【概(gai)要(yao)描(miao)述】大(da)鼠(shu)頜骨成(cheng)纖(xian)維細胞公(gong)司(si)正(zheng)在(zai)出(chu)售(shou)的產(chan)品：A101D黑瘤(liu)小鼠(shu)鞏(gong)膜(mo)上(shang)皮(pi)細(xi)胞小(xiao)鼠(shu)視(shi)網膜(mo)mulller細胞小(xiao)鼠(shu)牙齦(yin)成(cheng)纖維細胞小(xiao)鼠(shu)結膜囊(nang)成纖(xian)維細胞小(xiao)鼠(shu)牙齦(yin)上(shang)皮(pi)細(xi)胞小(xiao)鼠(shu)鞏(gong)膜(mo)成纖維細胞小(xiao)鼠(shu)視(shi)網膜(mo)微血(xue)管周(zhou)細胞小(xiao)鼠(shu)鼻(bi)腔粘膜上(shang)皮(pi)細(xi)胞小(xiao)鼠(shu)眼外(wai)肌成(cheng)纖(xian)維細胞

本公(gong)司(si)所(suo)有產(chan)品僅供(gong)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)，不做(zuo)其他(ta)科(ke)學(xue)實(shi)驗(yan)外(wai)的使(shi)用(yong)！

大鼠(shu)頜骨成(cheng)纖(xian)維分(fen)離(li)自(zi)頜骨組(zu)織(zhi)；頜骨，是指(zhi)頜部(bu)的骨頭(tou)，分(fen)為上(shang)頜(he)骨和下(xia)頜骨。構成口腔上(shang)下(xia)部(bu)的骨頭(tou)和肌肉組(zu)織，上(shang)部(bu)叫上(shang)頜(he)，下(xia)部(bu)叫下(xia)頜。成(cheng)纖維細胞（Fibroblast）是疏松(song)結締組織的主(zhu)要(yao)細(xi)胞成(cheng)分(fen)，由胚(pei)胎(tai)時期的間(jian)充質細胞分(fen)化而來(lai)。成纖維細胞較(jiao)大，輪廓清楚(chu)，多(duo)為突(tu)起(qi)的紡(fang)錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的扁(bian)平狀結構，其細(xi)胞核(he)呈規(gui)則的卵(luan)圓(yuan)形(xing)，核(he)仁大(da)而明顯(xian)。成纖(xian)維細胞功(gong)能(neng)活(huo)動(dong)旺盛(sheng)，細(xi)胞質嗜弱堿性，具(ju)明顯(xian)的蛋白質合(he)成和分(fen)泌活(huo)動(dong)，在(zai)壹(yi)定條(tiao)件下(xia)，它可以實(shi)現跟(gen)纖(xian)維細胞的互(hu)相轉(zhuan)化(hua)；成纖維細胞對(dui)不同(tong)程度(du)的細(xi)胞變(bian)性(xing)、壞(huai)死和組織(zhi)缺(que)損(sun)的修(xiu)復(fu)有著(zhe)十(shi)分(fen)重(zhong)要(yao)的作用(yong)。剛(gang)分(fen)離(li)的表(biao)皮(pi)成(cheng)纖維細胞呈圓形、折光性良(liang)好(hao)，懸浮於培(pei)養(yang)基(ji)中。30min細(xi)胞貼壁(bi)，其(qi)中(zhong)部(bu)分(fen)開(kai)始(shi)伸(shen)出偽(wei)足，表現(xian)為小(xiao)的突(tu)起(qi)；6h後細(xi)胞基(ji)本(ben)貼壁(bi)wan全，伸(shen)展成梭(suo)形(xing)，胞核(he)清(qing)晰(xi)，分(fen)布較(jiao)均勻(yun)，散(san)在(zai)生長，不聚(ju)集成(cheng)團；細(xi)胞生長迅速(su)，5-7天(tian)即(ji)呈融合(he)狀態(tai)，細(xi)胞排列緊密，有的交叉重(zhong)疊(die)生長，平(ping)坦(tan)、胞體(ti)較(jiao)大，細胞質透明，細胞核(he)較(jiao)大，呈橢圓形，顏色(se)淡(dan)。細(xi)胞融(rong)合(he)，並彼(bi)此連接成(cheng)網狀(zhuang)；細胞呈突(tu)起(qi)的紡(fang)錘(chui)形(xing)或星(xing)形(xing)的扁(bian)平分(fen)布。
方(fang)法(fa)簡(jian)介：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)頜(he)骨成(cheng)纖(xian)維采用(yong)yi蛋白酶(mei)-膠(jiao)原酶(mei)混(hun)合(he)酶消(xiao)化(hua)後差(cha)速(su)貼壁(bi)制(zhi)備而來(lai)，細胞總(zong)量(liang)約(yue)為5×10?cells/瓶(ping)。
質量檢測(ce)：

公(gong)司(si)實(shi)驗(yan)室(shi)分(fen)離(li)的大(da)鼠(shu)頜(he)骨成(cheng)纖(xian)維經Vimentin免疫(yi)熒(ying)光(guang)鑒(jian)定，純度(du)可達90%以(yi)上(shang)，且不含(han)有HIV-1、HBV、HCV、支原體(ti)、細菌(jun)、酵(jiao)母(mu)和真菌(jun)等。

培養(yang)基(ji) 含FBS、生長添(tian)加(jia)劑(ji)、Penicillin、Streptomycin等

換(huan)液頻(pin)率 每(mei)2-3天換(huan)液壹次(ci)

生長特性(xing) 貼壁(bi)

細胞形(xing)態(tai) 成纖(xian)維細胞樣(yang)

傳代特性(xing) 可傳5代左(zuo)右；3代以內(nei)狀(zhuang)態(tai)

消化(hua)液 0.25%yi蛋白酶(mei)

培養(yang)條(tiao)件 氣相：空(kong)氣(qi)，95%；CO2，5%

準備工(gong)作

1. 實(shi)驗(yan)器(qi)材準備：準備無(wu)菌(jun)的培(pei)養(yang)皿、培養(yang)瓶(ping)、移(yi)液管、離(li)心(xin)管、手術器械(xie)等，並進(jin)行高壓(ya)滅(mie)菌(jun)或(huo)其(qi)他合(he)適的消(xiao)毒(du)處理。

2. 試(shi)劑(ji)準備：配(pei)制或購買合(he)適的培(pei)養(yang)基(ji)、消化(hua)酶(mei)（如、膠(jiao)原酶(mei)等）、胎(tai)牛血(xue)清、雙(shuang)抗(kang)等試(shi)劑(ji)，確(que)保其無(wu)菌(jun)且在有效(xiao)期(qi)內(nei)。

3. 實(shi)驗(yan)動(dong)物(wu)或(huo)組(zu)織(zhi)來(lai)源(yuan)準備：根(gen)據實(shi)驗(yan)需求，選(xuan)擇(ze)合(he)適的動(dong)物(wu)並(bing)進(jin)行(xing)相應(ying)的麻(ma)醉或處死，獲取(qu)所(suo)需組織(zhi)；或(huo)從(cong)已(yi)有的組(zu)織(zhi)樣(yang)本庫中(zhong)獲(huo)取組織。

取材與處理

1. 取材：在無(wu)菌(jun)條(tiao)件下(xia)，迅速(su)取(qu)出(chu)目(mu)標組織(zhi)，盡量(liang)減(jian)少對(dui)組織(zhi)的損(sun)傷，並(bing)去(qu)除多余(yu)的脂(zhi)肪(fang)、結締組織等非目(mu)的組(zu)織(zhi)。

2. 清洗(xi)：將取出(chu)的組(zu)織(zhi)用(yong)預冷的無(wu)菌(jun)PBS沖洗數次(ci)，以去(qu)除血(xue)液和雜質。

3. 剪切(qie)：將組織(zhi)剪(jian)成約1 - 2mm³的小(xiao)塊，以便(bian)後(hou)續消化(hua)。

細胞分(fen)離(li)

1. 消化(hua)：將剪碎(sui)的組(zu)織(zhi)塊放入(ru)含有適(shi)量(liang)消化(hua)酶的離(li)心(xin)管中，在(zai)37℃恒溫(wen)搖(yao)床(chuang)或培(pei)養(yang)箱(xiang)中消(xiao)化壹(yi)段(duan)時間。期(qi)間(jian)可輕輕(qing)搖(yao)晃離(li)心(xin)管，使消(xiao)化更(geng)均(jun)勻(yun)。

2. 終(zhong)止消化(hua)：當(dang)組(zu)織塊大部(bu)分(fen)被消(xiao)化(hua)成單(dan)細胞懸(xuan)液或小細胞團(tuan)時，加(jia)入(ru)含血(xue)清的培(pei)養(yang)基(ji)終(zhong)止消化(hua)。

3. 過(guo)濾與離(li)心(xin)：用(yong)細(xi)胞篩過(guo)濾細(xi)胞懸(xuan)液，去(qu)除未消(xiao)化(hua)的組(zu)織(zhi)碎(sui)片，然(ran)後(hou)將濾液以適當(dang)的轉(zhuan)速(su)離(li)心(xin)，收(shou)集細(xi)胞沈澱。

細胞觀察與檢測(ce)

1. 日常(chang)觀察：每(mei)天(tian)用(yong)倒(dao)置顯(xian)微鏡觀察細(xi)胞的形(xing)態(tai)、生長狀(zhuang)態、密度(du)等，記錄(lu)細胞的變(bian)化(hua)情(qing)況(kuang)，如發(fa)現細胞汙(wu)染(ran)或(huo)異常(chang)，及時采取(qu)相應(ying)措施(shi)。
2. 細胞計(ji)數(shu)與活力(li)檢(jian)測：在需要時，可采用(yong)臺盼藍(lan)染(ran)色(se)等方(fang)法(fa)對(dui)細胞進(jin)行(xing)計(ji)數(shu)和活力(li)檢測，以(yi)了(le)解(jie)細胞的生長情(qing)況(kuang)和健康狀態。

壹、取(qu)材與分(fen)離(li)

1. 快(kuai)速(su)操(cao)作

- 組織(zhi)取材後需立即(ji)處理，避(bi)免長時間暴(bao)露於(yu)室(shi)溫或(huo)非營養(yang)環(huan)境。

- 使用(yong)無(wu)菌(jun) PBS 或(huo)生理鹽(yan)水沖洗組織，去(qu)除血(xue)液、雜質。

2. 消化(hua)酶選(xuan)擇(ze)

- 根(gen)據組織(zhi)類(lei)型(xing)選(xuan)擇(ze)消(xiao)化(hua)酶(mei)，避(bi)免過(guo)度(du)消化(hua)導(dao)致細(xi)胞損(sun)傷。

- 消化(hua)時間需嚴格控制(zhi)（通(tong)常 10-30 分(fen)鐘），可通(tong)過(guo)顯(xian)微鏡觀察細(xi)胞解(jie)離(li)狀(zhuang)態(tai)。

二、培(pei)養(yang)條(tiao)件優化

1. 培養(yang)基(ji)選(xuan)擇(ze)

- 使用(yong)含(han)血(xue)清或(huo)特定生長因(yin)子的培(pei)養(yang)基(ji)（如 DMEM、RPMI 1640 等），部(bu)分(fen)細胞需添(tian)加(jia)胰島(dao)素、EGF 等。

- 避免頻(pin)繁更(geng)換(huan)培養(yang)基(ji)品牌(pai)或批(pi)次(ci)，減少細(xi)胞適(shi)應(ying)壓(ya)力(li)。

2. 貼壁(bi)與傳代

- 原代細胞貼壁(bi)能(neng)力(li)較(jiao)弱，可能需要包被培養(yang)皿（如膠(jiao)原蛋白、多(duo)聚(ju)賴氨酸(suan)）。

- 傳代時密度(du)建議控(kong)制在(zai) 70%-80%，過(guo)度(du)匯合(he)會導(dao)致接(jie)觸(chu)抑(yi)制和分(fen)化。

三、汙(wu)染(ran)控(kong)制

1. 無(wu)菌(jun)操(cao)作

- 全程在超(chao)凈(jing)臺操作，使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性耗(hao)材，避免交叉汙(wu)染(ran)。

- 培養(yang)基(ji)中可添(tian)加(jia)雙(shuang)抗(kang)，但(dan)長期(qi)使用(yong)可能影(ying)響(xiang)細(xi)胞活(huo)性(xing)。

2. 支原體(ti)檢測(ce)

- 定期(qi)檢測支原體(ti)汙染(ran)（如 PCR 法(fa)），汙染(ran)後(hou)需及時丟棄細胞。

四、狀(zhuang)態監(jian)控(kong)

1. 日常(chang)觀察

- 每(mei)天(tian)檢查細胞形(xing)態(tai)、密(mi)度(du)及培(pei)養(yang)基(ji)顏色(se)，及時更換(huan)培養(yang)基(ji)（通(tong)常每(mei) 2-3 天(tian)換(huan)液壹次(ci)）。

- 異常(chang)形態(tai)（如細(xi)胞變(bian)圓(yuan)、碎(sui)片增多(duo)）可能提示(shi)汙(wu)染(ran)或(huo)營養(yang)不足。

2. 傳代與凍存(cun)

- 原代細胞分(fen)裂次(ci)數有限(xian)（壹(yi)般(ban) 5-10 代），需及時凍存(cun)早(zao)期代次(ci)細胞。

- 凍存(cun)液建議使(shi)用(yong) DMSO+血(xue)清（或(huo)專用(yong)凍(dong)存(cun)培(pei)養(yang)基(ji)），梯度(du)降溫(wen)後液氮(dan)保存(cun)。