【概(gai)要描述(shu)】大(da)鼠(shu)下腔(qiang)靜脈內(nei)皮細胞(bao)公司正(zheng)在出(chu)售(shou)的(de)產(chan)品：COLO 829黑(hei)瘤(liu)兔腮(sai)腺(xian)細(xi)胞(bao)兔成(cheng)纖維(wei)細胞(bao)兔睪(gao)丸支持細(xi)胞(bao)兔海(hai)綿體(ti)平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)兔卵(luan)巢(chao)顆粒(li)細胞(bao)兔卵(luan)巢(chao)間(jian)質細(xi)胞(bao)兔輸(shu)卵(luan)管上皮細胞(bao)兔輸(shu)卵(luan)管平(ping)滑(hua)肌細(xi)胞(bao)兔子(zi)宮內(nei)膜上皮細胞(bao)

大鼠(shu)下腔(qiang)靜脈內(nei)皮分離自下腔(qiang)靜脈組(zu)織(zhi)；下(xia)腔(qiang)靜脈是(shi)體(ti)內(nei)最(zui)大(da)的(de)靜脈，收集下(xia)肢、盆部和腹(fu)部的靜脈血(xue)。下(xia)腔(qiang)靜脈由(you)左(zuo)、右(you)髂總(zong)靜脈匯(hui)合而(er)成(cheng)，匯(hui)合部位多(duo)在第(di)5腰椎水平(ping)，少(shao)數平(ping)第(di)4腰椎。下腔(qiang)靜脈位(wei)於(yu)脊(ji)柱的右(you)前(qian)方(fang)，沿腹主(zhu)動(dong)脈的(de)右(you)側上行，經(jing)肝(gan)的(de)腔(qiang)靜脈溝、穿(chuan) 膈的(de)腔(qiang)靜脈孔，開口於(yu)右(you)心房(fang)。下(xia)腔(qiang)靜脈的(de)前(qian)面(mian)有肝(gan)、胰頭(tou)、十二指腸水(shui)平(ping)部、右(you)睪丸動(dong)脈及(ji)小(xiao)腸系(xi)膜根越(yue)過。後(hou)面(mian)為(wei)有膈腳(jiao)、第(di)1～4腰椎、有腰交感幹和腹(fu)主動(dong)脈的(de)壁支。右(you)側與(yu) 腰大肌、右(you)腎、右(you)腎上腺(xian)相(xiang)鄰(lin)，左側(ce)為(wei)腹主動(dong)脈。下(xia)腔(qiang)靜脈的(de)屬支有髂(qia)總(zong)靜脈、右(you)睪丸靜脈、腎(shen)靜脈、右(you)腎上腺(xian)靜脈、肝(gan)靜脈、膈(ge)下(xia)靜脈和腰靜脈，其中大部分 屬支與(yu)同(tong)名動(dong)脈伴(ban)行。
方(fang)法簡介(jie)：

公司實(shi)驗室分離的(de)大(da)鼠(shu)下腔(qiang)靜脈內(nei)皮采用yi蛋白酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)聯合消化法結合差(cha)速貼壁(bi)法、並通過(guo)內(nei)皮細胞(bao)專用(yong)培(pei)養基(ji)培(pei)養(yang)篩選制備(bei)而(er)來，細(xi)胞(bao)總(zong)量約為(wei)5×10?cells/瓶。
質量(liang)檢(jian)測：

公司實(shi)驗室分離的(de)大(da)鼠(shu)下腔(qiang)靜脈內(nei)皮經(jing)CD31免疫熒光(guang)鑒定，純(chun)度(du)可達(da)90%以上，且不含有(you)HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵母和真(zhen)菌等。

本(ben)公司所(suo)有產(chan)品僅供科學實(shi)驗，不做(zuo)其他(ta)科學實(shi)驗外的(de)使(shi)用！

包被條(tiao)件(jian) PLL（0.1mg/ml），明膠(jiao)（0.1%）

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長(chang)添(tian)加(jia)劑、Penicillin、Streptomycin等

換液(ye)頻(pin)率 每2-3天換液(ye)壹(yi)次

生長(chang)特性(xing) 貼壁(bi)

細胞(bao)形(xing)態 內(nei)皮細胞(bao)樣

傳代(dai)特性(xing) 可傳2-3代

消化液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件(jian) 氣相：空(kong)氣，95%；CO2，5%

準備(bei)工(gong)作

1. 實(shi)驗器材準(zhun)備(bei)：準備(bei)無菌的培養(yang)皿(min)、培養瓶、移(yi)液管、離心管、手(shou)術器(qi)械(xie)等(deng)，並進(jin)行高壓(ya)滅菌或其他(ta)合適的消毒處(chu)理(li)。

2. 試劑準備：配制或(huo)購(gou)買(mai)合適的培養(yang)基(ji)、消化酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等(deng)）、胎(tai)牛(niu)血清、雙抗等試(shi)劑，確(que)保(bao)其無菌且在有(you)效期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗動(dong)物(wu)或(huo)組織來源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗需(xu)求，選擇(ze)合適的動(dong)物(wu)並進(jin)行相應的麻醉或處(chu)死(si)，獲(huo)取所(suo)需(xu)組織(zhi)；或(huo)從已有的(de)組(zu)織樣本(ben)庫中獲(huo)取組織。

取材與(yu)處(chu)理(li)

1. 取材：在(zai)無菌條件(jian)下，迅速取出(chu)目(mu)標組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少(shao)對(dui)組(zu)織(zhi)的損(sun)傷，並去(qu)除(chu)多(duo)余的脂(zhi)肪、結締組織(zhi)等非(fei)目(mu)的(de)組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取出(chu)的(de)組(zu)織(zhi)用(yong)預冷(leng)的(de)無菌PBS沖(chong)洗(xi)數次，以去(qu)除血(xue)液(ye)和雜(za)質。

3. 剪切(qie)：將組織(zhi)剪成(cheng)約(yue)1 - 2mm³的(de)小(xiao)塊(kuai)，以便(bian)後續(xu)消化。

細胞(bao)分離

1. 消化：將剪碎(sui)的(de)組織(zhi)塊放入(ru)含(han)有適量消化酶(mei)的(de)離(li)心管中，在37℃恒溫搖床或(huo)培養(yang)箱(xiang)中消化壹(yi)段時(shi)間(jian)。期(qi)間(jian)可輕輕(qing)搖晃(huang)離(li)心管，使消化更均勻(yun)。

2. 終(zhong)止(zhi)消化：當(dang)組(zu)織(zhi)塊(kuai)大部分被消化成(cheng)單細胞(bao)懸(xuan)液或小(xiao)細(xi)胞(bao)團時，加(jia)入(ru)含(han)血清的培(pei)養基(ji)終(zhong)止(zhi)消化。

3. 過濾(lv)與(yu)離(li)心：用(yong)細(xi)胞(bao)篩過濾細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，去除未(wei)消化的組織(zhi)碎片(pian)，然後(hou)將濾液(ye)以適當(dang)的(de)轉(zhuan)速離心，收集細(xi)胞(bao)沈澱(dian)。

細胞(bao)觀察(cha)與(yu)檢(jian)測

1. 日常(chang)觀察(cha)：每(mei)天用倒(dao)置顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)的形(xing)態、生(sheng)長(chang)狀態、密(mi)度(du)等(deng)，記(ji)錄(lu)細(xi)胞(bao)的變化情況，如發(fa)現(xian)細胞(bao)汙染或異常(chang)，及時(shi)采(cai)取相應措施。
2. 細胞(bao)計數與(yu)活力(li)檢(jian)測：在(zai)需(xu)要時，可采用(yong)臺(tai)盼藍(lan)染色等(deng)方(fang)法對(dui)細(xi)胞(bao)進行計數和活力(li)檢(jian)測，以了(le)解細(xi)胞(bao)的生(sheng)長(chang)情況和健(jian)康狀態。

壹(yi)、取材與(yu)分離

1. 快速操(cao)作

- 組織(zhi)取材後(hou)需(xu)立即(ji)處(chu)理(li)，避免長(chang)時間(jian)暴(bao)露於(yu)室溫或(huo)非(fei)營養(yang)環境(jing)。

- 使用(yong)無菌 PBS 或生理(li)鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除(chu)血液、雜質。

2. 消化酶(mei)選擇(ze)

- 根據(ju)組(zu)織(zhi)類(lei)型(xing)選擇(ze)消化酶(mei)，避免過(guo)度消化導致細(xi)胞(bao)損傷(shang)。

- 消化時間(jian)需(xu)嚴格(ge)控(kong)制（通常(chang) 10-30 分鐘），可通過(guo)顯(xian)微(wei)鏡(jing)觀察(cha)細(xi)胞(bao)解離(li)狀(zhuang)態。

二、培養條件(jian)優化

1. 培養(yang)基(ji)選擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血(xue)清或特定(ding)生長(chang)因子(zi)的(de)培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等(deng)），部分細胞(bao)需(xu)添加(jia)胰(yi)島素(su)、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁更換培(pei)養基品牌或(huo)批次，減少(shao)細(xi)胞(bao)適應壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與(yu)傳(chuan)代(dai)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)能力(li)較弱(ruo)，可能需(xu)要包被培(pei)養皿(min)（如膠(jiao)原蛋(dan)白、多(duo)聚(ju)賴(lai)氨(an)酸）。

- 傳代(dai)時(shi)密(mi)度(du)建(jian)議(yi)控(kong)制(zhi)在 70%-80%，過度匯合會導(dao)致(zhi)接觸(chu)抑制和分化。

三、汙染控制(zhi)

1. 無菌操(cao)作

- 全程(cheng)在超(chao)凈(jing)臺(tai)操(cao)作，使用(yong)壹(yi)次性耗(hao)材，避免交(jiao)叉(cha)汙染。

- 培養(yang)基(ji)中可添加(jia)雙(shuang)抗，但(dan)長(chang)期(qi)使(shi)用可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞(bao)活性。

2. 支原體(ti)檢(jian)測

- 定期(qi)檢(jian)測支原體(ti)汙染（如 PCR 法(fa)），汙染後需(xu)及時(shi)丟(diu)棄細胞(bao)。

四、狀態監(jian)控

1. 日常(chang)觀察(cha)

- 每天檢(jian)查細(xi)胞(bao)形(xing)態、密(mi)度(du)及(ji)培(pei)養(yang)基(ji)顏(yan)色，及(ji)時更換培(pei)養基（通常(chang)每 2-3 天換液(ye)壹(yi)次）。

- 異常(chang)形(xing)態（如細(xi)胞(bao)變圓、碎片(pian)增(zeng)多(duo)）可能提示汙染或營養(yang)不(bu)足。

2. 傳代(dai)與(yu)凍(dong)存(cun)

- 原代(dai)細(xi)胞(bao)分裂(lie)次數有限（壹(yi)般 5-10 代），需(xu)及時(shi)凍(dong)存(cun)早期(qi)代(dai)次細胞(bao)。

- 凍(dong)存(cun)液(ye)建(jian)議使用(yong) DMSO+血(xue)清（或專(zhuan)用凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基），梯(ti)度(du)降(jiang)溫後(hou)液(ye)氮保(bao)存。