)理，避(bi)免(mian)長(chang)時間暴(bao)露於(yu)室溫(wen)或非(fei)營養環(huan)境。

- 使(shi)用無(wu)菌 PBS 或生理鹽水沖(chong)洗組(zu)織，去(qu)除血(xue)液(ye)、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇(ze)

- 根據組(zu)織類(lei)型選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免(mian)過度消(xiao)化(hua)導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時間需(xu)嚴格控(kong)制(zhi)（通(tong)常 10-30 分鐘），可(ke)通過顯微鏡觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離狀(zhuang)態。

二、培養條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使(shi)用含(han)血(xue)清或特(te)定生長(chang)因(yin)子的(de)培養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分細(xi)胞(bao)需(xu)添加(jia)胰(yi)島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁更換(huan)培養基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批(pi)次(ci)，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應壓力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼(tie)壁能力較弱，可(ke)能需(xu)要包被(bei)培養皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋(dan)白(bai)、多聚賴氨酸）。

- 傳代時密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度匯合會導(dao)致(zhi)接(jie)觸抑(yi)制(zhi)和分化。

三、汙(wu)染控(kong)制(zhi)

1. 無(wu)菌操作

- 全程在超(chao)凈(jing)臺操作，使(shi)用壹(yi)次(ci)性耗材(cai)，避(bi)免(mian)交(jiao)叉汙(wu)染。

- 培養基(ji)中(zhong)可添加(jia)雙(shuang)抗，但長(chang)期使(shi)用可(ke)能影響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支原體(ti)檢測

- 定期檢測支原體(ti)汙(wu)染（如(ru) PCR 法(fa)），汙(wu)染後(hou)需(xu)及時丟棄(qi)細(xi)胞(bao)。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度(du)及培養基(ji)顏色(se)，及時更換(huan)培養基(ji)（通(tong)常每 2-3 天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態（如(ru)細(xi)胞(bao)變圓、碎(sui)片增(zeng)多）可能提(ti)示(shi)汙(wu)染或(huo)營(ying)養不(bu)足(zu)。

2. 傳代與凍存

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂次(ci)數(shu)有限(xian)（壹(yi)般 5-10 代(dai)），需(xu)及時凍存早(zao)期(qi)代次(ci)細(xi)胞(bao)。

- 凍存液(ye)建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍(dong)存培養基(ji)），梯(ti)度降(jiang)溫(wen)後(hou)液(ye)氮(dan)保存。