【概(gai)要(yao)描述(shu)】大鼠(shu)羊(yang)膜上皮(pi)細胞公(gong)司正在出售(shou)的產(chan)品(pin)：HT-144黑(hei)瘤(liu)豬(zhu)肺微(wei)血(xue)管(guan)內皮(pi)細胞豬(zhu)II型肺泡上(shang)皮(pi)細胞豬(zhu)肺成纖維細胞豬(zhu)心肌(ji)成纖維細胞豬(zhu)主動(dong)脈內皮(pi)細胞豬(zhu)主動(dong)脈平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞豬(zhu)頸動(dong)脈平(ping)滑(hua)肌(ji)細胞豬(zhu)主動(dong)脈瓣膜間(jian)質(zhi)細胞豬(zhu)小腸(chang)黏膜上(shang)皮(pi)細胞

大鼠(shu)羊(yang)膜上皮(pi)分(fen)離自胎(tai)盤(pan)組(zu)織；胎(tai)盤(pan)（placenta）是哺乳動(dong)物(wu)妊(ren)娠(shen)期(qi)間(jian)由胚胎(tai)的(de)胚膜和母體子(zi)宮(gong)內(nei)膜聯(lian)合長成的(de)母(mu)子(zi)間(jian)交換(huan)物(wu)質(zhi)的(de)過渡(du)性(xing)器(qi)官，由羊膜(mo)、葉(ye)狀絨毛(mao)膜(mo)和底(di)蛻膜(mo)構(gou)成。胎(tai)兒在子(zi)宮(gong)中(zhong)發(fa)育，依(yi)靠(kao)胎(tai)盤(pan)從(cong)母(mu)體取(qu)得營養(yang)，而(er)雙方(fang)保(bao)持(chi)相(xiang)當(dang)的(de)獨(du)立(li)性(xing)。胎(tai)盤(pan)還產(chan)生多(duo)種(zhong)維持(chi)妊娠(shen)的激素(su)，是(shi)壹(yi)個重要(yao)的內(nei)分(fen)泌(mi)器官。有些爬行類(lei)和魚類(lei)也(ye)以胎生方(fang)式(shi)繁殖後代，胚(pei)胎(tai)生長出壹(yi)些輔(fu)助結構(gou)如卵黃(huang)囊、鰓(sai)絲(si)等(deng)與母(mu)體組(zu)織緊密結合，以(yi)達(da)到(dao)母(mu)子(zi)間(jian)物(wu)質(zhi)的(de)交換(huan)，這(zhe)樣(yang)的結構(gou)稱假(jia)胎盤(pan)。羊(yang)膜(mo)是胎(tai)盤(pan)的(de)最(zui)內層(ceng)，與眼(yan)結膜(mo)組(zu)織結構(gou)相(xiang)似(si)，含有眼(yan)表(biao)上(shang)皮(pi)細胞，包(bao)括(kuo)結膜(mo)細胞和角膜上(shang)皮(pi)細胞生長所需要(yao)的物(wu)質(zhi)，其光滑(hua)，無(wu)血(xue)管(guan)、神經(jing)及淋巴(ba)，具有壹(yi)定(ding)的(de)彈性(xing)；在(zai)電鏡下(xia)，其分(fen)為(wei)五層(ceng)：上皮(pi)層(ceng)、基底(di)膜、致(zhi)密層(ceng)、纖維母(mu)細胞層(ceng)和海綿層(ceng)，羊膜基底(di)膜和羊膜羊膜(mo)基質(zhi)層(ceng)含有大量不(bu)同的膠元，主要(yao)為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠(jiao)原和纖維粘(zhan)連蛋白(bai)、層(ceng)粘連蛋白(bai)等(deng)成份。羊膜細胞主(zhu)要(yao)由羊膜(mo)上(shang)皮(pi)細胞和羊膜間(jian)充(chong)質細胞組(zu)成，均具有多分(fen)化潛能，可轉(zhuan)化為神(shen)經(jing)元，且(qie)還有合成(cheng)、釋(shi)放(fang)生物(wu)活性(xing)物(wu)質(zhi)和神經(jing)營養(yang)因子(zi)的功(gong)能。
方法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司實驗室分(fen)離的大鼠(shu)羊(yang)膜上皮(pi)采用(yong)yi蛋白(bai)酶(mei)-膠原(yuan)酶(mei)混合消(xiao)化法結合差(cha)速(su)貼壁法，並通(tong)過(guo)上皮(pi)細胞專(zhuan)用(yong)培養(yang)基培養(yang)篩(shai)選制備(bei)而(er)來，細胞總量約(yue)為5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司實驗室分(fen)離的大鼠(shu)羊(yang)膜上皮(pi)經(jing)Cytokeratin-18免疫(yi)熒(ying)光鑒定(ding)，純(chun)度(du)可達(da)90%以(yi)上，且(qie)不(bu)含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真(zhen)菌(jun)等(deng)。

本(ben)公(gong)司所有產(chan)品(pin)僅供(gong)科學(xue)實驗，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實驗外的(de)使用(yong)！

包(bao)被(bei)條(tiao)件(jian) 鼠(shu)尾(wei)膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yang)基 含FBS、生長添加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天換(huan)液(ye)壹(yi)次(ci)

生長特性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態 上皮(pi)細胞樣(yang)

傳代(dai)特性(xing) 可傳(chuan)1-2代

消化液(ye) 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相(xiang)：空氣(qi)，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗器材(cai)準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌(jun)的(de)培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶、移(yi)液(ye)管(guan)、離心管(guan)、手術(shu)器械等(deng)，並進(jin)行(xing)高壓(ya)滅菌(jun)或(huo)其他(ta)合適(shi)的(de)消(xiao)毒(du)處理(li)。

2. 試劑(ji)準(zhun)備：配制或(huo)購(gou)買合適(shi)的(de)培養(yang)基、消(xiao)化酶(mei)（如、膠原(yuan)酶(mei)等(deng)）、胎牛(niu)血清、雙抗等(deng)試劑(ji)，確保(bao)其無(wu)菌(jun)且(qie)在(zai)有效(xiao)期(qi)內。

3. 實驗動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織來(lai)源準(zhun)備：根據實驗需求，選擇(ze)合適(shi)的(de)動(dong)物(wu)並進(jin)行(xing)相(xiang)應的(de)麻(ma)醉(zui)或處死，獲取(qu)所(suo)需組(zu)織；或(huo)從已(yi)有的組(zu)織樣(yang)本(ben)庫中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材(cai)與(yu)處理(li)

1. 取(qu)材(cai)：在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標(biao)組(zu)織，盡(jin)量減少(shao)對組(zu)織的(de)損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余的脂肪(fang)、結締(di)組(zu)織等(deng)非(fei)目的組(zu)織。

2. 清洗(xi)：將取(qu)出(chu)的(de)組(zu)織用(yong)預冷的無(wu)菌(jun)PBS沖(chong)洗(xi)數次(ci)，以去除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將(jiang)組(zu)織剪(jian)成約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便後續消(xiao)化。

細胞分(fen)離

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放入(ru)含有適(shi)量(liang)消(xiao)化酶(mei)的離心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖床或培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消(xiao)化壹(yi)段(duan)時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕(qing)輕(qing)搖晃離心管(guan)，使消(xiao)化更均勻。

2. 終止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織塊(kuai)大部分(fen)被(bei)消化成單細胞懸液(ye)或小(xiao)細胞團(tuan)時(shi)，加(jia)入(ru)含血清的培養(yang)基終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與離心：用(yong)細胞篩(shai)過濾(lv)細胞懸液(ye)，去除(chu)未(wei)消化的組(zu)織碎(sui)片(pian)，然(ran)後將濾(lv)液(ye)以適(shi)當(dang)的(de)轉(zhuan)速(su)離心，收(shou)集(ji)細胞沈澱(dian)。

細胞觀(guan)察(cha)與(yu)檢測(ce)

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用(yong)倒置(zhi)顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞的(de)形態(tai)、生長狀態(tai)、密度(du)等(deng)，記錄細胞的(de)變化情況(kuang)，如發(fa)現細胞汙染或異常(chang)，及時(shi)采取(qu)相(xiang)應措(cuo)施(shi)。
2. 細胞計數與(yu)活力檢測(ce)：在(zai)需要(yao)時(shi)，可采用(yong)臺盼(pan)藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方法(fa)對細胞進(jin)行(xing)計數和活力檢測(ce)，以(yi)了(le)解細胞的(de)生長情況(kuang)和健康狀態(tai)。

壹(yi)、取(qu)材(cai)與(yu)分(fen)離

1. 快(kuai)速操作(zuo)

- 組(zu)織取(qu)材(cai)後需立即處理(li)，避免長時(shi)間(jian)暴(bao)露於室溫或非(fei)營養環境(jing)。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織，去(qu)除(chu)血(xue)液(ye)、雜(za)質。

2. 消化酶(mei)選擇(ze)

- 根據組(zu)織類(lei)型選擇(ze)消(xiao)化酶(mei)，避免過(guo)度(du)消化導(dao)致細胞損(sun)傷。

- 消化時(shi)間(jian)需嚴格控(kong)制（通(tong)常(chang) 10-30 分(fen)鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯微(wei)鏡觀察(cha)細胞解離狀態(tai)。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化

1. 培養(yang)基選擇(ze)

- 使用(yong)含血清或特定(ding)生長因子(zi)的培養(yang)基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分(fen)細胞需添加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避免頻(pin)繁更換(huan)培養(yang)基品(pin)牌或(huo)批次(ci)，減少(shao)細胞適(shi)應壓(ya)力。

2. 貼壁(bi)與傳代(dai)

- 原代(dai)細胞貼(tie)壁能力較(jiao)弱(ruo)，可能需要(yao)包(bao)被(bei)培養(yang)皿(min)（如膠原(yuan)蛋白(bai)、多(duo)聚賴(lai)氨酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密度(du)建(jian)議(yi)控制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯(hui)合會(hui)導(dao)致接(jie)觸抑(yi)制和分(fen)化。

三、汙染控制

1. 無(wu)菌(jun)操作(zuo)

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操作(zuo)，使用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)耗(hao)材(cai)，避免交叉汙染。

- 培養(yang)基中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗，但長期(qi)使用(yong)可能影(ying)響(xiang)細胞活性(xing)。

2. 支原體檢測(ce)

- 定(ding)期(qi)檢測(ce)支原體汙染（如 PCR 法），汙染後需及時(shi)丟(diu)棄細胞。

四、狀態監控

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天(tian)檢查細胞形(xing)態、密度(du)及培養(yang)基顏色，及時(shi)更(geng)換培養(yang)基（通(tong)常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次(ci)）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細胞變(bian)圓、碎(sui)片(pian)增(zeng)多(duo)）可能提(ti)示(shi)汙染或營養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與凍存

- 原代(dai)細胞分(fen)裂(lie)次數有限（壹(yi)般(ban) 5-10 代(dai)），需及時(shi)凍(dong)存早(zao)期(qi)代次(ci)細胞。

- 凍存液(ye)建(jian)議(yi)使用(yong) DMSO+血清（或專(zhuan)用(yong)凍存培養(yang)基），梯(ti)度(du)降溫後液(ye)氮(dan)保(bao)存。