【概(gai)要描(miao)述】大鼠腦(nao)微(wei)血管(guan)周細胞(bao)公(gong)司正(zheng)在(zai)出(chu)售的產(chan)品(pin)：Snu-1人(ren)胃(wei)癌細胞小(xiao)鼠胚(pei)胎(tai)成(cheng)骨(gu)細胞(bao)前體(ti)細(xi)胞(bao)MC3T3-E1（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)急(ji)性T淋(lin)巴細胞(bao)白(bai)血(xue)病細(xi)胞Jurkat，CloneE6-1 (STR鑒(jian)定正確(que))小(xiao)鼠肺(fei)癌(ai)細胞(bao)紅(hong)色(se)熒(ying)光(guang)LLC+RFP（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定）人(ren)骨(gu)肉瘤(liu)細(xi)胞(bao)帶(dai)熒(ying)光(guang)素(su)酶(mei)143B+LUC(STR鑒(jian)定正確(que))小(xiao)鼠海(hai)馬神經元(yuan)細(xi)胞(bao) HT22（種(zhong)屬(shu)鑒(jian)定）小(xiao)鼠肺(fei)泡(pao)上皮細胞 MLE-12（種屬(shu)鑒(jian)定）小(xiao)鼠腎(shen)小(xiao)球系膜(mo)細胞(bao)SV40

大鼠腦(nao)微(wei)血管(guan)周分離(li)自腦(nao)微血管(guan)；大腦(nao)分左(zuo)右(you)兩(liang)個(ge)半球(qiu)，大腦(nao)皮質(zhi)（灰(hui)質(zhi)）覆(fu)蓋著(zhe)每個(ge)大腦(nao)半球(qiu)的大部(bu)分，它(ta)是神經元(yuan)胞(bao)體(ti)集(ji)中(zhong)的地(di)方。內部則(ze)是(shi)由(you)神經纖(xian)維(wei)或(huo)髓鞘(qiao)構成(cheng)的白(bai)質(zhi)。每壹個(ge)半球(qiu)都(dou)有(you)三個(ge)面(mian)，即(ji)外側面（約(yue)占整個(ge)皮質(zhi)面(mian)積的1/3）、內側面和(he)底(di)面(mian)（占2/3的面(mian)積）；半球(qiu)表(biao)面有(you)很(hen)多深淺(qian)不等(deng)的溝(gou)或(huo)裂，溝(gou)或(huo)裂之(zhi)間的隆(long)起(qi)叫回，它們大大增(zeng)加了大腦(nao)的表(biao)面積；大腦(nao)外側面重(zhong)要(yao)的溝(gou)、裂有(you)大腦(nao)外側裂、頂枕(zhen)裂和中(zhong)央溝(gou)。由(you)於三溝(gou)裂之(zhi)界隔，使大腦(nao)皮質(zhi)組(zu)分為(wei)額(e)葉(ye)、頂(ding)葉(ye)、顳葉、枕(zhen)葉四(si)大部(bu)分。周細胞(bao)（pericyte）又稱(cheng)Rouget細胞和壁(bi)細(xi)胞(bao)，是壹種(zhong)包(bao)圍(wei)全(quan)身(shen)毛細血(xue)管(guan)和(he)靜(jing)脈(mai)中(zhong)內皮細胞的細(xi)胞(bao)，可(ke)以(yi)收(shou)縮。周細胞(bao)嵌(qian)入毛細血管(guan)內皮細胞的基(ji)膜(mo)中，通(tong)過(guo)物理接(jie)觸(chu)和(he)旁(pang)分泌(mi)信(xin)號(hao)與(yu)內皮細胞進(jin)行細胞(bao)通(tong)訊，監視(shi)和(he)穩定內皮細胞的成(cheng)熟(shu)過程(cheng)。此外，周細胞(bao)還(hai)具有(you)調控毛細(xi)血管(guan)血(xue)流(liu)量(liang)、細胞(bao)碎(sui)屑(xie)清除(chu)和(he)吞噬以(yi)及(ji)血腦(nao)屏(ping)障(zhang)滲透性的作用，其多功能(neng)性是目前研究的熱(re)點之(zhi)壹，所(suo)以(yi)對(dui)血管(guan)周細胞(bao)的生物學(xue)特(te)征、標記(ji)物、細(xi)胞功能(neng)等(deng)的研究都(dou)為(wei)相關研究提(ti)供基(ji)礎(chu)資(zi)料(liao)。周細胞(bao)產(chan)生手(shou)指(zhi)狀的外延(yan)以(yi)調(tiao)控毛細(xi)血管(guan)的血(xue)流(liu)量(liang)。周細胞(bao)和(he)內皮細胞之(zhi)間共(gong)同擁有(you)壹個(ge)基(ji)膜(mo)，基(ji)膜(mo)上有(you)多種細胞連(lian)接(jie)，包(bao)括多種整合(he)素(su)、神經鈣黏素(su)、纖(xian)連(lian)蛋白(bai)以(yi)及(ji)接(jie)合(he)素(su)。它(ta)還(hai)參(can)與(yu)毛(mao)細(xi)血(xue)管(guan)直(zhi)徑的雙向調控；毛細(xi)血管(guan)受損時(shi)，周細胞(bao)還(hai)可增殖，分化(hua)為(wei)內皮細胞和成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)。
方(fang)法(fa)簡介(jie)：

公(gong)司實驗室分離(li)的大鼠腦(nao)微(wei)血管(guan)周采用(yong)中(zhong)性dan白(bai)酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)聯(lian)合(he)消化法(fa)制(zhi)備而(er)來(lai)，細胞(bao)總(zong)量(liang)約為(wei)5×10?cells/瓶。
質(zhi)量(liang)檢測(ce)：

公(gong)司實驗室分離(li)的大鼠腦(nao)微(wei)血管(guan)周經α-SMA免(mian)疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純度(du)可(ke)達(da)90%以(yi)上，且不含(han)有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和(he)真菌等(deng)。

本公(gong)司所(suo)有(you)產(chan)品(pin)僅供科(ke)學(xue)實驗，不(bu)做其他科(ke)學(xue)實驗外的使(shi)用(yong)！

包(bao)被條件(jian) PLL（0.1mg/ml）

培養(yang)基(ji) 含(han)FBS、生長添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等(deng)

換(huan)液頻率(lv) 每2-3天(tian)換(huan)液壹次(ci)

生長特(te)性 貼(tie)壁

細(xi)胞(bao)形(xing)態 成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)樣(yang)

傳代(dai)特(te)性 可(ke)傳3-5代(dai)左(zuo)右(you)；3代(dai)以(yi)內狀態

消化液 0.25%yi蛋白(bai)酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準(zhun)備工(gong)作

1. 實驗器(qi)材準(zhun)備：準(zhun)備無(wu)菌的培養(yang)皿(min)、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液(ye)管(guan)、離(li)心管(guan)、手(shou)術器(qi)械等(deng)，並(bing)進(jin)行高(gao)壓(ya)滅(mie)菌或(huo)其他合(he)適的消毒(du)處理。

2. 試(shi)劑準(zhun)備：配(pei)制(zhi)或(huo)購買合(he)適的培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛血(xue)清(qing)、雙抗等(deng)試(shi)劑，確(que)保其(qi)無菌(jun)且在(zai)有(you)效期內。

3. 實驗動(dong)物或(huo)組(zu)織來(lai)源(yuan)準(zhun)備：根(gen)據實驗需(xu)求(qiu)，選擇(ze)合(he)適的動(dong)物並(bing)進(jin)行相應的麻(ma)醉或(huo)處死(si)，獲(huo)取(qu)所(suo)需(xu)組(zu)織；或(huo)從(cong)已(yi)有(you)的組(zu)織樣(yang)本庫(ku)中(zhong)獲(huo)取(qu)組(zu)織。

取(qu)材與(yu)處理

1. 取(qu)材：在(zai)無菌條件下，迅速(su)取出(chu)目標組(zu)織，盡(jin)量(liang)減(jian)少對(dui)組(zu)織的損(sun)傷(shang)，並去(qu)除(chu)多余的脂(zhi)肪(fang)、結締組(zu)織等(deng)非(fei)目的組(zu)織。

2. 清(qing)洗：將取出(chu)的組(zu)織用(yong)預冷(leng)的無(wu)菌(jun)PBS沖洗數(shu)次(ci)，以(yi)去(qu)除(chu)血液和雜(za)質(zhi)。

3. 剪(jian)切(qie)：將組(zu)織剪(jian)成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的小(xiao)塊(kuai)，以(yi)便(bian)後(hou)續消化。

細(xi)胞(bao)分離(li)

1. 消化：將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織塊(kuai)放(fang)入含(han)有(you)適量(liang)消化酶(mei)的離(li)心管(guan)中(zhong)，在(zai)37℃恒(heng)溫搖(yao)床(chuang)或(huo)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)消化壹段(duan)時(shi)間。期間可(ke)輕(qing)輕(qing)搖(yao)晃離(li)心管(guan)，使(shi)消化更(geng)均勻。

2. 終止消化：當組(zu)織塊(kuai)大部(bu)分被消化成(cheng)單(dan)細胞(bao)懸(xuan)液或(huo)小(xiao)細胞(bao)團時(shi)，加(jia)入含(han)血清(qing)的培養(yang)基(ji)終止消化。

3. 過(guo)濾與離(li)心：用細(xi)胞篩過濾細胞懸(xuan)液，去(qu)除(chu)未消化的組(zu)織碎(sui)片，然(ran)後(hou)將濾液以(yi)適(shi)當的轉速(su)離(li)心，收集(ji)細胞(bao)沈(chen)澱(dian)。

細(xi)胞(bao)觀(guan)察(cha)與檢測(ce)

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)：每天(tian)用(yong)倒(dao)置(zhi)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)的形(xing)態、生長狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細胞(bao)的變化情況(kuang)，如發現(xian)細(xi)胞汙染(ran)或(huo)異(yi)常(chang)，及(ji)時(shi)采(cai)取相應措(cuo)施。
2. 細(xi)胞(bao)計數(shu)與活(huo)力檢測(ce)：在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)，可(ke)采用臺(tai)盼藍(lan)染(ran)色(se)等(deng)方(fang)法(fa)對(dui)細胞(bao)進(jin)行計數(shu)和活(huo)力檢測(ce)，以(yi)了解細(xi)胞的生長情況(kuang)和健康(kang)狀態。

壹、取(qu)材與(yu)分離(li)

1. 快速(su)操作

- 組(zu)織取(qu)材後(hou)需(xu)立(li)即(ji)處理，避(bi)免長(chang)時(shi)間暴(bao)露於(yu)室溫或(huo)非(fei)營(ying)養(yang)環境(jing)。

- 使(shi)用(yong)無(wu)菌 PBS 或(huo)生理鹽水(shui)沖洗組(zu)織，去(qu)除(chu)血液、雜質(zhi)。

2. 消化酶(mei)選擇(ze)

- 根(gen)據組(zu)織類(lei)型(xing)選擇(ze)消化酶(mei)，避(bi)免過(guo)度(du)消化導(dao)致(zhi)細(xi)胞(bao)損(sun)傷(shang)。

- 消化時(shi)間需(xu)嚴格控制(zhi)（通(tong)常(chang) 10-30 分鐘(zhong)），可通(tong)過(guo)顯微鏡(jing)觀(guan)察(cha)細胞(bao)解離(li)狀態。

二(er)、培養(yang)條(tiao)件(jian)優(you)化(hua)

1. 培養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使(shi)用(yong)含(han)血清(qing)或(huo)特(te)定生長因子的培養(yang)基(ji)（如(ru) DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部(bu)分細(xi)胞需(xu)添(tian)加(jia)胰(yi)島(dao)素(su)、EGF 等(deng)。

- 避(bi)免頻繁更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品(pin)牌(pai)或(huo)批次(ci)，減(jian)少細胞適應壓(ya)力。

2. 貼(tie)壁與(yu)傳代(dai)

- 原代(dai)細胞(bao)貼(tie)壁能(neng)力較弱(ruo)，可(ke)能(neng)需(xu)要(yao)包(bao)被培養(yang)皿(min)（如(ru)膠(jiao)原蛋白(bai)、多聚賴(lai)氨酸(suan)）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建議控制(zhi)在(zai) 70%-80%，過度(du)匯(hui)合(he)會導(dao)致(zhi)接(jie)觸(chu)抑(yi)制(zhi)和分化(hua)。

三(san)、汙染(ran)控制(zhi)

1. 無(wu)菌(jun)操作

- 全(quan)程(cheng)在(zai)超凈臺(tai)操作，使用壹次(ci)性耗材，避(bi)免交叉(cha)汙染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中(zhong)可添(tian)加(jia)雙抗，但(dan)長(chang)期使(shi)用可(ke)能(neng)影響細(xi)胞(bao)活(huo)性。

2. 支(zhi)原體(ti)檢測(ce)

- 定期檢測(ce)支原體(ti)汙染(ran)（如(ru) PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需(xu)及(ji)時(shi)丟(diu)棄(qi)細(xi)胞。

四(si)、狀態監(jian)控

1. 日(ri)常(chang)觀(guan)察(cha)

- 每天(tian)檢查細胞(bao)形(xing)態、密(mi)度(du)及(ji)培養(yang)基(ji)顏色(se)，及(ji)時(shi)更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常(chang)每 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異(yi)常(chang)形(xing)態（如(ru)細胞變圓、碎(sui)片增多）可能(neng)提(ti)示汙染(ran)或(huo)營(ying)養(yang)不(bu)足(zu)。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存

- 原代(dai)細胞(bao)分裂次(ci)數(shu)有(you)限(xian)（壹般(ban) 5-10 代），需(xu)及(ji)時(shi)凍(dong)存早期代(dai)次(ci)細胞(bao)。

- 凍(dong)存液建議使(shi)用 DMSO+血清（或(huo)專(zhuan)用凍(dong)存培養(yang)基(ji)），梯(ti)度(du)降(jiang)溫(wen)後(hou)液氮(dan)保存。