【概要(yao)描述】大(da)鼠(shu)陰道(dao)壁成纖(xian)維(wei)細胞(bao)公司正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產品：NCI-H28間皮瘤(liu)G422小鼠(shu)腦(nao)神經膠質母細(xi)胞(bao)GC-1 spg小鼠(shu)精原(yuan)細胞(bao)系GC-2 SPd(ts)小鼠(shu)精母(mu)細(xi)胞(bao)系GL-261小鼠(shu)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)瘤(liu)GL-261+luc小鼠(shu)膠(jiao)質(zhi)細(xi)胞(bao)瘤(liu)熒光酶(mei)標(biao)記(ji)GT1-1小鼠(shu)垂體瘤(liu)細胞(bao)H22小鼠(shu)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao)HC11小鼠(shu)乳(ru)腺(xian)上(shang)皮(pi)細(xi)胞(bao)HEPA1-6小鼠(shu)肝(gan)癌(ai)細(xi)胞(bao)

本公(gong)司所有產品僅(jin)供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗，不做其他科學(xue)實(shi)驗外的使(shi)用！

大(da)鼠(shu)陰道(dao)壁成纖(xian)維(wei)分離(li)自(zi)陰道(dao)組織；陰道(dao)位於(yu)膀(pang)胱(guang)、尿道(dao)和(he)直腸之(zhi)間(jian)，是(shi)壹(yi)個(ge)富(fu)有彈(dan)性的管(guan)狀器官(guan)。它(ta)在(zai)人(ren)類(lei)生(sheng)殖(zhi)過程(cheng)中(zhong)具有多種生(sheng)理功(gong)能，是(shi)連(lian)接子宮與外陰的通道(dao)，是(shi)排出(chu)月(yue)經血、娩出(chu)嬰(ying)兒(er)的必(bi)經之(zhi)路(lu)，也(ye)是(shi)壹(yi)個(ge)重(zhong)要(yao)的性交器官(guan)。陰道(dao)壁按(an)組織學(xue)由外(wai)到(dao)內分(fen)三層(ceng)，即黏膜層(ceng)、肌層(ceng)和(he)外膜。1）黏膜層(ceng)由上(shang)皮(pi)和(he)固有膜組成。上(shang)皮(pi)較(jiao)厚，為(wei)復層(ceng)鱗狀上(shang)皮(pi)，從(cong)基(ji)底層(ceng)到表(biao)層(ceng)由基(ji)底(di)層(ceng)、旁基底(di)層(ceng)、中間(jian)層(ceng)和(he)表層(ceng)組成。沒(mei)有角化(hua)層(ceng)。陰道(dao)粘(zhan)膜的基(ji)底(di)層(ceng)呈細(xi)波(bo)紋(wen)狀起(qi)伏(fu)。2）肌層(ceng)由平(ping)滑(hua)肌組織構成，肌束排列不(bu)規則(ze)，縱(zong)行和(he)環(huan)形互相交錯(cuo)。肌束間有較(jiao)多的結(jie)締組織和(he)彈(dan)性纖(xian)維(wei)。陰道(dao)外(wai)口有環(huan)形的橫(heng)紋(wen)肌稱(cheng)括約(yue)肌。3）外(wai)膜層(ceng)為(wei)纖(xian)維(wei)膜，由結(jie)締組織構成，內(nei)含(han)豐(feng)富的彈(dan)性纖(xian)維(wei)、靜脈(mai)叢(cong)、淋巴管(guan)和(he)神經。大鼠(shu)陰道(dao)壁成纖(xian)維(wei)主要(yao)分(fen)離(li)自外(wai)膜層(ceng)，成纖(xian)維(wei)細胞(bao)（Fibroblast）是疏松結(jie)締組織的主要(yao)細(xi)胞(bao)成分(fen)，由胚胎(tai)時(shi)期的間(jian)充(chong)質(zhi)細胞(bao)分化而來(lai)。成纖(xian)維(wei)細胞(bao)較(jiao)大(da)，輪廓清(qing)楚，多為(wei)突(tu)起(qi)的紡(fang)錘(chui)形或(huo)星(xing)形的扁(bian)平(ping)狀結(jie)構，其細胞(bao)核呈規(gui)則(ze)的卵(luan)圓(yuan)形，核仁大而明(ming)顯。成纖(xian)維(wei)細胞(bao)功(gong)能活動旺(wang)盛(sheng)，細(xi)胞(bao)質嗜弱堿性，具(ju)明(ming)顯的蛋(dan)白(bai)質合成和(he)分泌活動，在(zai)壹(yi)定(ding)條(tiao)件下，它(ta)可以實現(xian)跟(gen)纖(xian)維(wei)細胞(bao)的互相轉化(hua)；成纖(xian)維(wei)細胞(bao)對不同(tong)程(cheng)度(du)的細(xi)胞(bao)變(bian)性、壞死和(he)組織缺(que)損的修(xiu)復有著十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)的作(zuo)用(yong)。
方(fang)法(fa)簡(jian)介(jie)：

公(gong)司實(shi)驗室分離的大(da)鼠(shu)陰道(dao)壁成纖(xian)維(wei)采用(yong)yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原(yuan)酶(mei)混合消(xiao)化(hua)法(fa)結(jie)合差(cha)速(su)貼壁法(fa)制(zhi)備(bei)而來(lai)，細(xi)胞(bao)總(zong)量約(yue)為(wei)5×10?cells/瓶(ping)。
質(zhi)量(liang)檢(jian)測：

公(gong)司實(shi)驗室分離的大(da)鼠(shu)陰道(dao)壁成纖(xian)維(wei)經Vimentin免(mian)疫(yi)熒光鑒定，純(chun)度(du)可達(da)90%以上(shang)，且(qie)不(bu)含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支(zhi)原(yuan)體、細菌(jun)、酵(jiao)母和(he)真菌等(deng)。

培(pei)養基(ji) 含(han)FBS、生(sheng)長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液頻(pin)率(lv) 每(mei)2-3天(tian)換液壹(yi)次

生(sheng)長特(te)性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形態(tai) 成纖(xian)維(wei)細胞(bao)樣

傳(chuan)代(dai)特性 可傳(chuan)3-5代(dai)左(zuo)右；3代(dai)以內狀態(tai)

消(xiao)化(hua)液(ye) 0.25%yi蛋(dan)白(bai)酶(mei)

培(pei)養條(tiao)件 氣(qi)相：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗器材(cai)準(zhun)備(bei)：準(zhun)備(bei)無菌的培(pei)養皿(min)、培(pei)養瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器械等，並(bing)進行(xing)高(gao)壓(ya)滅菌(jun)或其他合適的消(xiao)毒處(chu)理。

2. 試劑準(zhun)備(bei)：配(pei)制(zhi)或(huo)購(gou)買(mai)合適的培(pei)養基(ji)、消(xiao)化(hua)酶(mei)（如(ru)、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛血(xue)清(qing)、雙抗(kang)等試劑，確保(bao)其無菌且在(zai)有效(xiao)期內。

3. 實(shi)驗動物或組織來(lai)源(yuan)準(zhun)備(bei)：根(gen)據(ju)實驗需求，選(xuan)擇合適的動(dong)物(wu)並進行(xing)相應的麻(ma)醉或(huo)處死(si)，獲(huo)取所需(xu)組織；或從(cong)已(yi)有的組織樣本庫(ku)中獲(huo)取組織。

取(qu)材(cai)與處理

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無菌條件下，迅速(su)取出(chu)目標(biao)組織，盡量(liang)減(jian)少對組織的損傷(shang)，並(bing)去除(chu)多余(yu)的脂(zhi)肪、結(jie)締組織等非(fei)目(mu)的組織。

2. 清(qing)洗(xi)：將取(qu)出(chu)的組織用預冷(leng)的無菌PBS沖洗(xi)數次，以去除(chu)血(xue)液和(he)雜質(zhi)。

3. 剪(jian)切：將組織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小塊(kuai)，以便後(hou)續(xu)消(xiao)化(hua)。

細(xi)胞(bao)分離

1. 消(xiao)化(hua)：將(jiang)剪(jian)碎的組織塊放(fang)入含(han)有適量(liang)消(xiao)化(hua)酶(mei)的離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫(wen)搖床或(huo)培(pei)養箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化(hua)壹(yi)段(duan)時(shi)間。期間可輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管(guan)，使(shi)消(xiao)化(hua)更(geng)均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)：當(dang)組織塊大(da)部分被(bei)消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞(bao)懸液或小細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消(xiao)化(hua)。

3. 過(guo)濾(lv)與離心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細胞(bao)懸液，去除(chu)未(wei)消(xiao)化(hua)的組織碎片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以適當(dang)的轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集(ji)細胞(bao)沈澱。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察與檢測(ce)

1. 日(ri)常觀(guan)察：每(mei)天(tian)用倒置(zhi)顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)的形態(tai)、生(sheng)長狀態(tai)、密度等，記(ji)錄細胞(bao)的變(bian)化情(qing)況(kuang)，如發現細胞(bao)汙染(ran)或異常，及時采取(qu)相應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數與活力檢測：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可采(cai)用臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色等(deng)方(fang)法(fa)對細胞(bao)進行(xing)計(ji)數和(he)活力檢測，以了解細胞(bao)的生(sheng)長情(qing)況(kuang)和(he)健康(kang)狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與分離(li)

1. 快(kuai)速(su)操作

- 組織取材(cai)後需(xu)立即(ji)處(chu)理，避免長時(shi)間(jian)暴(bao)露(lu)於(yu)室溫(wen)或非(fei)營養(yang)環(huan)境。

- 使(shi)用無菌 PBS 或生(sheng)理鹽水沖(chong)洗(xi)組織，去除(chu)血(xue)液、雜質(zhi)。

2. 消(xiao)化(hua)酶(mei)選(xuan)擇

- 根(gen)據(ju)組織類型選(xuan)擇消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化(hua)導致細胞(bao)損傷(shang)。

- 消(xiao)化(hua)時(shi)間(jian)需嚴格控制(zhi)（通常 10-30 分鐘(zhong)），可通過顯微(wei)鏡(jing)觀(guan)察細(xi)胞(bao)解離狀態(tai)。

二、培(pei)養條(tiao)件優化

1. 培(pei)養基(ji)選(xuan)擇

- 使(shi)用含(han)血(xue)清(qing)或(huo)特(te)定(ding)生(sheng)長因子的培(pei)養基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細(xi)胞(bao)需添加(jia)胰島素、EGF 等。

- 避(bi)免(mian)頻(pin)繁(fan)更(geng)換培(pei)養基(ji)品(pin)牌(pai)或批次，減(jian)少(shao)細胞(bao)適應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與傳(chuan)代(dai)

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)貼壁能力較(jiao)弱(ruo)，可能需(xu)要(yao)包被(bei)培(pei)養皿(min)（如(ru)膠原(yuan)蛋白、多聚賴氨酸）。

- 傳(chuan)代(dai)時密度建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會導致接觸抑制(zhi)和(he)分化。

三(san)、汙(wu)染(ran)控制(zhi)

1. 無菌操作

- 全程(cheng)在(zai)超(chao)凈(jing)臺操作，使(shi)用壹(yi)次性耗(hao)材(cai)，避免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

- 培(pei)養基(ji)中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗(kang)，但長期使(shi)用可能影(ying)響細胞(bao)活性。

2. 支(zhi)原(yuan)體檢測(ce)

- 定(ding)期檢測支(zhi)原(yuan)體汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙(wu)染(ran)後需(xu)及(ji)時(shi)丟棄細(xi)胞(bao)。

四(si)、狀態(tai)監控(kong)

1. 日(ri)常觀(guan)察

- 每(mei)天(tian)檢查細(xi)胞(bao)形態(tai)、密度及培(pei)養基(ji)顏(yan)色(se)，及時更(geng)換培(pei)養基(ji)（通常每(mei) 2-3 天(tian)換液壹(yi)次）。

- 異常形態(tai)（如細(xi)胞(bao)變(bian)圓、碎片(pian)增(zeng)多）可能提(ti)示(shi)汙染(ran)或營(ying)養(yang)不(bu)足。

2. 傳(chuan)代(dai)與凍存

- 原(yuan)代(dai)細胞(bao)分裂(lie)次數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及時凍存早(zao)期代(dai)次細(xi)胞(bao)。

- 凍存液建(jian)議(yi)使(shi)用 DMSO+血(xue)清(qing)（或(huo)專(zhuan)用(yong)凍存培(pei)養基(ji)），梯(ti)度(du)降溫(wen)後液(ye)氮保(bao)存。